长链非编码rna及在制备抑制结直肠癌细胞转移药物的应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于基因工程领域，具体涉及一种与人结直肠癌转移相关的长链非编码 RNA(S卩IncRNA-DRIC)及其在制备抑制结直肠癌细胞转移药物中的应用。
【背景技术】
[0002] 根据资料显示，2014年全球结直肠癌（colorectalcancer，CRC)新发病例占全部 癌症的8%，发病率和死亡率均排第3位。在中国，结直肠癌已成为最常见的十大恶性肿瘤 之一，近年来发病率持续上升。据统计，我国2010年大肠癌的发生率为20. 9/105,死亡率为 10. 05/105,分别位居我国肿瘤发生率的第6位和死亡率的第5位。因此，阐明大肠癌的发 生、发展的分子机制，寻找新的诊断和治疗靶点，将有助于其早期诊断、预后预测及提高治 疗效果。
[0003] 长链非编码RNA(longnon-codingRNAs，IncRNA)是一类转录本长度超过200nt 的RNA分子，它们几乎不编码蛋白，由RNA聚合酶II转录并经可变剪切形成，转录水平低于 蛋白质编码基因，曾一度被认为是基因组转录的"噪音"。近来研宄证实，IncRNA能在表观 遗传学、转录调控、转录后调控等多种层面上调控基因的表达水平，参与生物体的发育、分 化等基本生命过程，其表达或功能异常与人类心血管疾病、神经系统疾病、肿瘤等疾病的发 生发展密切相关。IncRNA有望成为肿瘤诊断、预测预后的标志物，同时也为肿瘤的治疗提供 了新的靶点。
【发明内容】
[0004] 本发明的首要目的在于提供一种与人结直肠癌转移相关的长链非编码RNA-一 IncRNA-DRIC，IncRNA-DRIC有可能成为结直肠癌转移的标志物。
[0005] 本发明的另一目的在于提供IncRNA-DRIC在制备抑制结直肠癌细胞转移药物中 的应用。
[0006] 本发明的目的通过下述技术方案实现：
[0007] 一种与人结直肠癌转移相关的长链非编码RNA，是IncRNA-DRIC，其转录本序列如 SEQ ID N0:1所示。
[0008] IncRNA-DRIC在结直肠癌中的表达水平明显低于正常肠上皮。进一步构建其表达 载体plNCX2-lncRNA-DRIC，转染结直肠癌细胞HCT116后，发现相较于对照组，IncRNA-DRIC 过表达可以抑制结直肠癌细胞的迀移。因此，IncRNA-DRIC可以用于制备抑制结直肠癌细 胞转移的药物。
[0009] 本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：
[0010] 本发明首次发现一个长链非编码RNAIncRNA-DRIC在结直肠癌组织中的特异性表 达，并证明其抑制结直肠癌细胞的迀移，为结直肠癌转移的辅助诊断提供了新的有力工具， 也提供了一个具有基因治疗潜力的RNA过表达载体，具有重要的意义和极大的应用价值。
【附图说明】
[0011] 图1是IncRNA-DRIC在79例结直肠癌组织及配对的正常肠上皮组织的表达量示 意图（N代表正常组织，T代表肝癌组织）。
[0012] 图2是过表达IncRNA-DRIC的HCT116细胞及对照细胞的迀移实验结果示意图。
【具体实施方式】
[0013] 下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限 于此。
[0014] 实施例1
[0015] IncRNA-DRIC的克隆，包括以下步骤：
[0016] 1.临床组织样本收集
[0017] 收集中山大学附属肿瘤医院2004-2009年期间存档的结直肠癌冰冻新鲜组织标 本及其配对正常肠上皮组织共79对。以上标本用于科学研宄均获得患者的知情同意。
[0018] 2.IncRNA定量PCR实验：
[0019] (l)RNA抽提
[0020] 利用Trizol从冰冻组织中抽提总RNA，用紫外分光光度计测定RNA的浓度和纯度。
[0021] (2)逆转录反应
[0022] ①在PCR管中加入以下试剂：
[0023]总RNA 2ug
[0024]随机引物（〇? 5ug/ul) lul
[0025] 无RNA酶双蒸灭菌水补至10ul
[0026] ②置PCR仪中70°C、5min，立即放入冰中静置至少2min ;
[0027] ③再在上述PCR管中依次加入以下试剂：
[0028]
【主权项】
1. 一种与人结直肠癌转移相关的长链非编码RNA，是IncRNA-DRIC，其转录本序列如 SEQ ID NO: 1 所示。
2. -种重组质粒，其特征在于：含有权利要求1所述的IncRNA-DRIC的序列，并且能在 哺乳动物细胞中表达IncRNA-DRIC。
3. 权利要求1所述的IncRNA-DRIC在制备抑制结直肠癌细胞转移药物中的应用。
4. 根据权利要求3所述的IncRNA-DRIC在制备抑制结直肠癌细胞转移药物中的应用， 其特征在于：所述的药物中含有权利要求1所述的IncRNA-DRIC的序列和/或含有权利要 求2所述的重组质粒。
【专利摘要】本发明公开了一种与人结直肠癌转移相关的长链非编码RNA(即lncRNA-DRIC)及其在制备抑制结直肠癌细胞转移药物中的应用。lncRNA-DRIC的转录本序列如SEQ ID NO:1所示。实验表明，lncRNA-DRIC在结直肠癌组织中表达下调，过表达lncRNA-DRIC可以抑制结直肠癌细胞迁移。本发明首次发现一个长链非编码RNA lncRNA-DRIC在结直肠癌组织中的特异性表达，并证明其抑制结直肠癌细胞的迁移，为结直肠癌转移的辅助诊断提供了新的有力工具，也提供了一个具有基因治疗潜力的RNA过表达载体，具有重要的意义和极大的应用价值。
【IPC分类】C12N15-113, C12N15-85, A61K31-7105, A61K48-00, A61K35-04
【公开号】CN104830865
【申请号】CN201510304553
【发明人】黄文林, 林嘉欣, 陈帅, 吴江雪
【申请人】黄文林
【公开日】2015年8月12日
【申请日】2015年6月5日