取样
[0070] 在接种后4小时（未治疗的小鼠）和24小时（治疗的小鼠和仅媒介物治疗的小 鼠），确定菌落计数。在处死小鼠后，立即将肺和脾收集并在_20°C冷冻。融化以后，将所述 器官在lml 0. 9%盐水中匀浆化。然后将每个样品在盐水中稀释10倍，并将20 y 1点样施 加于血琼脂平板上。将所有琼脂平板在35°C在环境空气中温育18-48小时。
[0071] CFU 计数
[0072]将接种物的 CFU/ml 确定为 7. 921og1(l CFU/ml，其对应于 6. 621og1(l CFU/ 小鼠。
[0073] 在仅媒介物组中，在感染后4小时平均log1Q CFU/肺为5. 28,并且CFU水平在24 小时以后保持在类似水平。在仅媒介物组中，收集脾的类似物基线数据，具有在4小时时 1. 96的平均log1(l CFU/脾，其在24小时后增加至2. 60。
[0074]与媒介物治疗相比（对于较高浓度，p〈0. 001)，使用化合物1的治疗在两种器官中 导致CFU水平的浓度依赖性的显著降低。环丙沙星（19mg/kg)也对减小细菌接种量具有有 效影响（P〈〇. 001)。
[0075] 使用S形剂量-响应模型（可变斜率）在鼠肺中评价化合物1针对PAX11045的 ED 5Q的剂量-响应曲线，揭示了 4. 33mg/kg的估计值。下面的表1总结了有关的效力值。
[0076] 实施例1:
[0077] 在小鼠肺炎模型中确定了与替吉环素组合的式（I)的化合物（"化合物1"）针对 铜绿假单胞菌临床分离物PAX11045的效力和ED 5(I。在治疗后20小时，确定肺中的菌落计 数。
[0078] 小鼠的感染
[0079] 将得自5 %马血琼脂平板的PAX11045新鲜过夜菌落悬浮于0.9%无菌盐水中 至大约l〇8CFU/ml，并进一步稀释至大约5X10 7CFU/ml。将雌性小鼠（DBA/2,远系杂交 种，18-22g，Chales River)用0. 08ml Zoletil麻醉，并经由鼻子用移液器接种0. lml含有 大约106CFU的细菌悬浮液。接种后4小时，用45 y 1 neurophen (20mg布洛芬/ml，对应于 大约30mg/kg)经口治疗小鼠作为疼痛缓解。
[0080] 用替吉环素治疗小鼠
[0081] 将53mg替吉环素（Tygacil, Wyeth)溶解在5. 3ml0?9%无菌盐水中至10mg/ml的 浓度，并用盐水进一步稀释至1. 25mg/ml。在感染后3小时在颈区域中用0. 2ml单次剂量皮 下地治疗小鼠，基于20g的平均动物重量，所述剂量对应于12. 5mg/kg。
[0082] 用化合物1治疗小鼠
[0083] 将2个管形瓶含有的5mg活性化合物1溶解在2.5ml 0.9%无菌盐水中，各自达到 2mg/ml的浓度。将一瓶用盐水进一步稀释2倍至1. 1、0. 55、0. 275和0. 137mg/ml。在感染 后4小时以基于20g的平均动物重量计算的剂量，在颈区域中用0. 2ml单次剂量皮下地治 疗小鼠。作为阳性对照，以相同的方式以20mg/kg的固定剂量使用环丙沙星。
[0084] 取样
[0085] 在接种后4小时（未治疗的小鼠）和24小时（治疗的小鼠和仅媒介物治疗的小 鼠），确定菌落计数。在处死小鼠后，立即将肺收集并在-20°C冷冻。融化以后，将所述器官 在lml 0. 9%盐水中匀浆化。然后将每个样品盐水中稀释10倍，并将20 y 1点样施加于血 琼脂平板上。将所有琼脂平板在35°C在环境空气中温育18-24小时。
[0086] CFU 计数
[0087] 将接种物的CFU/ml确定为7.61og1(lCFU/ml，其对应于6.31og1(lCFU/小鼠。
[0088] 在仅媒介物组中，在感染后4小时平均log1Q CFU/肺为6. 13,并且CFU水平在24 小时以后保持在类似水平。
[0089] 与媒介物治疗相比（p〈0. 001)，使用化合物1和替吉环素的组合的治疗导致CFU水 平的浓度依赖性的显著降低。环丙沙星（20mg/kg)也对降低细菌接种量（p〈0. 001)具有有 效作用。
[0090] 使用单独替吉环素（12. 5mg/kg)的治疗对细菌接种量不具有作用。
[0091] 使用S形剂量-响应模型（可变斜率）在鼠肺中评价在有固定剂量的替吉环素 (12. 5mg/kg)存在下的化合物1针对PAX11045的ED5Q的剂量-响应曲线，揭示了 1. 33mg/ kg的估计值。下表总结了有关的效力值。
[0092] 表1:化合物1的效力值
[0093]
【主权项】
1. 一种组合，其包含下式的e-发夹肤模拟物 环（-"T虹-T巧-Ile-D油-Orn-Do油-D油-T;rp-D油-D油-Ala-Ser-Dpro-Pro) (I)， 其中 D油是（S)-2, 4-二氨基了酸； %油是（时-2, 4-二氨基了酸； 化n是（S)-2, 5-二氨基戊酸； 和 甘氨酷环素类的化合物， 或其药学上可接受的盐或水合物或溶剂合物。
2. 根据权利要求1所述的组合，其中所述甘氨酷环素类的化合物是替吉环素或其药学 上可接受的盐。
3. 用在药物中的根据权利要求1或权利要求2所述的组合。
4. 用于治疗人或动物中的感染或与该样的感染有关的疾病的根据权利要求1或权利 要求2所述的组合。
5. 用于在治疗人或动物中的感染或与该样的感染有关的疾病中使用的根据权利要求 1或权利要求2所述的组合。
6. 根据权利要求1或权利要求2所述的组合用于制备药物组合物的用途，所述药物组 合物用于治疗人或动物中的感染或与该样的感染有关的疾病。
7. -种药物组合物，其含有根据权利要求1或权利要求2所述的组合和至少一种药学 上惰性的载体。
8. 根据权利要求7所述的药物组合物，所述药物组合物呈适合于口服、局部、透皮、注 射、输注、经颊、透粘膜、直肠、阴道、肺或吸入施用的形式，特别是呈片剂、糖衣丸、胶囊剂、 溶液、液体、凝胶、硬膏剂、乳膏剂、软膏剂、糖浆剂、浆料、粉剂、混悬剂、喷雾剂、喷雾器或栓 剂的形式。
9. 根据权利要求7或权利要求8所述的药物组合物用于治疗人或动物中的感染或与该 样的感染有关的疾病的用途。
10. -种试剂盒，其包含含有根据权利要求1所述的式（I)的0-发夹肤模拟物或其药 学上可接受的盐的部分，和含有甘氨酷环素类的化合物或其药学上可接受的盐的部分。
11. 根据权利要求10所述的试剂盒，其中所述甘氨酷环素类的化合物是替吉环素或其 药学上可接受的盐。
12. -种在人或动物中治疗感染或与该样的感染有关的疾病的方法，所述方法包括： 给有此需要的受试者施用适当量的根据权利要求1或权利要求2所述的组合和/或根据权 利要求7或权利要求8所述的药物组合物和/或根据权利要求10或权利要求11所述的试 剂盒。
【专利摘要】一种新的组合，其包含下式的β-发夹肽模拟物环(-Thr-Trp-Ile-Dab-Orn-DDab-Dab-Trp-Dab-Dab-Ala-Ser-DPro-Pro)(I)，和甘氨酰环素类的化合物，特别是替吉环素，所述组合能够在比任一种单独施用的化合物更低的各种化合物剂量治疗性地控制人或动物中的特定细菌感染。所述组合可以用作药物以治疗例如皮肤或软组织感染；眼、耳、血流或腹内感染；与呼吸系统疾病、骨疾病、心血管疾病、生殖泌尿道疾病或胃肠道疾病有关的感染。
【IPC分类】C07K7-64, A61K38-12
【公开号】CN104684925
【申请号】CN201380041532
【发明人】G·E·达勒, D·奥伯莱希特, F·伯尔纳迪尼
【申请人】波利弗尔股份公司
【公开日】2015年6月3日
【申请日】2013年8月7日
【公告号】CA2879207A1, EP2882770A1, US20150216927, WO2014023757A1