含有主链环化肽的组合的制作方法
【专利说明】含有主链环化肽的组合
[0001] 本发明提供了多种化合物的组合，所述组合能够在比任一种单独施用的化合物 更低的各种化合物剂量治疗性地控制人或动物中的特定细菌感染。所述化合物之一是病 原体特异性的抗生素主链环化肽，其包含与模板（其为发夹样构象提供特殊结构约束 (structural constraint))连接的12个a -氨基酸残基的链，所述肽表现出高效力和生物 利用度以及显著更长的体内半衰期。
[0002] 日益增长的微生物对确定抗生素的耐药性的问题已经刺激了开发具有新作用模 式的新的抗微生物剂的强烈兴趣（H. fceithaupt，Nat. Biotechnol. 1999, 17, 1165-1169)。 一类新出现的抗生素是基于天然存在的阳离子肽（T. Ganz, R. I. Lehrer, Mol. Medicine Today 1999,5,292-297 ；R. M. Epand, H. J. Vogel, Biochim. Biophys. Acta 1999, 1462, 11-28)。这些包括二硫键连接的0 -发夹和0 -折叠肽（诸如？1'〇丨681^118[0. V. Shamova, H. A. Korneva, R. I. Lehrer, FEBS Lett. 1993, 327, 231-236],中国鲎肽 [T. Nakamura, H. Furunaka, T. Miyata, F. Tokunaga, T. Muta, S. Iwanaga, M. Niwa, T. Takao, Y. Shimonishi, Y.J. Biol. Chem. 1988, 263, 16709-16713]和防卫素[兄1.1^11代1'，八. K. Lichtenstein, T. Ganz, Annu. Rev. Immunol. 1993, 11，105-128]、两亲的 a -螺旋肽（例如 杀菌肽、皮抑菌肽、爪蟾抗菌肽和蜂毒素[A. Tossi, L. Sandri, A. Giangaspero, Biopolymers 2000, 55, 4-30])、以及其它直链和环结构肽。尽管尚未充分理解抗微生物阳离子肽 的作用机制，它们的主要相互作用部位是微生物的细胞膜（H. W. Huang, Biochemistry 2000,39,8347-8352)。在暴露于这些药剂后，细胞膜经历透化，继之以快速的细胞 死亡。但是，不可排除更复杂的作用机制，例如，涉及受体介导的信号传递（M.Wu，E. Maier, R. Benz, R. E. Hancock, Biochemistry 1999, 38, 7235-7242 ；M. Scocchi, A. Tossi, R. Gennaro, Cell. Mol. Sci. 2011，68, 2317-2330)。
[0003] 这些阳离子肽中的许多的抗微生物活性经常与它们的优选二级结构有关， 所述二级结构在水溶液中或在膜样环境中观察到（N. Sitaram, R. Nagaraj, Biochim. Biophys. Actal999, 1462, 29-54)。通过核磁共振（NMR)光谱法进行的结构研宄已 经证实，由于两个二硫键的强迫作用，阳离子肽诸如protegrin 1 (A. Aumelas, M. Mangoni, C. Roumestand, L. Chiche, E. Despaux, G. Grassy, B. Calas, A. Chavanieu, A. Eur. J. Biochem. 1996, 237, 575-583 ；R. L. Fahrner, T. Dieckmann, S. S. L. Harwig, R. I. Lehrer, D. Eisenberg，J.Feigon，J.Chem. Biol. 1996, 3, 543-550)和中国豐狀 I(K.Kawano，T. Yoneya, T. Miyata, K. Yoshikawa, F. Tokunaga, Y. Terada, S. J. Iwanaga, S. J. Biol. Chem. 1990,265,15365-15367)呈现非常确定的0-发夹构象。但是，高溶血活性阻碍它们 作为抗生素的广泛应用。最近通过NMR进行的结构研宄已经指示，高溶血活性似乎与该环状 0 _发夹样分子的高度两亲性质相关联，但是通过调节构象和两亲性可能使抗微生物活性 和溶血活性解离（L. H. Kondejewski, M. Jelokhani-Niaraki, S. W. Farmer, B. Lix, M. Kay, B. D. Sykes, R. E. Hancock, R. S. Hodges, J. Biol. Chem. 1999, 274, 13181-13192 ；C. MclnnesL. H. Kondejewski, R. S. Hodges, B. D. Sykes, J. Biol. Chem. 2000, 275, 14287-14294) 〇 [0004] 最近，分别在W02007079605和W02007079597中公开了遵循这些设计标准的一系 列抗生素化合物，它们将特异性地针对铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa)的高效力 与低血毒效应相组合。该系列遵循在W02002070547和W02004018503中介绍这些概念的先 前公开内容。利用其中描述的化合物，介绍了一种新策略来稳定主链环状阳离子肽模拟物 (peptide mimetics)中的0-发夹构象，所述肽模拟物表现出选择性的高抗微生物活性。 这涉及将阳离子的和疏水的发夹序列移植到模板上，所述模板的功能是将肽环主链限制成 为发夹几何形状。
[0005]还已经在文献中描述了这类模板结合的发夹模拟物肽（D. Obrecht, M. Altorfer, J. A. Robinson, Adv. Med. Chem. 1999, 4, 1-68 A. Robinson, Syn. Lett. 2000, 4, 429-441)，并且已经确立了使用组合的和平行的合成方法制备0 -发夹肽 模拟物的能力（L. Jiang, K. Moehle, B. Dhanapal, D. Obrecht, J. A. Robinson, Helv. Chim. Acta. 2000, 83, 3097-3112)。
[0006]消除日益增加的多药耐药性细菌的流行和传播的一个替代方案是，从常用种 类修饰和进一步开发抗生素物质。一个重大成就是，近年来替吉环素的开发，从而产 生了一个新类别的非常有效的抗生素，其被称作甘氨酰环素。这类新的广谱抗生素已 经在体外试验中显示出对以下生物的高微生物学活性：需氧性的至厌氧性的、革兰氏 阳性和革兰氏阴性细菌，以及非典型生物，但是尤其重要的是，万古霉素耐药性的肠球 菌（enterococci)、甲氧西林耐药性的金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus)、青 霉素耐药性的肺炎链球菌（Streptococcus pneumoniae)和多药耐药性的革兰氏阴性 细菌的许多种（综述：G. A. Pankey, J. Antimicrob. Chemother.，2005, 56, 470-480)。体 内研宄和临床试验可以证实高效力并且确立有利的安全性谱，因为市场认可的它们的 一系列适应症目前被批准（综述：Y. Cai, R. Wang, B. Liang, N. Bai, Y. Liu, Antimicrob. Agents Chemother. , 2011, 55, 1162-1172 ；D. Yahav, A. Lador, M. Paul, L. Leibovici, J. Antimicrob. Chemother. , 2011, 66, 1963-1971 ；E. Tasina, A. B. Haidich, S. Kokkali, M. Arvanitidou, Lancet Infect. Dis. , 2011, 11, 834-844)〇
[0007]另外，替吉环素作为广谱抗生素的治疗用途不甚完美，从而留下低应答病原体 (例如铜绿假单胞菌）的漏洞。由于不利