基于ssr标记的安徽省地方梨种质资源遗传多样性分析的制作方法
【专利说明】
[0001]
技术领域： 本发明涉及分子生物学DNA标记技术与应用领域，特别涉及基于SSR标记的安徽省地 方梨种质资源遗传多样性分析。
[0002]
【背景技术】： 安徽省梨种质资源丰富，经过自然和人工选择，在安徽砀山、寿县和黄山等地己形成不 同的地方名特品种和地方品种组群，这些地方品种大都来源于偶然实生苗或芽变选种。为 了更好地评价和利用这些地方品种，避免地方品种中优良种质的流失，需要对这些地方品 种进行鉴定、保存和利用。
[0003] 分子标记广泛应用于种质资源遗传多样性分析以及辅助育种工作中。梨属的分子 标记研究始于1993年，然而限于科学技术发展的水平，之后的十多年在梨属植物上开发的 标记主要是以随机扩增多态性DNA (RAPD)为主的第一代分子标记，这类标记重复性较差。 表达序列标签（Express sequence tag, EST)中含有许多简单重复序列（Simplesequence r印eat，SSR)，已经成为普遍认可的第二代分子标记，具有重复性好，共显性，易于检测的 特点，而且开发成本较低，已成功应用于群体遗传结构分析、QTL定位和分子标记辅助选择 育种等研究领域。
[0004]
【发明内容】
： 本发明的目的是提供基于SSR标记的安徽省地方梨种质资源的遗传多样性分析。
[0005] 本发明所采取的技术方案是： 基于SSR标记的安徽省地方梨种质资源的遗传多样性分析方法，包括提取梨种质资源 的DNA，使用SSR标记作为引物进行扩增；根据扩增结果对梨种资源进行分析，所述的SSR 标记对为： PCR 的反应体系为 25μ?，其中包含 DNA 模板 lOOng，IOXBuffer 2. 5PL，Mg2+ I. 5mmol/ L，dNTP 15〇Mmol/L，上下游引物各1. 〇μ?，TaqDNA聚合酶I. 0U，其余用双蒸水补充。
[0006] PCR的反应条件为：4°C预变性5 min ;94°C变性I min，退火温度I min，72 °C延伸 2 min，共35个循环；最后72°C延伸5 min。
[0007] 本产品发明的有益效果是： 本发明的5个分子标记在25个梨地方品种中有多态性，在25个梨品种中进行的遗传 多样性分析与梨属植物分类常识相吻合（图1)，是稳定存在的标记，可以直接将本发明所 提供的5个引物对应用于更多梨属植物上，进行种质资源和遗传多样性分析。
[0008]
【附图说明】： 图1是根据群体间的遗传距离矩阵构建的安徽省地方梨种质资源的UPGM聚类图。 [0009] 具体实例： 材料 本试验共收集安徽省砀山地区、黄山地区、寿县地区现存的地方品种25份，具体见下 表。
[0010] 表1供试的梨品种 DNA的提取
【主权项】
1. 基于SSR标记的安徽省地方梨种质资源遗传多样性分析，包括提取梨属植物的DNA， 使用SSR标记作为引物进行扩增；根据扩增结果对梨种质资源进行分析，其特征在于：所述 的SSR标记对为：
其特征在于：PCR的反应体系为25ML，其中包含DNA模板100ng，10XBuffer2. 5ML，Mg2+ 1.5mmol/L，dNTP15〇Mmol/L，上下游引物各 1.0ML，TaqDNA聚合酶 1.0U，其余用双蒸 水补充。
2. 根据权利要求1或2所述的基于SSR标记的安徽省地方梨种质资源遗传多样性分 析，其特征在于：PCR的反应条件为：4°C预变性5min;94°C变性1min,退火温度1min, 72°C延伸2min，共35个循环；最后72°C延伸5min。
【专利摘要】本发明分子生物学DNA标记技术与应用领域，旨在提供5个梨属SSR标记及应用。该5个标记分别是一组引物对，其序列如SEQ IDN0: 1-10所示。本发明的5个分子标记在25个梨地方品种中有多态性，在25个梨品种中进行的遗传多样性分析与梨属植物分类常识相吻合(图1)，是稳定存在的标记，可以直接将本发明所提供的5个引物对应用于更多梨属植物上，进行种质资源和遗传多样性分析。本发明方法与传统的方法相比，具有目的性强，作用效果直接的优点。且操作简单、检测快速、检测成本低，便于广泛推广使用。
【IPC分类】C12Q1-68
【公开号】CN104611413
【申请号】CN201410601546
【发明人】潘海发, 徐义流, 张金云, 高正辉, 伊兴凯, 郭传翔
【申请人】安徽省农业科学院园艺研究所
【公开日】2015年5月13日
【申请日】2014年11月2日