从酵母细胞壁中提取多糖的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种从酵母细胞壁中提取多糖的方法。
【背景技术】
[0002]酵母多糖是从酵母细胞壁中提取的高分子多糖复合物，有着抗炎、抗氧化、促生长、抗病毒、抗肿瘤及提高免疫力等生物活性。可以应用于饲料、食品、保健品等行业。
[0003]酵母细胞壁含有丰富的葡聚糖，甘露聚糖等多糖，但因壁厚使其不易破碎，因此，酵母细胞壁多糖制备具有一定的难度；目前，酵母多糖的提取多采用研磨法、冻融法、超声波法、高压匀质等物理方法，碱法、酸法，酸碱混合法，酶-Sevage等化学方法。但这些方法普遍存在能耗高、酸碱用量大、环境污染严重、工艺步骤多、得率较低等问题。
[0004]工业上有大量的废弃酵母，如啤酒和燃料乙醇工业中产生的废弃酵母，对这些资源的高值化利用具有重要意义。
【发明内容】
[0005]针对现有技术中存在不足，本发明提供了一种从酵母细胞壁中提取多糖的方法；
[0006]本发明是通过以下技术手段实现上述技术目的的。
[0007]一种从酵母细胞壁中提取多糖的方法，其特征在于，包括如下步骤:
[0008]S1.配制可溶性锂离子和表面活性剂水溶液的混合液作为提取液，在水浴中预执.
[0009]S2.将酵母原料悬浮于所述提取液中，于50?90°C水浴中温育，得多糖的粗提取液；
[0010]S3.将所述粗提取液用棒状工具缠绕得多糖，或离心除去细胞碎片后用乙醇沉淀法得到多糖，将所得多糖洗涤，干燥。
[0011]当多糖粗提取液粘度较大时，使用玻璃棒或其它工具缠绕可直接得多糖；当多糖粗提取液粘度较小时，离心除去细胞碎片后用乙醇沉淀法得到多糖。
[0012]在上述方案中，SI中所述锂离子取自醋酸锂或氢氧化锂，所述锂离子在混合液中的浓度为50?300mmol/L。
[0013]在上述方案中，SI中所述表面活性剂为十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)或十二烷基硫酸钠(SDS)的一种或两种，所述表面活性剂在混合液中的质量分数为0.5?2.0%。
[0014]在上述方案中，所述酵母原料为酿酒酵母、粘红酵母、毕赤酵母、克鲁维酵母、啤酒酵母泥、燃料乙醇发酵废弃酵母泥。
[0015]在上述方案中，S2中所述酵母原料与提取液的用量为每克酵母原料加至5?20mL提取液中。
[0016]在上述方案中，S2中所述温育时间为5?20min。
[0017]在上述方案中，S3中所述粗提取液离心除去细胞碎片的转速为4000?6000rpm。
[0018]在上述方案中，S3中所述乙醇用量为至少一倍体积的所述除去细胞碎片后的提取液，所述沉淀温度为4?25°C。
[0019]本发明提供的提取酵母细胞壁多糖的方法简单、方便，能够在短时间内完成多糖的提取，得率高、纯度高、具有规模化应用的前景。
【具体实施方式】
[0020]下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明，但本发明的保护范围并不限于此。
[0021]实施例1
[0022]从新鲜的酿酒酵母中提取多糖:
[0023](I)将保藏在_80°C甘油管中的酿酒酵母接入1mL YI3D培养液(I %酵母膏，2%蛋白胨，2%葡萄糖)中，30°C震荡培养20h ;
[0024](2)将(I)中的培养液作为种子，接入500mL YPD液体培养基的三角瓶中，震荡培养20h，在8000rpm下离心lOmin，用去离子水洗涤菌体；
[0025](3)取⑵中的5g菌体中悬浮于提前预热的10mL醋酸锂-SDS的提取液中，其中醋酸锂的浓度为50mmol/L，SDS的质量分数为1% ；
[0026](4)在70°C温育lOmin，每隔2.5min摇晃三角瓶，使提取液和菌体充分接触，得多糖的粗提取液。
[0027](5)将三角瓶中的提取液转移到离心管中，5000rpm下离心lOmin，除去菌体碎片。
[0028](6)将上清收集后，用I倍体积的95%乙醇在4?25°C沉淀多糖，在1000rpm离心lOmin，收集沉淀(多糖)，冷冻干燥，得到酵母多糖。
[0029]通过上述方法，新鲜的酿酒酵母中多糖提取率达13.5%，用苯酚硫酸法测得的多糖纯度达到85.7%。
[0030]实施例2
[0031]从燃料乙醇发酵废弃酵母中提取多糖:
[0032](I)取1g燃料乙醇发酵废弃酵母悬浮于提前预热的200mL醋酸锂-CTAB的提取液中，其中醋酸锂的浓度为lOOmmol/L，CTAB的质量分数为1% ；
[0033](2)在50°C温育20min，每隔2.5min摇晃三角瓶，使提取液和菌体充分接触，得多糖的粗提取液。
[0034](3)将三角瓶中的提取液转移到离心管中，5000rpm下离心lOmin，除去菌体碎片。
[0035](4)将上清收集后，用I倍体积的95%乙醇在4?25°C沉淀多糖，在1000rpm离心lOmin，收集沉淀(多糖)，冷冻干燥，得到酵母多糖。
[0036]通过上述方法，燃料乙醇发酵废弃酵母中多糖提取率达13.5%，用苯酚硫酸法测得的多糖纯度达到87.2%。
[0037]实施例3
[0038]从粘红酵母中提取多糖:
[0039](I)以甘油管保藏的粘红酵母为种子，培养、收集菌体过程同实施例1 ;
[0040](2)取5g粘红酵母悬浮于提前预热的25mL醋酸锂-CTAB-SDS的提取液中，其中醋酸锂的浓度为300mmol/L，CTAB, SDS的质量分数为1% ；
[0041](3)在90°C温育5min，期间摇晃三角瓶，使提取液和菌体充分接触，得多糖的粗提取液。
[0042](4)提取后多糖溶液可以用玻璃棒直接缠绕，刮下后冷冻干燥获得酵母多糖粉。
[0043]通过上述方法，粘红酵母的多糖提取率可以达到17.3%，苯酚硫酸法测定多糖含量可达92.4%。
[0044]所述实施例为本发明的优选的实施方式，但本发明并不限于上述实施方式，在不背离本发明的实质内容的情况下，本领域技术人员能够做出的任何显而易见的改进、替换或变型均属于本发明的保护范围。
【主权项】
1.一种从酵母细胞壁中提取多糖的方法，其特征在于，包括如下步骤: 51.配制锂离子和表面活性剂的混合液作为提取液，在水浴中预热； 52.将酵母原料悬浮于所述提取液中，于50?90°C水浴中温育，得多糖的粗提取液； 53.将所述粗提取液用棒状工具缠绕得多糖，或离心除去细胞碎片后用乙醇沉淀法得到多糖，将所得多糖洗涤，干燥。
2.如权利要求1所述的从酵母细胞壁中提取多糖的方法，其特征在于，SI中所述锂离子取自醋酸锂或氢氧化锂，所述锂离子在混合液中的浓度为50?300mmol/L。
3.如权利要求1所述的从酵母细胞壁中提取多糖的方法，其特征在于，SI中所述表面活性剂为十六烷基三甲基溴化铵或十二烷基硫酸钠的一种或两种，所述表面活性剂在混合液中的质量分数为0.5?2.0%。
4.如权利要求1所述的从酵母细胞壁中提取多糖的方法，其特征在于，所述酵母原料为酿酒酵母、粘红酵母、毕赤酵母、克鲁维酵母、啤酒酵母泥、燃料乙醇发酵废弃酵母泥。
5.如权利要求1所述的从酵母细胞壁中提取多糖的方法，其特征在于，S2中所述酵母原料与提取液的用量为每克酵母原料加至5?20mL提取液中。
6.如权利要求1所述的从酵母细胞壁中提取多糖的方法，其特征在于，S2中所述温育时间为5?20min。
7.如权利要求1所述的从酵母细胞壁中提取多糖的方法，其特征在于，S3中所述粗提取液离心除去细胞碎片的转速为4000?6000rpm。
8.如权利要求1所述的从酵母细胞壁中提取多糖的方法，其特征在于，S3中所述乙醇用量为至少一倍体积的所述除去细胞碎片后的提取液，所述沉淀温度为4?25V。
【专利摘要】本发明提供了一种从酵母细胞壁中提取多糖的方法，以培养的新鲜酵母或工业废酵母为原料，悬浮于含有锂盐和表面活性剂的提取液中，在水浴中提取多糖；本发明采用的方法提取酵母多糖时间短、得率高、可用于酵母细胞壁多糖的规模提取，对于酵母的高值利用具有重要意义。
【IPC分类】C08B37-00
【公开号】CN104610460
【申请号】CN201410784668
【发明人】吴建, 谢蓉蓉, 朱道辰, 孙建中, 耿阿蕾, 常福祥
【申请人】江苏大学
【公开日】2015年5月13日
【申请日】2014年12月17日