一种山羊角活性多肽的制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于山羊角蛋白深加工技术领域，涉及一种利用蛋白酶酶解山羊角蛋白制 备山羊角活性多肽的方法。
【背景技术】
[0002] 山羊角为牛科动物青羊（naemorhedusgoralHardwicke)、北山羊（capiraibex Linnaeus)的角。其首载于《本草新编》，日其："专活死血"。山羊角主要成分为蛋白质、磷 酸钙及微量的磷脂类成分和不溶性无机盐等。因山羊角主要成分与羚羊角类似，其功用近 似羚羊角，可作羚羊角的代用品。近年来，研宄发现山羊角具有明显的镇静、镇痛、解热、抗 惊厥和抗病毒作用，同时对心血管及平滑肌亦有作用。山羊角在内蒙地区广为存在，但大部 分山羊角因未得到充分利用被废弃，造成资源的浪费，同时给环境带来了严重的污染。
[0003] 目前，国内外关于山羊角深入加工利用的报导并不多见，大多将山羊角作为羚羊 角的替代品添加于中药制剂中具有镇痛解热作用，还有部分山羊角经打磨抛光后作为摆 件、一些道具的原料等，而山羊角中丰富的蛋白资源并未得到充分的利用，造成角蛋白资源 的浪费。
[0004] 山羊角蛋白是一种硬化、不易溶解的蛋白质，其中既含有酸性基（羧基-C00H)，又 含有碱性基（胺基--NH2、亚胺基=NH)，所以山羊角蛋白对酸、碱、盐、氧化剂、还原剂、卤素 等都有一定的不稳定性。山羊角蛋白质的大分子之间主要通过二硫键建立起稳定的结合， 从而构成不溶的蛋白质。可见，制取山羊角蛋白溶液，使其溶解的关键是使分子链间的二硫 键断裂。从现状看，国内外对山羊角蛋白的再生利用的研宄还处在初级阶段，在高附加值应 用研宄上，工艺还不够成熟，角蛋白工业化应用还有一定的距离。随着人们变废为宝观念的 深入，开展了对各种废弃资源回收利用的研宄，探索一条经济、高效、实用性强、应用价值高 的山羊角蛋白利用途径是对当前山羊角蛋白提取及应用的迫切需求。
[0005] 因此，寻求一种处理山羊角蛋白、提高其应用价值进而达到变废为宝、避免环境污 染是人们的一种客观需要。为了解决上述问题，本发明提供了一种山羊角多肽的制备方法。
【发明内容】
[0006] 本发明所要解决的技术问题是提供一种山羊角多肽及其制备方法，其包括以下步 骤：
[0007] (1)山羊角清洗；（2)粉碎；（3)山羊角蛋白提取；(4)酶解；（5)超滤；（6)干燥。
[0008] 其中，步骤（1)中采用转鼓清洗机对挑拣后山羊角进行清洗，山羊角与水的质量 比为1 : 2,转鼓清洗时间30min，重复清洗4遍；
[0009] 步骤（2)中清洗后山羊角晾晒后采用粉碎机粉碎；
[0010] 步骤（3)中采用双氧水和氢氧化钠溶液处理提取山羊角蛋白：称取山羊角粉碎 粉，加入20倍（w/v)浓度为15% (v/v)的H202,80°C下搅拌处理lh至山羊角粉碎粉完全 溶解；趁热过滤，将所得滤液在30°C_40°C下浓缩；向浓缩后滤液中加入山羊角粉20倍（w/ V) 1.Omol/L的氢氧化钠溶液，45°C条件下搅拌处理3h得山羊角蛋白粗溶液；将山羊角粗溶 液进行过滤、透析（10000-15000分子量的透析袋）并浓缩后得山羊角蛋白溶液；采用冰醋 酸调节山羊角蛋白溶液pH值至角蛋白等电点pH= 4-5左右使角蛋白沉淀析出；采用离心 机以离心处理去除上层清液，低温烘干得山羊角蛋白粉末。
[0011] 步骤（4)中酶解方式为加入酸性蛋白酶和木瓜蛋白酶，酸性蛋白酶的用量为山 羊角蛋白重量的1. 0%。-2. 0%。，优选为1. 5%。。木瓜蛋白酶的用量为山羊角蛋白重量的 1. 0%。-2. 0%。，优选为 1. 5%〇。
[0012] 步骤（6)中浓缩山羊角水解液相对密度为1.lg/ml-1. 3g/ml，采用的喷雾干燥条 件为进风温度为150°C-170°C，排风温度为65°C-85°C。
[0013] 与现有技术相比，本发明具有以下优点和有益效果：
[0014] (1)本发明中所得山羊角活性多肽含量达75%以上，产品呈淡黄色粉末，易于溶 解。
[0015] (2)本发明操作工艺简单，原材料易于取材且价格低廉，制备过程中反应条件易于 控制，生产成本相对低廉。实验中选用的两种酶制剂易于获得且价格低廉，适合工业化生 产。
[0016] (3)本发明充分利用山羊角蛋白，提高其利用价值达到变废为宝、保护环境的目 的，所得山羊角多肽可广泛应用于生物医药等领域。
【具体实施方式】
[0017] 下面详细叙述本发明的实施例，需要说明的是，本实施例是叙述性的，不是限定性 的，不能以此限定本发明的保护范围。
[0018] 比较实施1
[0019] 分别采用不同的酶进行酶解，比较酶解后色泽、水解度及多肽含量等变化情况，步 骤如下：
[0020] (1)山羊角清洗；(2)粉碎；（3)采用双氧水和氢氧化钠溶液处理提取山羊角蛋白； ⑷酶解；（5)超滤；(6)喷雾干燥，即得。
[0021] 步骤（4)中采用的酶及对应获得的产品如表中所示：
[0022]
【主权项】
1. 一种山羊角活性多肽的制备方法，包括以下步骤：（1)山羊角清洗；（2)粉碎；（3)山 羊角蛋白提取；(4)酶解；（5)过滤；(6)浓缩干燥，即得；其特征在于，步骤（4)中所用的酶 为酸性蛋白酶和木瓜蛋白酶。
2. 根据权利要求1所述的山羊角活性多肽的制备方法，其特征在于，所述的酸性蛋白 酶的用量为山羊角蛋白重量的1. 0%。-2. 0%。。
3. 根据权利要求2所述的山羊角活性多肽的制备方法，其特征在于，所述的酸性蛋白 酶的用量为山羊角蛋白重量的1. 5%。。
4. 根据权利要求1所述的山羊角活性多肽的制备方法，其特征在于，所述的木瓜蛋白 酶的用量为山羊角蛋白重量的1. 0%。-2. 0%。。
5. 根据权利要求4所述的山羊角活性多肽的制备方法，其特征在于，所述的木瓜蛋白 酶的用量为山羊角蛋白重量的1. 5%。。
6. 根据权利要求1所述的山羊角活性多肽的制备方法，其特征在于，步骤（3)中山羊角 蛋白提取方法为：采用双氧水和氢氧化钠溶液处理提取山羊角蛋白。
7. 根据权利要求6所述的山羊角活性多肽的制备方法，其特征在于，称取山羊角粉碎 粉，加入20倍（w/v)浓度为15% (v/v)的H202,80°C下搅拌处理lh至山羊角粉碎粉完全 溶解；趁热过滤，将所得滤液在30°C _40°C下浓缩；向浓缩后滤液中加入山羊角粉20倍（w/ v) 1. Omol/L的氢氧化钠溶液，45°C条件下搅拌处理3h得山羊角蛋白粗溶液；将山羊角粗溶 液进行过滤、透析（10000-15000分子量的透析袋）并浓缩后得山羊角蛋白溶液；采用冰醋 酸调节山羊角蛋白溶液pH值至角蛋白等电点pH = 4-5左右使角蛋白沉淀析出；采用离心 机以离心处理去除上层清液，低温烘干得山羊角蛋白粉末。
8. 根据权利要求1所述的山羊角活性多肽的制备方法，其特征在于，步骤（6)中浓缩液 相对密度为1. l〇g/ml-l. 30g/ml，采用的喷雾干燥条件为进风温度为150°C _170°C，排风温 度为65°C?85°C。
9. 一种山羊角活性多肽，其特征在于，该山羊角活性多肽是根据权利要求1-8任一项 所述的方法制备得到的。
【专利摘要】本发明提供一种山羊角活性多肽的制备方法，其包括以下步骤：(1)山羊角清洗；(2)粉碎；(3)山羊角蛋白提取；(4)酶解；(5)过滤；(6)浓缩干燥，即得；其中步骤(4)中所采用的酶解方式是加入酸性蛋白酶和木瓜蛋白酶。所得产品呈淡黄色固体粉末，易于溶解，且溶解速度较快。经取样、分析测试后，多肽含量达75.00％以上，所得山羊角活性多肽可应用于生物医药等领域。
【IPC分类】C07K14-47, C12P21-06, C07K1-34
【公开号】CN104531813
【申请号】CN201410699022
【发明人】林波, 于秀玲, 王欣, 孔新颖, 韩风雨
【申请人】内蒙古天奇生物科技有限公司, 内蒙古天奇中蒙制药股份有限公司, 内蒙古天奇药业投资（集团）有限公司
【公开日】2015年4月22日
【申请日】2014年11月23日