的测定按照中国药典中所描述的方法操作，气相色谱法的分 析条件为：聚乙二醇为固定液的石英毛细管柱（30mX0. 25mm，膜厚0. 25 ym)，FID检测器， 进样口温度250°C，检测器温度270°C;载气为N2，流速4ml/min，分流比3 :1;程序升温，初 始柱温190°C，保持4分钟，以每分钟2°C的速率升温至230°C，保持15分钟；进样量I y L ; 内标为二十一烷酸甲酯。
[0031] 所述的收集到的EPA酯和DHA酯产品取少量样品用乙醇溶解后，采用上述方法测 定其纯度。
[0032] 本发明回收率的计算方法如下：
[0033] 回收率=产品中EPA酯（或DHA酯）的质量+原料中EPA酯（或DHA酯）的质 量。
[0034] 与现有技术相比，本发明具有如下优点：
[0035] 1.流动相为超临界CO2，无需加入极性溶剂作为改性剂，避免了有机溶剂的使用；
[0036] 2.原料可以直接进样，不需要事先溶解在有机溶剂中，避免使用有机溶剂；
[0037] 3.产品馏分在旋风分离器减压后即可轻易地实现气液分离，不需要先使用有机溶 剂吸收溶质，然后热浓缩的过程，可避免溶剂的使用；
[0038] 4.使用富含苯环的反相色谱填料，这类填料对EPA酯和DHA酯的分离度大，因而单 次上载量大，纯度高，收集到的产品纯度在95%以上，适合工业化生产。
【附图说明】
[0039] 图1为实施例1中的紫外检测器在线检测的色谱流出曲线。
[0040] 图2为实施例1中EPA乙酯产品的气相色谱图。
[0041] 图3为实施例1中DHA乙酯产品的气相色谱图。
【具体实施方式】
[0042] 以下实例中所使用的反相树脂填料采用CN101445573B所述的悬浮聚合法制得， 其步骤为：将75g苯乙稀、5g二乙稀苯、0. 4g过氧化苯甲酰的混合液倒入IOOg去离子水和 0. 2g聚乙烯醇组成的水溶液中，然后在35°C下搅拌1小时，升温至80°C，保温1小时，加入 ImL十二烷基硫酸钠水溶液，保温1小时后升温至95°C，保温1小时后熟化使液滴变硬成 球，然后过滤、洗涤、烘干、过筛得到不同粒度的聚苯乙烯/二乙烯苯共聚白球。
[0043] 实施例1
[0044] 将聚苯乙烯/二乙烯苯型反相树脂填料（10y m，IOOA)置于甲醇中充分溶胀，然 后用湿法装柱法填装到的20X 250mm的色谱柱中。控制超临界色谱系统的温度40°C、压力 20MPa，超临界0)2的流速为3mL/min。上样4mL的混合多不饱和脂肪酸乙酯于色谱柱中，其 中混合多不饱和脂肪酸乙酯原料中EPA乙酯+DHA乙酯的总质量分数为65%。根据紫外检 测器在线检测的流出曲线分段收集高纯度的EPA乙酯和DHA乙酯部分。重复上样20次后， 在收集罐中取少量的EPA乙酯和DHA乙酯产品，气相色谱分析得EPA乙酯纯度为99. 6%， DHA乙酯的纯度为97.9%。用气相色谱定量分析后，计算得EPA酯的收率为73. 1%，DHA酯 的收率为77. 4%。
[0045] 紫外检测器在线检测的色谱流出曲线如图1所示，EPA乙酯产品、DHA乙酯产品的 气相色谱图如图2、3所示。
[0046] 实施例2
[0047] 将聚苯乙烯/二乙烯苯型反相树脂填料（20 ym,丨OOA )置于甲醇中充分溶胀，然 后用湿法装柱法填装到的10X250mm的色谱柱中。控制超临界色谱系统的温度50°C、压力 lOMPa，超临界0) 2的流速为2mL/min。上样2mL的混合多不饱和脂肪酸乙酯于色谱柱中，其 中混合多不饱和脂肪酸乙酯原料中EPA乙酯+DHA乙酯的总质量分数为80%。根据紫外检 测器在线检测的流出曲线分段收集高纯度的EPA乙酯和DHA乙酯部分。重复上样20次后， 在收集罐中取少量的EPA乙酯和DHA乙酯产品，气相色谱分析得EPA乙酯纯度为99. 5%， DHA乙酯的纯度为98. 8 %。用气相色谱定量分析后，计算得EPA酯的收率为74. 3 %，DHA酯 的收率为78. 5%。
[0048] 实施例3
[0049] 将Kromasil 100-10-Phenyl型苯基娃胶填料（10 ym，l〇〇A )置于甲醇中超声分 散，然后用湿法装柱法填装到的10 X 150_的色谱柱中。控制超临界色谱系统的温度40°C、 压力20MPa，超临界0)2的流速为2mL/min。上样2mL的混合多不饱和脂肪酸甲酯于色谱 柱中，其中混合多不饱和脂肪酸甲酯原料中EPA甲酯+DHA甲酯的总质量分数为65%。根 据紫外检测器在线检测的流出曲线分段收集高纯度的EPA甲酯和DHA甲酯部分。重复上 样20次后，在收集罐中取少量的EPA甲酯和DHA甲酯产品，气相色谱分析得EPA甲酯纯度 为99. 6%，DHA甲酯的纯度为97. 9%。用气相色谱定量分析后，计算得EPA甲酯的收率为 83. 5%，DHA甲酯的收率为87. 1%。
[0050] 实施例4
[0051]将Kromasil 100-16-Phenyl苯基娃胶填料（16 ym，IOOA)置于甲醇中超声分散， 然后用湿法装柱法填装到的10X250mm的色谱柱中。控制超临界色谱系统的温度50°C、压 力lOMPa，超临界0)2的流速为3mL/min。上样4mL的混合多不饱和脂肪酸甲酯于色谱柱中， 其中混合多不饱和脂肪酸甲酯原料中EPA甲酯+DHA甲酯的总质量分数为80%。根据紫外检 测器在线检测的流出曲线分段收集高纯度的EPA甲酯和DHA甲酯部分。重复上样20次后， 在收集罐中取少量的EPA甲酯和DHA甲酯产品，气相色谱分析得EPA甲酯纯度为99.4%， DHA甲酯的纯度为98. 3%。用气相色谱定量分析后，计算得EPA甲酯的收率为80.2%，DHA 甲酯的收率为79. 6%。
【主权项】
1. 一种超临界色谱制备高纯度EPA酯和DHA酯单体的方法，其特征在于，包括以下步 骤： (1) 以超临界CO2作为流动相、反相填料作为固定相组成超临界色谱分离系统，控制系 统压力和温度使得系统内的CO 2处于超临界状态； (2) 将混合多不饱和脂肪酸酯原料液注入色谱柱中进行分离； (3) 采用馏分切割装置，收集纯度大于95%的EPA酯和DHA酯馏分。
2. 根据权利要求1所述的高纯度EPA酯和DHA酯单体的制备方法，其特征在于，所述作 为流动相的超临界〇)2的温度为30?80°C。
3. 根据权利要求1所述的超临界色谱制备高纯度EPA酯和DHA酯单体的方法，其特征 在于，所述作为流动相的超临界〇)2的压力为10?30MPa。
4. 根据权利要求1所述的超临界色谱制备高纯度EPA酯和DHA酯单体的方法，其特征 在于，所述反相填料为聚苯乙烯/二乙烯苯型反相树脂或者苯基硅烷键合硅胶。
5. 根据权利要求1和5所述的超临界色谱制备高纯度EPA酯和DHA酯单体的方法，其 特征在于，所述反相填料的粒度为5?70 μ m，孔径5?50nm。
6. 根据权利要求1所述的超临界色谱制备高纯度EPA酯和DHA酯单体的方法，其特征 在于，所述色谱柱直径为10?50mm，长度100?500mm。
7. 根据权利要求1所述的超临界色谱制备高纯度EPA酯和DHA酯单体的方法，其特 征在于，所述混合多不饱和脂肪酸酯为混合多不饱和脂肪酸甲酯或混合多不饱和脂肪酸乙 酯，其中EPA酯和DHA酯的总质量分数为60 %?95 %。
8. 根据权利要求1所述的超临界色谱制备高纯度EPA酯和DHA酯单体的方法，其特征 在于，所述混合多不饱和脂肪酸酯原料液的进样量为200?5000 μ L。
9. 根据权利要求1所述的超临界色谱制备高纯度EPA酯和DHA酯单体的方法，其特征 在于，所述的馏分切割装置包括依次安装于色谱柱出口的高压紫外检测器、电磁阀和收集 装置。
【专利摘要】本发明公开了一种超临界色谱制备高纯度EPA酯和DHA酯单体的方法，包括：以超临界CO2作为流动相、反相填料作为固定相组成超临界色谱分离系统，控制系统压力和温度使得系统内的CO2处于超临界状态；将混合多不饱和脂肪酸酯原料液注入色谱柱中进行分离；采用馏分切割装置，收集纯度大于95％的EPA酯和DHA酯馏分。通过本发明的制备方法，整个过程大大减少了有机溶剂的使用，采用富含苯环的反相色谱填料，单次上载量大，纯度高，收集到的EPA酯和DHA酯单体产品纯度在95％以上，适合工业化生产。
【IPC分类】C07C69-602, C07C67-56
【公开号】CN104557542
【申请号】CN201410790797
【发明人】任其龙, 鲍宗必, 李敏, 杨亦文, 邢华斌, 苏宝根, 杨启炜, 张治国
【申请人】浙江大学
【公开日】2015年4月29日
【申请日】2014年12月17日