一种罗伊氏乳杆菌及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物制剂领域，特别是涉及一种罗伊氏乳杆菌及其应用。
【背景技术】
[0002] 罗伊氏乳杆菌，也称路氏乳杆菌，与人类、动物的生活关系密切，是一种常见于人、 猪、家禽及其他动物肠道中的乳酸菌，能通过胃并定植于肠道发挥有益作用，例如拥有维 持肠道内菌群的平衡、促进营养物质吸收、缓解乳糖不耐症及抑制肿瘤细胞的形成等多种 功能，目前研究报道较多的应用领域包括食品、饲料、医疗保健、化妆品、美容、水产养殖、工 农业生产、生物防腐剂、益生菌制剂等等。
[0003] 罗伊氏乳杆菌的多种生理功能，可作为宿主氮的来源。但当菌体耐酸，耐胆盐能力 不足时进不到肠道，就会失去它的作用。
[0004] 因此，要发挥这些益生作用，须首先能耐受人体胃肠的消化过程，能抵御胃液和胆 汁对其的杀灭作用。Berrada等报导食物在胃中排空的时间是90min，胃内PH值为3. 0,最 低可达1. 3,人体小肠胆汁液浓度在0. 03% -0. 3%之间。
[0005] 本发明针对人体及动物肠胃的生理条件从健康猪肠道中选育一株可以耐受人体 及动物胃酸和胆盐浓度的罗伊氏乳杆菌，从而可以在人体及动物体内定植，发挥益生作用。 同时该菌株对大肠菌有较好的抑制作用，可起到调节肠道微生物菌群的功能。
[0006] 根据目前的相关报导，要得到能够耐人体及动物胆盐的罗伊氏乳杆菌的方法有三 种：一是从自然界中筛选，二是从传统发酵食品中筛选，三是对现有菌种进行驯化。本发明 针对人体及动物肠胃的生理条件进行筛选，培育一株可以耐受人体及动物体胃酸和胆盐浓 度的罗伊氏乳杆菌，从而有可能在人体及动物体内定植，发挥其益生作用。
【发明内容】
[0007] 本发明的目的在于提供一种来源于健康猪肠道的罗伊氏乳杆菌，使得该罗伊氏乳 杆菌对酸、胆盐、有较好的耐受性，对大肠杆菌有较强的抑制效果，从而更加适于实用。
[0008] 本发明的另一目的在于提供一种罗伊氏乳杆菌的应用，该罗伊氏乳杆菌应用广 泛。
[0009] 本发明的目的及解决其技术问题是通过采用以下技术方案来实现的。依据本 发明提出的一种罗伊氏乳杆菌，也称路氏乳杆菌，它是罗伊氏乳杆菌LZ262,保藏号为 CGMCCNo. 11240,保藏日期为2015年08月14日。保藏单位是中国微生物菌种保藏管理委 员会普通微生物中心。
[0010] 本发明的目的及解决其技术问题还可采用以下技术措施进一步实现。
[0011] 本发明的第一方面，所述的罗伊氏乳杆菌发酵培养基有较高的活菌量。
[0012] 本发明的第二方面，所述的罗伊氏乳杆菌对酸、胆盐有较好的耐受性，可以在人体 及动物体内定植。
[0013] 本发明的第三方面，所述的罗伊氏乳杆菌在喷雾干燥后有较高的存活，具有一定 的耐温性，可以在颗粒饲料生产中直接参与造粒。
[0014] 本发明的第四方面，所述的罗伊氏乳杆菌对大肠杆菌有较强的抑制作用。
[0015] 本发明的第五方面，所述的罗伊氏乳杆菌对指定乳酸菌有良好的复配性。所述 的罗伊氏乳杆菌LZ262与下列乳酸菌之一或一种以上复配，有协同生长作用；嗜酸乳杆 菌（Lactobacillusacidophius);德氏乳杆菌保加利亚种（Lactobacillusdelbrueckii subsp.bulgaricus);干酪乳杆菌亚种（Lactobacilluscaseisubsp.Casei);嗜热链球 菌（Streptococcusthermophius);乳酸链球菌（Streptococcuslactis);乳酸乳球菌乳 酸亚种（Lactococcuslactissubsp.lactis);动物双歧杆菌乳亚种（Bifidobacterium animalissubsp.lactis);植物乳杆菌（Lactobacillusplantarum) 〇
[0016] 本发明的第六方面，所述的罗伊氏乳杆菌有较强的产蛋白酶能力。
[0017] 本发明的目的及解决其技术问题还采用以下技术方案来实现。依据本发明提出的 一种罗伊氏乳杆菌的应用，其中所述的罗伊氏乳杆菌LZ262用于动物饲料添加剂、抑菌液、 食品、保健品和水产养殖。
[0018] 前述的罗伊氏乳杆菌的应用，其中所述的罗伊氏乳杆菌LZ262用于动物饲料添加 剂时是将所述罗伊氏乳杆菌LZ262和其它益生菌组配，其中所述罗伊氏乳杆菌LZ262与其 它益生菌之间的比例为：罗伊氏乳杆菌LZ262:嗜酸乳酸杆菌：干酪乳杆菌：植物乳杆菌= (1 ~2) : (3 ~5) : (2 ~3) : (1 ~2)。
[0019] 前述的罗伊氏乳杆菌的应用，其中所述的罗伊氏乳杆菌LZ262用于动物饲料添加 剂进行育肥猪饲喂，结果是有效地促进育肥猪的的生长，降低仔猪的腹泻率，抑制有害菌群 和刺激肠道免疫反应方面发挥重要作用，降低猪的死亡率。
[0020] 借由上述技术方案，本发明至少具有下列优点：本发明从健康原料中分离得到，经 鉴定为罗伊氏乳杆菌；以上发明的得到的罗伊氏乳杆菌对人体和动物体肠胃环境有很好的 耐受性，并且可以产蛋白酶帮助消化，有较强的耐温性，与乳酸菌有较好的协同生长作用， 扩大了该菌的应用范围，发酵有较高的活菌量，减少了发酵成本。
[0021] 此外，所述罗伊氏乳杆菌对大肠杆菌有较好的抑制作用，通过改良发酵配方有较 高的发酵密度，喷雾干燥后有较高的存活率。
【附图说明】
[0022] 图1是本发明罗伊氏乳杆菌LZ262的光学显微镜图。
【具体实施方式】
[0023] 实例为：这种罗伊氏乳杆菌，它是罗伊氏乳杆菌（Lactobacillusreuteri)LZ262， 保藏号为CGMCCNo. 11240,保藏日期为2015年08月14日，保藏单位：中国微生物菌种保藏 管理委员会普通微生物中心。
[0024] 罗伊氏乳杆菌LZ262的分离及鉴定方法如下：
[0025] 1、分离方法
[0026] 称取样品（健康猪肠道）5g至45ml无菌缓冲盐溶液中（加适量玻璃珠）作为母 液，震荡l〇min充分混匀，以无菌缓冲盐溶液做梯度稀释，选择三到五个合适的梯度，吸取 0.lml于MRS培养基中进行涂布分离，每个稀释梯度做两个重复。培养皿放入37°C培养箱 中培养48~72小时后挑选光滑、凸园、边缘整齐、白色或乳白色菌落镜检。对疑似菌落按 上述步骤在MRS培养基中进行再此分离、纯化，直到菌落完全纯化。
[0027] 形态学鉴定：革兰氏染色，细胞形态，有无芽孢
[0028] 生理生化鉴定：接触酶，氧化酶，碳水化合物产酸
[0029] 分子生物学鉴定：16SrRNA序列分析
[0030] 2?实验结果
[0031] 2. 1生理生化特性及形态特征
[0032] 表1 LZ262的生理生化特性
[0033]
[0034] 2. 2 16S rRNA序列测定结果
[0035] ATACATGCAGTCGTACGCACTGGCCCAACTGATTGATGGTGCTTGCACCTGATTGACGATGGATCACCA GTGAGTGGCGGACGGGTGAGTAACACGTAGGTAACCTGCCCCGGAGCGGGGGATAACATTTGGAAACAGATGCTAAT ACCGCATAACAACAAAAGCCACATGGCTTTTGTTTGAAAGATGGCTTTGGCTATCACTCTGGGATGGACCTGCGGTG CATTAGCTAGTTGGTAAGGTAACGGCTTACCAAGGCGATGATGCATAGCCGAGTTGAGAGACTGATCGGCCACAATG GAACTGAGACACGGTCCATACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCACAATGGGCGCAAGCCTGATGGAGC AACACCGCGTGAGTGAAGAAGGGTTTCGGCTCGTAAAGCTCTGTTGTTGGAGAAGAACGTGCGTGAGAGTAACTGTT CACGCAGTGACGGTATCCAACCAGAAAGTCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGC GTTATCCGGATTTATTGGGCGTAAAGCGAGCGCAGGCGGTTGCTTAGGTCTGATGTGAAAGCCTTCGGCTTAACCGA AGAAGTGCATCGGAAACCGGGCGACTTGAGTGCAGAAGAGGACAGTGGAACTCCATGTGTAGCGGTGGAATGCGTAG ATATATGGAAGAACACCAGTGGCGAAGGCGGCTGTCTGGTCTGCAACTGACGCTGAGGCTCGAAAGCATGGGTAGCG AACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCATGCCGTAAACGATGAGTGCTAGGTGTTGGAGGGTTTCCGCCCTTCAGTGC CGGAGCTAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGGGAGTACGACCGCAAGGTTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCG CACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCTACGCGAAGAACCTTACCA