专利名称：一种姬松茸粗多糖脱蛋白方法
技术领域：
本发明涉及一种姬松茸粗多糖脱蛋白方法。
背景技术：
真菌多糖是一类生物活性制品，一般需经过分离纯化得到相对较纯的多糖才能更好地发挥作用，尤其是要将其开发成纯度较高的药品时，除去粗多糖中所含杂蛋白的脱蛋白工艺一个必不可少的纯化步骤。目前应用于多糖脱蛋白质的方法主要有采用加入一定比例的有机溶剂，如三氯乙酸、三氟乙酸法、鞣酸、Sevag试剂(三氯乙酸和正丁醇一定比例的混合液)，也可采用酶法，酶-Sevag联用法等。其中Sevag法是一直以来经典的方法，至今应用最为广泛。
但是在采用Sevag法脱姬松茸粗多糖蛋白时，不仅多糖损失严重，而且脱蛋白工艺要重复6次以上才能比较彻底，所消耗的有机溶剂数量巨大、成本高、对环境污染和操作人员伤害较大，防爆安全性差，操作周期长，一般要2天以上。
发明内容为解决现有姬松茸粗多糖脱蛋白工艺中多糖损失严重、有机溶剂消耗数量巨大、成本高，对环境污染和操作人员伤害较大，操作周期长等问题，本发明提供了一种姬松茸粗多糖脱蛋白方法。
本发明所述的姬松茸粗多糖脱蛋白方法，采用至少一种弱酸性阳离子树脂或弱碱性阴离子树脂，将姬松茸多糖进行柱层析分离游离蛋白和多糖。
依据姬松茸粗多糖所含多糖一般呈中性而蛋白带电的性质，本发明利用离子交换树脂与具有相反电荷的生物分子起相互交换吸附性质来实现姬松茸粗多糖脱蛋白。同时又考虑到生物活性物质不宜采用强酸、强碱型采用离子交换树脂树脂，故本发明采用了弱酸性阳离子树脂或弱碱性阴离子树脂。
所述的弱酸性阳离子树脂可以选自下述树脂母体为聚丙烯酸，阳离子为季铵离子，具体如德清漂莱特(中国)有限公司提供的D113。所述的弱酸性阳离子树脂在刚出厂时一般需要进行下述步骤的预处理将树脂置于2％盐酸溶液中浸泡2～4小时，纯水洗涤3～5次至中性，然后再将树脂置于2％NaOH中浸泡2～4小时，纯水洗涤3～5次至中性；最后将树脂置于2％盐酸溶液中浸泡2～4小时，纯水洗涤3～5次至中性。
所述的弱碱性阴离子树脂可以选自下述树脂母体为聚丙烯酸，阴离子为磺酸离子，具体如德清漂莱特(中国)有限公司提供的A830。所述的弱碱性阴离子树脂在刚出厂时一般需要进行下述步骤的预处理将树脂置于2％NaOH溶液中浸泡2～4小时，纯水洗涤3～5次至中性，然后再将树脂置于2％盐酸中浸泡2～4小时，纯水洗涤3～5次至中性；最后将树脂置于2％NaOH溶液中浸泡2～4小时，纯水洗涤3～5次至中性。
离子交换树脂产品说明
本发明所述的弱酸性阳离子树脂或弱碱性阴离子树脂均可以再生。弱碱性阴离子交换树脂再生可采用2～4％NaOH溶液以3倍柱体积洗脱，动态1小时，再用纯水代替NaOH洗脱洗至中性。而弱酸性阳离子交换树脂的再生同弱碱性阴离子交换树脂，只是用盐酸代替NaOH。
采用本发明所述方法时，可以单柱层析，也可以多柱串联层析。采用两柱串联层析时，推荐的步骤为依次采用弱碱性阴离子树脂和弱酸性阳离子树脂，将所述姬松茸粗多糖进行柱串联层析分离游离蛋白和多糖。
采用本发明所述方法进行分离多糖和蛋白时，操作时间短(一般只需3～5h)，蛋白脱除率高，多糖损失小；操作过程不涉及有机溶剂采用，所用的酸、碱洗脱最后可中和成盐，环境污染小；由于不使用有机溶剂而采用离子交换树脂，成本低，而且可重复使用。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步说明，但本发明的保护范围并不限于此。
实施例1 阳离子1次过柱将处理好的离子交换树脂装填于层析柱中，阳离子树脂层析柱规格2.6×55cm，离子交换剂填料高45cm；上样阳离子过柱脱蛋白，上样量为10ml，上样时姬松茸粗多糖中多糖含量13.00mg/ml，蛋白质含量6.23mg/ml，粗多糖料液pH为提取时自然pH(＝6.4)。
洗脱阳离子交换树脂上样后，去离子水蠕动泵洗脱，流速1-4mL/min，苯酚-硫酸法检测流出液糖含量，洗脱至无糖析出，约400～800ml，然后进行再生，重复使用。分离结果见表1。
实施例2 阴离子1次过柱将处理好的离子交换树脂装填于层析柱中，阴离子交换树脂规格2.6×55cm，离子交换剂填料高45cm。
上样阴离子过柱脱蛋白，上样量均为10ml，上样时姬松茸粗多糖中多糖含量13.00mg/ml，蛋白质含量6.23mg/ml，粗多糖料液pH为提取时自然pH(＝6.4)。
洗脱阴离子交换树脂上样后，去离子水蠕动泵洗脱，流速1-4mL/min，苯酚-硫酸法检测流出液糖含量，洗脱至无糖析出，约400～800ml。分离结果见表1。
实施例3 阴离子1次过柱将实施例2所述阴离子交换树脂用4％NaOH溶液以3倍柱体积洗脱，动态1小时，再用纯水代替NaOH洗脱洗至中性。
上样阴离子过柱脱蛋白，上样量均为10ml，上样时姬松茸粗多糖中多糖含量13.00mg/ml，蛋白质含量6.23mg/ml，粗多糖料液pH为提取时自然pH(＝6.4)。
洗脱阴离子交换树脂上样后，去离子水蠕动泵洗脱，流速1-4mL/min，苯酚-硫酸法检测流出液糖含量，洗脱至无糖析出，约400～800ml。分离结果见表1。
实施例4 阴阳离子串联1次过柱将处理好的离子交换树脂装填于层析柱中，阴离子树脂层析柱规格2.6×55cm，离子交换剂填料高45cm；阳离子交换树脂规格2.6×55cm，离子交换剂填料高45cm。
上样阴阳离子串联过柱脱蛋白，上样量均为10ml，上样时姬松茸粗多糖中多糖含量13.00mg/ml，蛋白质含量6.23mg/ml，粗多糖料液pH为提取时自然pH(＝6.4)。
洗脱阴阳离子交换树脂上样后，去离子水蠕动泵洗脱，流速1-4mL/min，苯酚-硫酸法检测流出液糖含量，洗脱至无糖析出，约400～800ml，然后进行再生，重复使用。分离结果见表1。
表1阴阳离子交换树脂脱蛋白效果
权利要求
1.一种姬松茸粗多糖脱蛋白方法，其特征在于采用至少一种弱酸性阳离子树脂或弱碱性阴离子树脂，将姬松茸多糖进行柱层析分离游离蛋白和多糖。
2.如权利要求1所述的姬松茸粗多糖脱蛋白方法，其特征在于所述的弱酸性阳离子树脂母体为聚丙烯酸，阳离子为季铵离子。
3.如权利要求2所述的姬松茸粗多糖脱蛋白方法，其特征在于所述的弱酸性阳离子树脂进行下述步骤的预处理将树脂置于2％盐酸溶液中浸泡2～4小时，纯水洗涤3～5次至中性，然后再将树脂置于2％NaOH中浸泡2～4小时，纯水洗涤3～5次至中性；最后将树脂置于2％盐酸溶液中浸泡2～4小时，纯水洗涤3～5次至中性。
4.如权利要求1所述的姬松茸粗多糖脱蛋白方法，其特征在于所述的弱碱性阴离子树脂母体为聚丙烯酸，阴离子为磺酸离子。
5.如权利要求4所述的姬松茸粗多糖脱蛋白方法，其特征在于所述的弱碱性阴离子树脂进行下述步骤的预处理将树脂置于2％NaOH溶液中浸泡2～4小时，纯水洗涤3～5次至中性，然后再将树脂置于2％盐酸中浸泡2～4小时，纯水洗涤3～5次至中性；最后将树脂置于2％NaOH溶液中浸泡2～4小时，纯水洗涤3～5次至中性。
6.如权利要求1～5之一所述的姬松茸粗多糖脱蛋白方法，其特征在于依次采用弱碱性阴离子树脂和弱酸性阳离子树脂，将所述姬松茸粗多糖进行柱串联层析分离游离蛋白和多糖。
全文摘要
本发明涉及一种姬松茸粗多糖脱蛋白方法，采用至少一种弱酸性阳离子树脂或弱碱性阴离子树脂，将姬松茸多糖进行柱层析分离游离蛋白和多糖。采用本发明所述方法进行分离多糖和蛋白时，操作时间短(一般只需3～5h)，蛋白脱除率高，多糖损失小；操作过程不涉及有机溶剂采用，所用的酸、碱洗脱最后可中和成盐，环境污染小；由于不使用有机溶剂而采用离子交换树脂，成本低，而且可重复使用。
文档编号C07K1/14GK1821274SQ20061004989
公开日2006年8月23日 申请日期2006年3月17日 优先权日2006年3月17日
发明者孙培龙, 杨开, 何荣军, 吴学谦 申请人:浙江工业大学