长链非编码rna、其序列及用图
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物技术和医学领域。具体而言，本发明涉及一种长链非编码RNA-- lnc-DC，其在促进专职抗原提呈细胞--树突状细胞的成熟和功能中的应用。
【背景技术】
[0002] 哺乳动物基因组可转录多种长非编码RNA(long noncoding RNA，IncRNA)，而其中 仅鉴定出少数IncRNA的功能。虽然已报道某些IncRNA在某些过程和疾病中起到重要作用， 但关于IncRNA与免疫系统之间的研究并不多，更没有任何涉及IncRNA与树突状细胞之间 关系的研究报道。
[0003] 树突状细胞（dendritic cells，DC)是免疫系统中重要的抗原递呈细胞，其功能特 点是能激发初始型T细胞（naive T cells)免疫反应，是目前所发现的最重要的抗原提呈 细胞（antigen presenting cells, APC)，它在机体抗肿瘤、抗感染、移植排斥及自身免疫性 疾病的预防与治疗中发挥着重要作用。树突状细胞的成熟和功能状态决定着免疫应答的走 向和强度，在免疫反应中发挥着重要的调控作用。许多临床疾病都是由于树突状细胞的发 育和功能异常导致的。
[0004] 在肿瘤的临床治疗中，可以用肿瘤抗原致敏的树突状细胞体内回输从而诱导出抗 原特异性免疫应答反应，这种治疗策略称为DC疫苗治疗。近年来DC疫苗在抗肿瘤免疫和 抗感染免疫中得到应用。
[0005] 众多的细胞膜表面分子、信号分子、转录因子等在DC的分化成熟中发挥着重要作 用，如GM-CSF、Flt3/Flt3L以及PU. 1、STAT3等，也确定了很多DC功能相关的蛋白分子，如 ⑶80/86、⑶40、MHC等。但是，尚不清楚对DC免疫功能调控的作用机制。
[0006] 因此，从DC中寻找新型调控分子有助于实现对DC的功能调控及对机体免疫应答 的调控，也可用于确定在免疫相关疾病防治中具有一定应用价值的基因。为方便临床和科 研应用，本领域中迫切需要研究和开发出可调节树突状细胞（尤其是常规树突状细胞）成 熟和功能的特异性分子。
【发明内容】
[0007] 本发明的主要目的之一在于提供一种调节常规树突状细胞的成熟状态和/或功 能的物质--Inc-DC及其杂交或同源序列、其表达产物、或它们的抑制剂或促效剂。本发 明的另一目的在于提供以上物质在调节常规树突状细胞的成熟状态和/或功能中的应用 以及相应的药物和试剂盒。
[0008] 在本发明的第一方面中，提供了选自下组的序列或其表达产物、或其抑制剂或促 效剂在调节常规树突状细胞的成熟状态和/或功能中的应用：
[0009] (a) SEQ ID NO: 1 或 SEQ ID NO:2 所示的序列；
[0010] (b)在严格条件下与（a)限定的序列杂交的序列；
[0011] (c)与（a)或（b)中序列具有90%以上序列相同性的序列；和
[0012] (d) (a)或（b)中序列在非人哺乳动物中的同源序列。
[0013] 在本发明的第二方面中，提供了选自下组的序列或其表达产物、或其抑制剂或促 效剂在制备调节常规树突状细胞的成熟状态和/或功能的药物或试剂盒中的应用：
[0014] (a) SEQ ID NO: 1 或 SEQ ID NO: 2 所示的序列；
[0015] (b)在严格条件下与（a)限定的序列杂交的序列；
[0016] (c)与（a)或（b)中序列具有90%以上序列相同性的序列；和
[0017] (d) (a)或（b)中序列在非人哺乳动物中的同源序列。
[0018] 在本发明的一些实施方式中，所述序列是SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO:2所示的序 列或SEQ ID NO: 16所示的同源序列。
[0019] 在一些实例中，所述常规树突状细胞来源于哺乳动物，优选人、大鼠、小鼠、犬、猴、 猩猩、猪、马、牛或羊，更优选人。
[0020] 在本发明的一些实施方式中，所述成熟状态选自：细胞表面共刺激分子的表达 ⑶80/86、⑶40,抗原递呈分子HLA的表达，免疫活化细胞因子IL-12的产生；所述功能选自： 激活初始T细胞应答、启动免疫应答、调控免疫应答、维持免疫应答、摄取抗原、加工处理抗 原和递呈抗原。
[0021 ] 在本发明的一些实施方式中，所述序列或其表达产物、或其促效剂促进常规树突 状细胞的成熟和/或促进其功能，优选与未接触所述序列或其表达产物、或其促效剂的对 照树突状细胞或前体细胞相比，增加成熟树突状细胞表面表达的功能分子（如抗原递呈分 子HLA-DR、共刺激分子⑶80和⑶40)、提高IL-12分泌、使树突状细胞活化⑶4 +T细胞的能 力提高（如T细胞分泌的IFN- γ和IL-2增加）、和/或使树突状细胞促进T细胞增殖的能 力提商。
[0022] 在本发明的一些实施方式中，所述序列或其表达产物的抑制剂阻碍常规树突状细 胞的成熟和/或阻碍其功能，优选与未接触所述抑制剂的对照树突状细胞或前体细胞相 t匕，减少成熟树突状细胞表面表达的功能分子（如抗原递呈分子HLA-DR、共刺激分子CD80 和⑶40)、降低IL-12分泌、使树突状细胞活化⑶4 +T细胞的能力降低（如T细胞分泌的 IFN- γ和IL-2减少）、和/或使树突状细胞促进T细胞增殖的能力降低。
[0023] 在本发明的一些实施方式中，所述促效剂选自：包含所述序列的表达载体、所述序 列的外源性表达产物、促使所述序列高表达的试剂；所述序列或其表达产物的抑制剂选自： 针对所述序列的RNAi、反义寡核苷酸、用于阻遏或降低所述序列表达的特异性抑制剂或阻 碍其功能的分子化合物等试剂。
[0024] 在一些实例中，所述RNAi的序列如SEQ ID NO: 11或12所示。
[0025] 在本发明的一些实施方式中，所述序列或其表达产物、或其抑制剂或促效剂进一 步用于对机体免疫应答的调控、防治免疫相关疾病、免疫治疗方案选择和/或预后评估。
[0026] 在一些实例中，所述免疫相关疾病选自：肿瘤、自身免疫病。
[0027] 在本发明的第三方面中，提供了一种药物或试剂盒，其包含：
[0028] i)有效量的选自下组的序列或其表达产物、或其抑制剂或促效剂：
[0029] (a) SEQ ID NO: 1 或 SEQ ID NO:2 所示的序列；
[0030] (b)在严格条件下与（a)限定的序列杂交的序列；
[0031] (c)与（a)或（b)中序列具有90%以上序列相同性的序列；和
[0032] (d) (a)或（b)中序列在非人哺乳动物中的同源序列；
[0033] ii)药学或免疫学上可结合的载体或辅料。
[0034] 在一些实例中，所述药物或试剂盒还包含：未成熟或成熟、经或未经致敏的常规树 突状细胞和/或其前体细胞，例如用肿瘤抗原致敏的常规树突状细胞；树突状细胞致敏剂。
[0035] 在本发明的第四方面中，提供了一种调节常规树突状细胞的成熟状态和/或功能 的方法、或诱导产生所需成熟状态和/或功能的常规树突状细胞或的方法，所述方法包括 使选自下组的序列或其表达产物、或其抑制剂或促效剂接触常规树突状细胞和/或其前体 细胞的步骤：
[0036] (a) SEQ ID NO: 1 或 SEQ ID NO:2 所示的序列；
[0037] (b)在严格条件下与（a)限定的序列杂交的序列；
[0038] (C)与（a)或（b)中序列具有90%以上序列相同性的序列；和
[0039] (d) (a)或（b)中序列在非人哺乳动物中的同源序列；
[0040] 在本发明的一些实施方式中，所述方法还包括：
[0041] 在所述接触步骤之前、之时或之后,使所述常规树突状细胞和/或其前体细胞与 树突状细胞致敏剂接触，优选所述致敏剂为肿瘤抗原。
[0042] 本领域的技术人员可对前述的技术方案和技术特征进行任意组合而不脱离本发 明的发明构思和保护范围。本发明的其它方面由于本文的公开内容，对本领域的技术人员 而目是显而易见的。
【附图说明】
[0043] 下面结合附图对本发明作进一步说明，其中这些显示仅为了图示说明本发明的实 施方案，而不是为了局限本发明的范围。
[0044] 图I =Inc-DC在各类免疫细胞中的表达量的qRT-PCR检测。图中，一个点代表一个 样品重复。
[0045] 图2 =Inc-DC在单核细胞到树突状细胞分化成熟过程中表达量的qRT-PCR检测。 图中所示结果为平均值土标准差（n=3)。
[0046] 图3 :qRT_PCR检测人单核细胞分化来的树突状细胞中Inc-DC的RNA水平，从而证 实Inc-DC干扰RNA的干扰效率；结果显示为平均值土标准差（n=3)。
[0047] 图4 :流式检测树突状细胞表面分子的表达，证明在Inc-DC干扰后树突状细胞功 能相关的分子的表达受到明显抑制；结果显示为平均值土标准差（n=3)。
[0048] 图5 =ELISA检测Inc-DC干扰后对树突状细胞分泌细胞因子IL-12的影响；结果显 示为平均值土标准差（n=3)。
[0049] 图6 :qRT-PCR检测IL-12A mRNA的表达，确定Inc-DC干扰后对LPS诱导IL-12产 生的作用；结果显示为平均值土标准差（n=3)。
[0050] 图7 :混合淋巴细胞实验检测树突状细胞在Inc-DC干扰后刺激活化同种异体 ⑶4+T细胞增殖的能力；结果显示为平均值土标准差（n=3)。
[0051] 图8 :混合淋巴细胞实验检测树突状细胞在Inc-DC干扰后刺激活化同种异体 ⑶4+T细胞分泌细胞因子IFN-γ和IL-2的能力；结果显示为平均值土标准差（n=3)。
[0052] 以上图中，Ctrl =对照。
【具体实施方式】
[0053] 本发明人从转录组芯