一种从松茸中同时提取挥发油、多糖和氨基酸的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及食用菌资源开发技术领域，特别是涉及一种从松茸中同时提取挥发 油、多糖和氨基酸的方法。
【背景技术】
[0002] 松茸，又名松口蘑、松菌、松覃、合菌、台菌，属于担子菌亚门、层菌纲、伞菌目、口蘑 科、口蘑属，是具有肉质子实体的大型真菌。松茸是一种纯天然的珍稀名贵食用菌类，具有 独特的香味，被誉为"菌中之王"，不仅可以作为可口美味的菜肴，而且具有多种保健和药用 价值。据文献记载，松茸具有强身、补肾壮阳、益肠胃、理气、化痰和驱虫等功效。松茸不仅营 养均衡、充足，而且还有提高免疫力、抗癌抗肿瘤、治疗糖尿病及心血管疾病、促肠胃保肝脏 等多种功效。对松茸的研宄表明，松茸成分组成复杂，主要包括多糖类、多肽类、氨基酸类、 菌蛋白类、矿物质类、微量元素类及醇类。子实体中含有1〇〇多种营养元素，包括18种氨基 酸、14种人体必需微量元素、49种活性营养物质、5种不饱和脂肪酸、8种维生素、2种糖蛋 白、丰富的膳食纤维和多种活性酶，另含有3种珍贵的活性物质，分别是双链松茸多糖、松 茸多肽和全世界所有植物中独一无二的抗癌物质--松茸醇RNA ;其多种营养成分被广泛 应用于药品、保健品及化妆品领域，其中松茸醇被广泛应用于预防癌症和癌症术后康复。
[0003] 松茸是全球化的天然滋补品类，产业主要集中于欧洲和日本，国内尚处于起步阶 段。松茸对生长环境要求极为苛刻，生长过程极为缓慢，至今还无法实现人工栽培。近年 来，由于环境的恶化和大规模掠夺式的采集，野生松茸资源日渐枯竭，全球松茸产量逐年减 少，国际市场对松茸的需求量却不断增加，故提高松茸的利用率，促进松茸加工产业的发展 迫在眉睫。
[0004] 松茸含有丰富的活性物质，除了含量较高的多糖外，松茸中的氨基酸含量也非常 丰富，且包括人体全部的必须氨基酸，另外，松茸中的挥发油在所有蘑菇中最有利用价值， 除了香气浓郁，还有某些生物活性，如降低胆固醇、抗氧化、免疫调变以及抗癌作用。然而目 前对松茸的提取主要是针对松茸多糖，其他成分往往被废弃掉，这不仅提高了松茸多糖的 提取成本，而且造成松茸其他成分的浪费，降低了松茸资源的利用率，不利于松茸的进一步 开发。另外，迄今为止，还没有发现针对松茸进行综合利用，同时提取挥发油、氨基酸和多糖 的方法。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于提供一种从松茸中同时提取挥发油、多糖和氨基酸的方法，提 高松茸的利用率，拓宽松茸的加工方向，促进松茸加工产业的发展。
[0006] 为了实现本发明的目的，本发明采用如下具体技术手段：
[0007] -种从松茸中同时提取挥发油、多糖和氨基酸的方法，由以下步骤组成：
[0008] (1)取1重量份过100?300目筛的松茸粉末，加入10?30重量份的蒸馏水，再 加入0. 005?0.02重量份的几丁质酶：木瓜蛋白酶：中性蛋白酶=1.5:2:1的混合酶溶解， 连续搅拌，40?55°C酶解2?4h ;
[0009] (2)将步骤⑴样品采用水蒸气蒸馏法在沸腾条件下提取8?16h，蒸馏出含挥发 油的液体并用有机溶剂萃取，再分液分离得到含挥发油的有机相I ;
[0010] (3)将步骤（2)提取挥发油后的料液过滤，得到滤液和滤渣，再往滤渣中加入5? 20重量份的蒸馏水，在真空度-0. 02?-0. 08MPa和温度40?60°C的条件下浸提，过滤，重 复本步骤2?4次，合并所有滤液；
[0011] (4)将步骤⑶中的滤液用有机溶剂萃取、再用分液漏斗分离得有机相II和水相 II，有机相II与步骤（2)中有机相I合并，使用旋转蒸发仪在40?50°C，减压去除有机溶 剂，即得松茸挥发油；
[0012] (5)将水相II在40?60°C，减压状态下浓缩至原体积的1/4?1/8;
[0013] (6)将步骤（5)的浓缩液加入无水乙醇，使乙醇浓度体积分数为75?95%，充分 搅拌，静置过夜，过滤，收集沉淀，保留乙醇母液；
[0014] (7)将步骤（6)的沉淀用无水乙醇洗涤后，经蒸馏水溶解，过滤，滤液经过大孔吸 附树脂分离，用水洗脱，收集洗脱液，浓缩，干燥，即得松茸多糖；
[0015] (8)将步骤（6)的乙醇母液浓缩，经蒸馏水分散后，用活性炭脱色、过滤，滤液经截 留分子量为l〇〇〇Da的超滤膜分离，所得的过滤液置于阳离子交换树脂进行交换，浓缩，干 燥，得从松茸中提取的氨基酸。
[0016] 在一些实施方案中，上述步骤（2)和（4)中的有机溶剂为乙酸乙酯。
[0017] 在另一些实施方案中，上述步骤（2)和⑷中的有机溶剂为食品级的乙酸乙酯。
[0018] 在一些实施方案中，上述步骤（7)中的大孔吸附树脂为AB-8。
[0019] 在一些实施方案中，上述步骤（8)中的阳离子交换树脂为D001大孔型强酸型苯乙 稀系阳呙子交换树脂。
[0020] 通过本发明方法得到各种组分，在工业上均有较好应用前景，如松茸挥发油可以 用于化妆品中，松茸多糖有应用于抗肿瘤药物的前景，松茸氨基酸在食品中可作为调味剂。
[0021] 本发明的优点在于：
[0022] (1)提供了一种松茸综合利用的方法，同时提取挥发油、多糖和氨基酸，该方法将 松茸中的三种有效成分同时提取，包括了水溶性成分和脂溶性成分，有效避免了单一提取 所带来的资源浪费，提高了松茸资源的利用率，降低了成本，拓宽了松茸的加工方向。
[0023] (2)本发明采用酶解、真空低温有机结合，更利于细胞内物质的溶出，同时蛋白酶 能够水解溶液中的蛋白，使得小分子氨基酸得到充分提取。
[0024] (3)本发明将水蒸气蒸馏后萃取的有机相和滤液直接萃取的有机相混合制得挥发 油，在提高挥发油的得率的同时，挥发油中的活性物质含量也有所提高。
[0025] (4)本发明方法所得的挥发油、多糖和氨基酸可分别应用于化妆品、药品和食品的 领域，其中，多糖可应用于制备抗肿瘤药物，特别是有关抗宫颈癌Hela、乳腺癌MCF-7或结 直肠癌HCT-116肿瘤细胞的药物。
【具体实施方式】 [0026] 实施例1
[0027] 一种从松茸中同时提取挥发油、多糖和氨基酸的方法，由以下步骤组成：
[0028] (1)取1重量份过100目筛的松茸粉末，加入10重量份的蒸馏水，再加入0. 005重 量份的几丁质酶：木瓜蛋白酶：中性蛋白酶=1. 5:2:1的混合酶溶解，连续搅拌，40°C酶解 4h；
[0029] (2)将步骤⑴样品采用水蒸气蒸馏法在沸腾条件下提取8h，蒸馏出含挥发油的 液体并用食品级乙酸乙酯萃取，再分液分离得到含挥发油的有机相I ;
[0030] (3)将步骤（2)提取挥发油后的料液过滤，得到滤液和滤渣，再往滤渣中加入20重 量份的蒸馏水，在真空度_〇. 〇8MPa和温度40°C的条件下浸提，过滤，重复本步骤2次，合并 所有滤液；
[0031] (4)将步骤（3)中的滤液用食品级乙酸乙酯萃取、再用分液漏斗分离得有机相II 和水相II，有机相II与步骤（2)中有机相I合并，使用旋转蒸发仪在40°C，减压去除食品级 乙酸乙酯，即得松茸挥发油；
[0032](5)将水相II在40°C，减压状态下浓缩至原体积的1/4 ;
[0033] (6)将步骤（5)的浓缩液加入无水乙醇，使乙醇浓度体积分数75%，充分搅拌，静 置过夜，过滤，收集沉淀，保留乙醇母液；
[0034] (7)将步骤（6)的沉淀用无水乙醇洗涤后，经蒸馏水溶解，过滤，滤液经过大孔吸 附树脂AB-8分离，控制吸附流速2BV/h，用水洗脱，洗脱流速lBV/h，收集洗脱液，浓缩，干 燥，即得松茸多糖；
[0035] (8)将步骤（6)的乙醇母液浓缩，经蒸馏水分散后，用活性炭脱色、过滤，滤液经截 留分子量为l〇〇〇Da的超滤膜分离，所得的过滤液置于D001大孔型强酸型苯乙烯系阳离子 交换树脂进行交换，用〇. 5mol/L的氨水进行洗脱，收集洗脱液至茚三酮检测无色为止，洗 脱液减压蒸馏浓缩，干燥，得从松茸中提取的氨基酸。
[0036] 实施例2
[0037] 一种从松茸中同时提取挥发油、多糖和氨基酸的方法，由以下步骤组成：
[0038] (1)取1重量份过300目筛的松茸粉末，加入20重量份的蒸馏水，再加入0. 02重 量份的几丁质酶：木瓜蛋白酶：中性蛋白酶=1. 5:2:1的混合酶溶解，连续搅拌，55°C酶解 2h；
[0039] (2)将步骤⑴样品采用水蒸气蒸馏法在沸腾条件下提取8h，蒸馏出含挥发油的 液体并用食品级乙酸乙酯萃取，再分液分离得到含挥发油的有机相I ;
[0040] (3)将步骤（2)提取挥发油后的料液过滤，得到滤液和滤渣，再往滤渣中加入5重 量份的蒸馏水，在真空度_〇. 〇2MPa和温度60°C的条件下浸提，过滤，重复本步骤4次，合并 所有滤液；
[0041] (4)将步骤（3)中的滤液用食品级乙酸乙酯萃取、再用分液漏斗分离得有机相II 和水相II，有机