26.实施方案22的胰细胞或胰细胞前体，其中所述化合物为JNK抑制剂II与表 2中所列的视黄酸受体激动剂的组合。
[0075] 27.实施方案22的胰细胞或胰细胞前体，其中JNK抑制剂II与AM580组合。
[0076] 28.实施方案22的胰细胞或胰细胞前体，其中JNK抑制剂II与AM580和bFGF组 合。
[0077] 29.实施方案28的胰细胞或胰细胞前体，其中bFGF为FGF2、FGF7或FGF10。
[0078] 30.实施方案29的胰细胞或胰细胞前体，其中bFGF为FGF7。
[0079]31.表1或2的化合物从干细胞诱导胰细胞或胰细胞前体的用途。
[0080] 32.JNK抑制剂II从干细胞诱导胰细胞或胰细胞前体的用途。
[0081] 33.JNK抑制剂II与视黄酸受体激动剂组合从干细胞诱导胰细胞或胰细胞前体 的用途。
[0082] 34.JNK抑制剂II与AM580组合从干细胞诱导胰细胞或胰细胞前体的用途。
[0083] 35.LDN-193189从干细胞诱导胰细胞或胰细胞前体的用途。
[0084] 36.LDN-193189随后环巴胺或IWP2从干细胞诱导胰细胞或胰细胞前体的用途。
[0085] 37.LDN-193189随后环巴胺从干细胞诱导胰细胞或胰细胞前体的用途。
[0086] 38.LDN-193189随后IWP2从干细胞诱导胰细胞或胰细胞前体的用途。
[0087] 39.LDN-193189随后JNK抑制剂II、AM580和bFGF的组合从干细胞诱导胰细胞 或胰细胞前体的用途。
[0088] 40.LDN-193189 随后JNK抑制剂II、AM580、LDN-193189 和bFGF的组合从干细胞 诱导胰细胞或胰细胞前体的用途。
[0089] 41.LDN-193189 随后JNK抑制剂II、AM580、LDN-193189、bFGF和环巴胺或IWP2 的组合从干细胞诱导胰细胞或胰细胞前体的用途。
[0090] 42.LDN-193189 随后JNK抑制剂II、AM580、LDN-193189、bFGF和环巴胺的组合从 干细胞诱导胰细胞或胰细胞前体的用途。
[0091] 43.LDN-193189 随后JNK抑制剂II、AM580、LDN-193189、bFGF和IWP2 的组合从 干细胞诱导胰细胞或胰细胞前体的用途。
[0092] 44.产生表达至少5%PDX1/NKX6. 1双阳性的胰细胞或胰细胞前体的方法，包括将 定形内胚层细胞暴露于有效量的下列各组化合物的至少一种： a. BMP抑制剂，和 b. 激酶抑制剂，和 c. 视黄酸受体激动剂， 以使定形内胚层细胞分化为胰细胞或胰细胞前体。
[0093] 45.实施方案44的方法，其中所述BMP抑制剂为LDN-193189。
[0094] 46.实施方案44的方法，其中所述视黄酸受体激动剂为AM580。
[0095] 47.实施方案44的方法，其中所述视黄酸受体激动剂为视黄酸衍生物。
[0096] 48.实施方案44的方法，其中所述激酶抑制剂为具有或不具有N-烷基化的 1，9-吡唑并蒽酮的异构体。
[0097] 49.实施方案44的方法，其中所述激酶抑制剂为JNK抑制剂II并且与AM580组 合。
[0098] 50.实施方案44的方法，其中所述激酶抑制剂和视黄酸受体激动剂与bFGF组合。
[0099]51.实施方案44的方法，其中所述激酶抑制剂和视黄酸受体激动剂与FGF7或 FGF10组合。
[0100] 52.实施方案44-46的方法，包括将定形内胚层细胞暴露于有效量的无bFGF的LDN-193189的第一步骤，和在bFGF存在下暴露于JNK抑制剂II与AM580的组合的第二步 骤。
[0101] 53.实施方案44-46的方法，包括将定形内胚层细胞暴露于有效量的 LDN-193189,随后暴露于由以下组成的组中的至少一种化合物： wnt抑制剂，例如IWP2,和/或hedgehog抑制剂，例如环巴胺。
[0102]54.实施方案44-53中任一个的方法，其中所述胰细胞或胰细胞前体为至少5%、 至少10%、10-30%、10-40%、5-70%、10-80%或5-100%?0父1/^?6.1双阳性。
[0103] 55.可通过体外使用实施方案44-54的方法获得的胰细胞或胰细胞前体。
[0104] 56.通过将定形内胚层细胞体外暴露于靶向JNK1、2或3、或Syc或Src或GSK-3或 P38MAPK或P38激酶或Rho激酶或MEK或Chk2或VEGFR1、2或3或PDGFRb或KDR/Flk-1 的激酶抑制剂而产生的胰细胞或胰细胞前体。
[0105] 57.通过实施方案56的方法产生的胰细胞或胰细胞前体，其中激酶抑制剂为JNK 抑制剂II，且其中定形内胚层细胞还暴露于下列化合物的至少一种： LDN-193189， Wnt抑制剂，hedgehog抑制剂， 视黄酸受体激动剂。
[0106] 58.实施方案56的胰细胞或胰细胞前体，其中将定形内胚层细胞暴露于JNK抑制 剂II与表2中所列视黄酸受体激动剂的组合。
[0107] 59.表1或2的激酶抑制剂化合物从胰内胚层前体诱导胰细胞或胰细胞前体的用 途。
[0108] 60.JNK抑制剂II和LDN-193189组合从胰内胚层前体诱导胰细胞或胰细胞前体 的用途。
[0109] 61.JNK抑制剂II与视黄酸受体激动剂组合从胰内胚层前体诱导胰细胞或胰细 胞前体的用途。
[0110] 通用方法 多能干细朐的体外培养 将人胚胎干（hES)细胞系SA121和人诱导的多能干细胞（hiPSC)chIPS4 (Cellectis) 生长在175培养瓶中的DEF-CS培养基（Cellectis)中。细胞为用5剛Rock抑制剂Y-27632 (Sigma#Y0503)传代的单细胞，以40000个细胞/cm2的密度接种用于实验。细胞在增湿培 养箱（ThermoScientificModel371)中于 37°C和 5% (：02下培养。
[0111] 多能干细_体外分化为定形内胚层 将汇合的hES细胞（系SA121)和hiPSC(chIPS4)培养物在RPMI1640(Gibco#61870)中洗涤一次并用3剛CHIR99021 (Axon#1386)/RPMI1640处理。24小时后细胞用RPMI1640 洗涤并用100ng/ml激活蛋白A(P印rotech#120-14E)/RPMI1640处理。24小时后，向激 活蛋白A培养基中加入2%B27(Invitrogen#17504-044)持续2天，每天更换培养基。分 化期间将细胞在增湿培养箱中维持在37°C和5%C02下。
[0112] 接种 hES和 hiPS细朐,衍牛的宙形内胚层 将人ES细胞衍生的DE和人iPS细胞衍生的DE细胞在PBS-/-中洗涤并使用Tryple Select(Invitrogen, 12563-029)胰蛋白酶消化5分钟。将DE细胞小心悬浮在RPMI1640 中，洗涤一次，然后重悬在DE接种培养基（激活蛋白A100ng/ml、2%B27、RPMI1640、0. 1% PEST(Gibco#15140))中。DE细胞以 200 000/cm2接种在 96 孔光学板（BDBioscience) 中，次日开始使用筛选化合物进行PE分化。
[0113] 分析 PE分化的第8或14天，吸去培养基，然后用4%低聚甲醛（VWR，97. 131.000)室温固定 细胞30分钟。细胞用PBS洗涤并用0.5%TritonX-100 (Sigma, 9002-93-1)透化10分 钟，洗涤并在0.5%TNB-缓冲液（PerkinElmer)中室温封闭30分钟。将第一抗体小鼠抗-NKX6. 1 (Abcore#A55F12)和山羊抗-PDX1 (Abcam#47383)分别在 0? 1%TritonX-100/PBS 中1:500和1:8000稀释，加入各个孔中以在4°C过夜孵育。用PBS洗涤细胞3次。将DAPI (4'，6-二脒基-2-苯基吲哚，4口口11(*6111，44099.0010)和第二抗体，41613?111(^488 驴 -抗山羊和AlexaFluor594 驴抗-小鼠（均为Invitrogen)在 0.1%TritonX-100/ PBS中1:1000稀释，并加入每个孔中45分钟。将细胞洗涤5次，保持在200MLPBS中用于 成像。
[0114] 成像使用InCell分析仪2000(GEHealthcare)进行。用10x物镜捕获4个视 野/孔。总细胞数目基于DAPI复染，NKX6. 1/H)X1双阳性细胞数目使用InCellDeveloper Toolbox1.8(GEHealthcare)测定。将NKX6.1/TOX1双阳性细胞分数归一化至每个板的 基准并计算％效果。超过200%效果的值归类为命中。 实施例
[0115] 胰内胚层特征在于共表达两个转录因子，NKX6. 1和H)X1。许多已发表的用于制备 PE的方案无效，且NKX6. 1/roXl双阳性细胞产量低。增加PE方案有效性为期需的结果。因 此我们筛选了小分子文库以鉴定将改进现有PE方案的新型化合物。这基于以下假设进行： 抑制剂、激动剂或拮抗剂可调节信号传导途径或染色体可接近性，这将提高NKX6.i/roxi 双阳性细胞的分数。
[0116] 实施例1-筛选诱导NKX6. 1/H)X1共表达的小分子 小分子 本筛选中包含四个不同的文库：激酶抑制剂文库（Calbiochem#539743)、生物活性 脂质文库（EnzoLifeSciences#BML_2800)、核受体配体文库（EnzoLifeSciences# BML-2802)和磷酸酶抑制剂文库（EnzoLifeSciences#BML-28