具体的部位特异性变异的导入方 法，可以列举利用重叠延伸（SOE)PCR反应（Horton et al. ,Gene 77,61-68,1989)的方 法、ODA 法（Hashimoto-Gotoh et al.，Gene, 152, 271-276, 1995)、Kunkel 法（Kunkel，T. A.，Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1985, 82, 488)等。另外，可以利用 Site-Directed Mutagenesis System Mutan-SuperExpress Km 试剂盒（TAKARA BIO INC.)、Transformer TM Site-Directed Mutagenesis 试剂盒（Clonetech 公司）、KOD-Plus-Mutagenesis 试剂 盒（T0Y0B0 CO.，LTD)等市售的试剂盒。另外，在施以无规的基因变异之后，通过适当的方 法进行酶活性的评价和基因分析可以获得靶标基因。具体而言，通过使用无规克隆的DNA 片段引起同源重组的方法或者照射γ射线等可以进行无规的基因变异。
[0052] 3.转化体
[0053] 本发明的转化体是在具有编码上述（a)~（c)中任一种蛋白质的基因的宿主中， 该基因缺失、变异或者表达抑制，并且与该宿主相比，醇氧化酶活性降低的转化体。通过该 基因缺失、变异或者表达抑制，从而本发明的转化体与转化前的宿主相比，醇氧化酶活性降 低。其结果推测为，转化体内的醇代谢路径被阻碍，成为糖脂质合成的原料的醇不在醇代谢 路径中被消耗而被有效利用于糖脂质合成中，因此糖脂质的生产率提高。
[0054] 本发明的转化体可以通过使宿主中的上述醇氧化酶基因缺失、变异或者表达抑制 来得到。
[0055] 作为转化体的宿主，可以是具有编码上述（a)~（C)中任一种蛋白质的基因的物 质。从糖脂质的生产率提高的观点出发，作为宿主优选具有编码上述（a)~（c)中任一种 蛋白质的基因的微生物。
[0056] 作为该微生物，从操作性的提高、糖脂质的生产率提高的观点出发，优选为酵母。 作为酵母，可以列举属于假丝酵母(Candida)属的菌类、属于红酵母(Rhodotorula)属的菌 类、属于毕赤酵母(Pichia)属的菌类、属于拟威克酵母(Wickerhamiella)属的菌类、或者 属于StarmerelIa属的菌类等。
[0057] 作为属于上述假丝酵母(Candida)属的菌类，可以列举假丝酵母菌(Candida bomb i Co la)(另 Ij 名：Starmerella bombicola)、峰牛假丝酵母菌(Candida apicola)、假丝 酵母菌(Candida batistae)、假丝酵母菌(Candida floricola)、假丝酵母菌(Candida riodocensis)或者星形假丝酵母菌(Candida stellata)等。
[0058] 作为属于红酵母(Rhodotorula)属的菌类、属于毕赤酵母(Pichia)属的菌类、 属于拟威克酵母(Wickerhamiella)属的菌类、或者属于Starmerella属的菌类，可以歹[| 举Rhodotorula bogoriensis、异常毕赤酵母(Pichia anomala)PYl、或者拟威克酵母 (Wickerhamiella domercgiae)等。
[0059] 其中，从糖脂质的生产率提高的观点出发，优选属于假丝酵母(Candida)属的菌 类，进一步优选为假丝酵母菌(Candida bomb i col a)、蜂生假丝酵母菌(Candida apicola)、 假丝酵母菌(Candida batistae)、假丝酵母菌(Candida floricola)、假丝酵母菌(Candida riodocensis)或者星形假丝酵母菌(Candida stellata)，更加优选为假丝酵母菌(Candida bombiCola) 〇
[0060] 另外，上述宿主微生物可以从ATCC(美国模式菌种收集中心（American Type Culture Collection))、NBRC(日本技术评价研宄所生物资源中心（Biological Resource Center, NITE))等的生物遗传资源保藏中心等获得。
[0061] 作为从宿主基因组使本发明的醇氧化酶基因缺失、变异或者表达抑制的方法，可 以通过从基因组中除去靶标基因的一部分或者全部、或者将其与其它基因置换、在该基因 中插入其它的DNA片段、在该基因的转录·翻译开始区域中赋予变异等的方法来进行。其 中，在本发明中，优选使本发明的醇氧化酶基因从宿主基因组中物理地缺失而成的转化体。
[0062] 上述缺失?变异?表达抑制方法可以使用同源重组来进行。例如，通过PCR等的 方法构筑包括靶标基因的上游、下游区域但是不包含靶标基因的直链状DNA片段，并将其 整合至宿主细胞内而使得在革巴标基因上游侧、下游侧引起双交换（double crossover)的同 源重组，从而使基因组上的靶标基因缺失或者和其它基因片段置换。另外，通过PCR等方法 来构筑导入有碱基置换或者碱基插入等变异的靶标基因，并且将其整合至宿主细胞内从而 在宿主基因组的靶标基因内的变异位点的外侧的两处引起双交换的同源重组，从而使基因 组上的靶标基因的功能降低或者消失。另外，将包含靶标基因的一部分的DNA片段克隆于 适当的质粒载体中，使由此得到的环状重组质粒整合至宿主细胞内，通过在靶标基因的一 部分区域中同源重组而将宿主基因组上的靶标基因切割，从而能使其功能降低或消失。
[0063] 通过这样的同源重组引发的靶标基因的缺失?变异?表达抑制方法例如可以参考 Besher et al·，Methods in molecular biology 47, P. 291-302, 1995 等的文献进行。
[0064] 对于在宿主中导入同源重组用的DNA片段或者质粒的方法，可以列举电脉冲法、 原生质体法、醋酸锂法、以及它们的改变方法等在酵母的转化中通常使用的方法。
[0065] 例如通过电脉冲法进行的情况下，可以使增殖到对数增殖期的宿主细胞与同源重 组用的DNA片断或者质粒悬浊于山梨糖醇溶液等中，施加电脉冲。在使同源重组用的DNA 片断或者质粒与宿主细胞相接触的时候，还优选通过添加鲑鱼精DNA等的载体DNA或聚乙 二醇等来提高转化频率。电脉冲的条件优选为时间常数值（time constant)(电压衰减至 最大值的约37%的时间）约为10到20毫秒，脉冲后的活菌率约为10~40%的条件。在 施加电脉冲之后，将菌液洒入含有山梨糖醇溶液的培养基中选择转化体。
[0066] 靶标基因缺失的转化体的选择可以通过从转化体中提取基因组DNA，以包含靶标 基因部位的区域为对象进行PCR的方法；或者使用了结合于靶标基因区域的DNA探针的 DNA印迹技术（Southern blotting)法等来进行。
[0067] 在本发明的转化体中，与宿主（即转化前的状态）相比，醇氧化酶活性降低。从糖 脂质的生产率提高的观点出发，转化体的醇氧化酶活性相对于宿主的醇氧化酶活性优选为 70%以下，进一步优选为50%以下，更加优选为30%以下，更进一步优选为20%以下，更加 进一步优选为10%以下。在此，上述醇氧化酶活性可以通过实施例中记载的方法来测定。
[0068] 4.糖脂质的制造方法
[0069] 本发明的糖脂质的制造方法可以使用上述转化体来进行，并且包括下述（1)和 (2)的工序。
[0070] (1)在含有醇和糖的培养基中培养上述转化体的工序、
[0071] (2)从得到的培养物中采集糖脂质的工序
[0072] 另外，本发明中在培养基中培养转化体当然包括微生物或者动植物或者其细 胞?组织的培养，还包括用土壤等栽培植物体。另外，在培养物中包含培养·栽培等过的培 养基以及转化体。
[0073] 培养转化体的培养基中作为糖脂质合成的原料含有醇和糖。
[0074] 从将得到的糖脂质作为表面活性剂使用的观点出发，上述醇优选为碳原子数为10 以上且22以下的醇，进一步优选为碳原子数为12以上且18以下的醇，更加优选为碳原子 数为12以上且14以下的醇。另外，上述醇从同样的观点出发，优选为伯醇或者仲醇。
[0075] 作为优选的醇的具体例子，可以列举1-癸醇、1-十一烷醇、1-十二烷醇、1-十三 烷醇、1-十四烷醇、1-十五烷醇、1-十六烷醇、1-十七烷醇、1-十八烷醇、1-油醇、1-二十 烷醇、1-二十二烷醇等的伯直链饱和或者不饱和醇；2-癸醇、2-^烷醇、2-十二烷醇、 2-十三烷醇、2-十四烷醇、2-十五烷醇、2-十六烷醇、2-十七烷醇、2-十八烷醇等的仲饱和 或者不饱和醇等。其中，优选1-十一烷醇、1-十二烷醇、1-十三烷醇、1-十四烷醇、1-十五 烷醇、1-十六烷醇、2-十一烷醇、2-十二烷醇、2-十三烷醇、2-十四烷醇、2-十五烷醇、 2-十六烷醇，进一步优选为1-十二烷醇、1-十三烷醇、1-十四烷醇、2-十二烷醇、2-十三烷 醇、2-十四烷醇、2-十五烷醇，更加优选为1-十四烷醇。
[0076] 从获取性以及处理性提高的观点出发，上述糖优选为葡萄糖、蔗糖、果糖、麦芽糖、 淀粉水解物（淀粉糖浆）、纤维素水解物、或者糖蜜（molasses)。其中从将得到的糖脂质作 为表面活性剂使用的观点出发，进一步优选为葡萄糖、麦芽糖、或者糖蜜，更加优选为葡萄 糖。
[0077] 醇和糖以外的培养成份可以根据宿主的种类适当选择。
[0078] 例如，在宿主为微生物的情况下，作为碳源可以使用山梨糖醇或甘油等糖醇类、柠 檬酸等的有机酸类等，作为氮源可以使用酵母提取物、氯化铵、硝酸铵、磷酸铵、氨水、尿素、 大豆蛋白质、麦芽提取物、氨基酸、蛋白胨、玉米浆等，作为无机盐类可以使用锰盐、镁盐、钙 盐、钠盐、铁离子、铜离子、硫酸盐、磷酸盐等，作为维生素类可以使用生物素、肌醇等。
[0079] 特别地，在宿主为酵母的情况下，作为氮源优选使用酵母提取物、氯化铵、尿素等， 作为无机盐类优选使用七水硫酸镁、氯化钠、二水氯化钙、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾等。根据 情况不同还可以添加消泡剂等。
[0080] 转化体的培养条件可以根据宿主的种类选择适当优选的培养条件。
[0081] 例如，在宿主为微生物的情况下，培养基的pH优选调节到2. 5~9. 0左右。pH的调 节可以使用无机或者有机的酸、碱溶液、尿素、碳酸钙、氨等来进行。培养温度优选为15~ 35°C左右，进一步优选为25~32°C左右。培养时间优选为6~200小时左右，进一步优选 为24~148小时左右。还可以根据必要加入通气或搅拌。
[0082] 特别地，在宿主为酵母的情况下，培养基的pH优选调节到使用的酵母能够繁殖的 范围，例如pH3. 0~8. 0左右。培养温度优选为15~35°C左右，进一步优选为28~32°C 左右。培养时间优选为48~148小时左右，优选振荡或者通气搅拌培养。
[0083] 在培养转化体并产生糖脂质之后，从培养物（培养体或培养液等）中将糖脂质分 离