一种从菊芋叶中分离二咖啡酰基奎尼酸的方法
【技术领域】
[0001 ] 本发明涉及一种从菊芋叶中分离二咖啡酰基奎尼酸的方法。
【背景技术】
[0002] 二咖啡酰奎尼酸类化合物为奎尼酸与两分子咖啡酸通过酯化反应缩合而成的酚 酸类天然产物，包括1，3-二咖啡酰奎尼酸，1，4-二咖啡酰奎尼酸，1，5-二咖啡酰奎尼酸，3， 4-二咖啡酰奎尼酸，3,5-二咖啡酰奎尼酸等多种物质。二咖啡酰奎尼酸是一种高活性酚酸 类物质，具有抗氧化、抗炎、抗肝损伤、抗病毒、提高免疫力等多种作用，该类物质在抗乙肝 病毒和抗艾滋病病毒方面作用受到重点关注，相关物质正处于临床研究过程中。天然植物 中二咖啡酰奎尼酸类化合物含量高的植物不多，主要存在于杜仲，金银花等珍贵药材中。开 发新资源、新工艺获得二咖啡酰奎尼酸具有良好的现实需求。
[0003] 菊芋（HelianthustuberosusL.)为菊科向日葵属草本植物，可耐寒、旱、贫瘠、盐 碱等环境，具有很好的生态改良和经济价值，在我国大范围种植。酸类是菊芋叶主要活性成 分，辛程勋（102008070B)开发了菊芋叶多酚总提取物的提取方法，陈育如（101747196A)和 辛程勋（101973882A)开发了菊芋中主要酚酸成分绿原酸的提取分离工艺。除了绿原酸外， 菊芋叶中还富含有二咖啡酰奎尼酸类物质。菊芋叶原料廉价易得，二咖啡酰奎尼酸类成分 含量丰富，适于作为原料分离获得二咖啡酰奎尼酸类物质。
[0004] 袁晓艳（101747195B)采用乙酸乙酯萃取结合柱层析的方法从菊芋叶中获得85% 含量的二咖啡酰奎尼酸组分，在分离过程中使用了石油醚，乙酸乙酯等有机溶剂，这些有机 化学溶剂对环境危害大，后处理复杂，增大了工业应用分离成本。
[0005] 醇盐双水相萃取技术是利用目标物质在亲水有机溶剂/无机盐双水相体系中分 配系数差异而进行萃取分离的新型技术。醇盐双水相萃取常使用乙醇作为亲水有机溶剂， 其价格低于传统有机溶剂，安全性好，萃取过程分相时间短，有效避免乳浊现象，解决了传 统有机溶剂萃取成本高，污染环境等问题，已应用于天然产物有效成分的分离。修志龙 (101531652)应用双水相萃取技术用于越桔中花青素的分离，燕永胜（103301649A)应用该 技术用于纯化金银花中的黄酮类成分。此外该技术还用于黄芩苷等中药有效成分的分离纯 化。
【发明内容】
[0006]本发明涉及一种从菊芋叶中分离二咖啡酰基奎尼酸组分的方法。菊芋叶用乙醇水 溶液提取获得菊芋叶醇提液，醇提液采用醇盐双水相萃取获得酚酸部位，再经大孔吸附树 脂柱分离获得二咖啡酰基奎尼酸组分。
[0007]本方法具体使用步骤如下：
[0008] 1)提取
[0009]将菊芋叶用60-80%乙醇水溶液按照lg:10-20ml的比例回流或超声波提取，过滤， 滤液回收乙醇或加水调至适当醇浓度的溶液，即得菊芋叶醇提液。
[0010] 2)醇盐双水相萃取
[0011] 按适当比例加入无机盐至菊芋叶醇提液，搅拌均匀，静置分层，抽取上层醇相，添 加用无机盐水溶液预饱和的新鲜乙醇，再萃取1-2次，合并上层醇相，浓缩至近干，得含盐 酚酸部位。
[0012] 3)脱盐
[0013] 将上述含盐酚酸部位用纯乙醇溶解，过滤，回收不溶性盐，滤液回收乙醇并浓缩至 近干，获得酚酸部位。
[0014] 4)大孔吸附树脂柱分离
[0015] 上述酚酸部位用水溶解后，上大孔吸附树脂柱进行分离，依次以3-5倍柱体积 20-30%、40%乙醇洗脱，收集40%乙醇流分，蒸干获得含量大于90%的二咖啡酰基奎尼酸组 分。
[0016] 醇盐双水相萃取过程中使用的盐为无机盐，包括硫酸铵、硫酸钠、碳酸钠、碳酸钾、 磷酸钾、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾中的一种或多种。
[0017] 醇盐双水相萃取过程中乙醇浓度控制在20-50%间，盐浓度控制在10-30%间。
[0018] 树脂柱分离所使用的大孔吸附树脂柱填料为非极性大孔树脂。
[0019] 采用本发明与传统方法相比具有以下优点：
[0020] 1)采用本方法可以高效低成本提取分离获得高含量二咖啡酰基奎尼酸产物。菊芋 叶资源丰富，工艺过程简单，可用于从菊芋叶中分离获得高含量二咖啡酰奎尼酸类物质。
[0021] 2)本方法过程中不使用乙酸乙酯等有机溶剂，仅使用乙醇，无机盐，水作为溶剂， 对环境友好，产物绿色环保，同时可以降低分离成本。
【附图说明】
[0022] 图1为二咖啡酰基奎尼酸组分产物分析图。
【具体实施方式】
[0023] 现结合实施例和附图对本发明做进一步详细说明，实施例仅限于说明本发明，而 非对本发明的限定。
[0024] 实施例1
[0025] 100g菊芋叶用1000ml60%乙醇水溶液回流提取2小时，共提取3次，合并提取液， 过滤，滤液回收乙醇至醇浓度为20%，获得600ml菊芋叶醇提取液。加入180g硫酸铵，搅 拌均匀，静置分层，抽取上层醇相，添加用30%硫酸铵水溶液（g/ml)预饱和的新鲜乙醇，再 萃取1次，合并上层醇相，浓缩至近干，得含盐的菊芋叶酚酸部位。用纯乙醇溶解含盐的菊 芋叶酚酸部位，过滤，滤液回收乙醇并浓缩至近干，获得3. 6g菊芋叶酚酸部位。菊芋叶酚 酸部位用水溶解后，上D101大孔吸附树脂柱进行分离，依次以5倍柱体积30%、3倍柱体积 40%乙醇洗脱，收集40%乙醇流分，浓缩，获得0. 14g含量为90. 2%( 1，5-二咖啡酰奎尼酸和 4, 5-二咖啡酰奎尼酸合计)二咖啡酰基奎尼酸组分。组分分析图见图1，含量测定结果见表 1〇
[0026] 表1 :二咖啡酰基奎尼酸组分产物分析结果
[0027]
【主权项】
1. 一种从菊芋叶中分离二咖啡酰基奎尼酸组分的方法，其特征在于： 菊芋叶用乙醇水溶液提取获得菊芋叶醇提液，醇提物采用双水相萃取获得菊芋叶酚酸 部位，再经大孔吸附树脂柱分离获得二咖啡酰基奎尼酸组分；本方法具体步骤如下： 1) 提取 将菊芋叶用60-80%乙醇水溶液按照lg:10-20ml的比例回流或超声波提取，过滤，滤液 回收乙醇或加水调至适当醇浓度的溶液，即得菊芋叶醇提液； 2) 醇盐双水相萃取 按适当比例加入无机盐至菊芋叶醇提液，搅拌均匀，静置分层，抽取上层醇相，添加用 无机盐水溶液预饱和的新鲜乙醇，再萃取1-2次，合并上层醇相，浓缩至近干，得含盐的菊 芋叶酚酸部位； 3) 脱盐 将上述含盐的菊芋叶酚酸部位用纯乙醇溶解，过滤，滤液回收乙醇并浓缩至近干，获得 菊芋叶酚酸部位； 4) 大孔吸附树脂柱分离 上述菊芋叶酚酸部位用水溶解后，上大孔吸附树脂柱进行分离，依次以3-5倍柱体积 20-30%乙醇、40%乙醇洗脱，收集40%乙醇流分，蒸干获得含量大于90%的二咖啡酰基奎尼 酸组分。
2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于：醇盐双水相萃取过程中使用的盐为无机 盐，包括硫酸铵、硫酸钠、碳酸钠、碳酸钾、磷酸钾、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾中的一种或多 种。
3. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于：醇盐双水相萃取过程中乙醇浓度控制在 20-50%间，盐浓度控制在10-30%间。
4. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于：树脂柱分离所使用的大孔吸附树脂柱填 料为非极性大孔树脂。
【专利摘要】本发明涉及一种从菊芋叶中分离二咖啡酰基奎尼酸组分的方法。菊芋叶用乙醇水溶液提取获得菊芋叶醇提液，醇提液采用醇盐双水相萃取获得菊芋叶酚酸部位，再经大孔吸附树脂柱分离获得二咖啡酰基奎尼酸组分。本方法过程简单有效，条件温和，成本低，适于大规模分离二咖啡酰基奎尼酸组分。
【IPC分类】C07C69-732, C07C67-58, C07C67-48
【公开号】CN104710312
【申请号】CN201310687786
【发明人】肖红斌, 高明哲, 刘丹, 洪志来
【申请人】中国科学院大连化学物理研究所
【公开日】2015年6月17日
【申请日】2013年12月13日