一种紫杉醇制剂的提取纯化方法
【技术领域】
[0001]本发明属于医药技术领域，尤其是涉及一种紫杉醇制剂的提取纯化方法。
【背景技术】
[0002]紫杉醇是存在于天然植物甜菊叶中的五环三萜类化合物，具有广泛的生物活性，且毒性极小，副作用少，成为当前国内外研宄开发的热点。紫杉醇为白色结晶体粉末，无臭、无味，难溶于水，易溶于氯仿、丙酮等有机溶剂。紫杉醇具有独特的抗肿瘤作用，紫杉醇主要适用于卵巢癌和乳腺癌，对肺癌、大肠癌、黑色素瘤、头颈部癌、淋巴瘤、脑瘤也都有一定疗效。
[0003]目前紫杉醇主要从红豆杉植物中提取，在红豆杉科植物红豆杉的干燥根、枝叶以及树皮中均含有紫杉醇，但是含量较低，约为树皮干重的0.01 %。红豆杉是世界上公认濒临灭绝的天然珍稀抗癌植物，是经过了第四纪冰川遗留下来的古老孑遗树种，在地球上已有250万年的历史，但是自然条件下红豆杉生长速度缓慢，再生能力差，因此，提高红豆杉中紫杉醇的回收率显得非常必要。
【发明内容】
[0004]为解决上述技术问题，本发明提供一种紫杉醇制剂的提取纯化方法。
[0005]本发明通过下述技术方案予以实现。
[0006]一种紫杉醇制剂的提取纯化方法，包括以下步骤:
[0007]步骤一，将红豆杉枝叶树皮洗净，低温干燥后粉碎，用丙酮-乙酸乙酯混合液进行浸提，0-5°C条件下放置8-10小时，过滤的滤液；
[0008]步骤二，将滤液至于0_5°C条件下进行减压浓缩，得到粗浸膏，将粗浸膏溶于温水中形成浸膏液，向浸膏液中加入乙酸乙酯进行多次萃取，合并萃取液，将萃取液减压浓缩，得粗提取物；
[0009]步骤三，将粗提取物用三氯甲烷进行溶解，加入到已活化的碱性氧化铝固定相柱中，抽干，先用三氯甲烷淋洗并抽干，然后用三氯甲烷和甲醇的混合淋洗剂淋洗并抽干，再用三氯甲烷和甲醇的混合洗脱剂洗脱，将收集的洗脱液减压浓缩，得到提取物半成品；
[0010]步骤四，将得到的提取物半成品用乙腈溶解，用高压液相色谱分离，色谱柱为C18硅胶填料，流动相为乙腈和水，而后将分离后含紫杉醇的流动相进行蒸发，干燥，得到高纯度紫杉醇。
[0011]优选的，步骤一中低温干燥的温度是50-60°C，粉碎成粉末的大小为50-100目。
[0012]优选的，步骤二中温水的水温为30_40°C，粗浸膏与温水的体积比为1:2-2.5。
[0013]优选的，步骤二中用于萃取的乙酸乙酯与粗浸膏体积比为1:2.5-3ο
[0014]优选的，步骤三种用于溶解粗提取物的三氯甲烷质量为粗提取物的10-12倍，粗提取物溶液在碱性氧化铝固定相柱中的停留时间为30-40分钟。
[0015]本发明具有的优点和积极效果是:采用工艺，采用低温浸提，极大地保护了紫杉醇，使其在分离过程中不发生转化，紫杉醇作为一种生物大分子物质，受温度、有机溶剂、酸、碱等环境条件的影响，易降解或异构生成其它紫杉烷类物质；温度较高时也会发生降解反应，生成相应的小分子物质。用碱性氧化铝固定相柱层析进行提取，可以除去大量的亲水性物质、脂质物质，提高紫杉醇的回收率并提高所得紫杉醇的纯度。
【具体实施方式】
[0016]下面通过具体实施例对本发明的技术方案进行进一步说明。
[0017]实施例1:
[0018]步骤一，将红豆杉枝叶树皮洗净，500C条件进行干燥，干燥后粉碎至50目，用丙酮-乙酸乙酯混合液进行浸提，4°C条件下放置8小时，过滤的滤液。
[0019]步骤二，将滤液至于4°C条件下进行减压浓缩，得到粗浸膏，将粗浸膏溶于30°C水中，粗浸膏与水的体积比为1:2，向水溶后的浸膏液中加入乙酸乙酯进行多次萃取，每次加入乙酸乙酯与粗浸膏体积比为1:2.5，合并乙酸乙酯萃取液，将萃取液减压浓缩，得粗提取物。
[0020]步骤三，将粗提取物用三氯甲烷进行溶解，三氯甲烷质量为粗提取物的10倍，加入到已活化的碱性氧化铝固定相柱中，抽干，先用三氯甲烷淋洗并抽干，然后用三氯甲烷和甲醇的混合淋洗剂淋洗并抽干，再用三氯甲烷和甲醇的混合洗脱剂洗脱，提取物溶液在碱性氧化铝固定相柱中的停留时间为30分钟，将收集的洗脱液减压浓缩，得到提取物半成品;
[0021]步骤四，将得到的提取物半成品用乙腈溶解，用高压液相色谱分离，色谱柱为C18硅胶填料，流动相为乙腈和水，而后将分离后含紫杉醇的流动相进行蒸发，干燥，得到高纯度紫杉醇。
[0022]实施例2:
[0023]步骤一，将红豆杉枝叶树皮洗净，60°C条件进行干燥，干燥后粉碎至100目，用丙酮-乙酸乙酯混合液进行浸提，4°C条件下放置10小时，过滤的滤液。
[0024]步骤二，将滤液至于4°C条件下进行减压浓缩，得到粗浸膏，将粗浸膏溶于40°C水中，粗浸膏与水的体积比为1:2.5，向水溶后的浸膏液中加入乙酸乙酯进行多次萃取，每次加入乙酸乙酯与粗浸膏体积比为1:3，合并乙酸乙酯萃取液，将萃取液减压浓缩，得粗提取物。
[0025]步骤三，将粗提取物用三氯甲烷进行溶解，三氯甲烷质量为粗提取物的12倍，加入到已活化的碱性氧化铝固定相柱中，抽干，先用三氯甲烷淋洗并抽干，然后用三氯甲烷和甲醇的混合淋洗剂淋洗并抽干，再用三氯甲烷和甲醇的混合洗脱剂洗脱，提取物溶液在碱性氧化铝固定相柱中的停留时间为40分钟，将收集的洗脱液减压浓缩，得到提取物半成品;
[0026]步骤四，将得到的提取物半成品用乙腈溶解，用高压液相色谱分离，色谱柱为C18硅胶填料，流动相为乙腈和水，而后将分离后含紫杉醇的流动相进行蒸发，干燥，得到高纯度紫杉醇。
[0027]以上对本发明做了示例性的描述，应该说明的是，在不脱离本发明的核心的情况下，任何简单的变形、修改或者其他本领域技术人员能够不花费创造性劳动的等同替换均落入本发明的保护范围。
【主权项】
1.一种紫杉醇制剂的提取纯化方法，其特征在于:包括以下步骤: 步骤一，将红豆杉枝叶树皮洗净，低温干燥后粉碎，用丙酮-乙酸乙酯混合液进行浸提，0-5°C条件下放置8-10小时，过滤得滤液； 步骤二，将所述滤液置于0-5°C条件下进行减压浓缩，得到粗浸膏，将所述粗浸膏溶于温水中形成浸膏液，向所述浸膏液中加入乙酸乙酯进行多次萃取，合并萃取液，将所述萃取液减压浓缩，得粗提取物； 步骤三，将所述粗提取物用三氯甲烷进行溶解，加入到已活化的碱性氧化铝固定相柱中，抽干，先用三氯甲烷淋洗并抽干，然后用三氯甲烷和甲醇的混合淋洗剂淋洗并抽干，再用三氯甲烷和甲醇的混合洗脱剂洗脱，将收集的洗脱液减压浓缩，得到提取物半成品； 步骤四，将所述提取物半成品用乙腈溶解，用高压液相色谱分离，色谱柱为C18硅胶填料，流动相为乙腈和水，而后将分离后含紫杉醇的流动相进行蒸发，干燥，得到高纯度紫杉醇。
2.根据权利要求1所述的紫杉醇制剂的提取纯化方法，其特征在于:所述步骤一中低温干燥的温度是50-60°C，粉碎成粉末的大小为50-100目。
3.根据权利要求1所述的紫杉醇制剂的提取纯化方法，其特征在于:所述步骤二中温水的水温为30-40°C，所述粗浸膏与所述温水的体积比为1:2-2.5。
4.根据权利要求1所述的紫杉醇制剂的提取纯化方法，其特征在于:所述步骤二中用于萃取的所述乙酸乙酯与所述粗浸膏体积比为1:2.5-3ο
5.根据权利要求1所述的紫杉醇制剂的提取纯化方法，其特征在于:所述步骤三种用于溶解所述粗提取物的三氯甲烷质量为所述粗提取物的10-12倍，所述粗提取物溶液在所述碱性氧化铝固定相柱中的停留时间为30-40分钟。
【专利摘要】本发明提供一种紫杉醇制剂的提取纯化方法，包括材料低温粉碎，低温浸提，温水除杂，有机溶剂萃取，高压液相色谱分离等步骤。本发明具有的有益效果是：能够极大地保护了紫杉醇，使其在分离过程中不发生转化，除去大量的亲水性物质、脂质物质的同时有效的保护紫杉醇不被讲解，提高紫杉醇的回收率并提高所得紫杉醇的纯度。
【IPC分类】C07D305-14
【公开号】CN104529952
【申请号】CN201410840611
【发明人】季延滨, 李涛
【申请人】芝圣（天津）生物科技有限公司
【公开日】2015年4月22日
【申请日】2014年12月30日