GGTCTTGACATCTTGCGCTAACCT TAGAGATAAGGCGTTCCCTTCGGGGACGCAATGACAGGTGGTGCATGGTCGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTG GGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGTTACTAGTTGCCAGCATTAAGTTGGGCACTCTAGTGAGACTGCCGGT GACAAACCGGAGGAAGGTGGGGACGACGTCAGATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGG ACGGTACAACGAGTCGCAAGCTCGCGAGAGTAAGCTAATCTCTTAAAGCCGTTCTCAGTTCGGACTGTAGGCTGCAA CTCGCCTACACGAAGTCGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACA CACCGCCCGTCACACCATGGGAGTTTGTAACGCCCAAAGTCGGT
[0036]根据上述16S rRNA序列测定结果（序列表），鉴定LZ262为罗伊氏乳杆菌。
[0037] 3?鉴定结果
[0038] 结合以上鉴定结果，本发明的LZ262为罗伊氏乳杆菌。
[0039] 罗伊氏乳杆菌LZ262培养基的优化及其培养方法
[0040] 1材料与方法
[0041] 1.1试验菌种
[0042] 罗伊氏乳杆菌LZ262,分离于健康猪肠道。
[0043] 1. 2材料与设备
[0044] 胰蛋白胨：北京奥博星生物技术有限责任公司生化试剂
[0045] 大豆蛋白胨：北京奥博星生物技术有限责任公司生化试剂
[0046] 酵母膏：北京奥博星生物技术有限责任公司生化试剂
[0047] 牛肉膏：北京奥博星生物技术有限责任公司生化试剂
[0048] 猪肝浸粉：北京奥博星生物技术有限责任公司生化试剂
[0049] 安琪蛋白胨FP101 :安琪酵母股份有限公司生化试剂
[0050] 安琪酵母浸粉FM902:安琪酵母股份有限公司生化试剂
[0051] 牛肉蛋白胨：北京双旋微生物培养基制品厂生化试剂
[0052] 酪蛋白胨：北京奥博星生物技术有限责任公司生化试剂
[0053] K2HP04:北京化工厂分析纯
[0054] KH2P04:北京化工厂分析纯
[0055] 乳糖：北京奥博星生物技术有限责任公司分析纯
[0056] 半乳糖：国药集团化学试剂有限公司生化试剂
[0057] 淀粉：天津市大茂化学试剂厂分析纯
[0058] 蔗糖：北京化工厂分析纯
[0059] 麦芽糖：北京奥博星生物技术有限责任公司生化试剂
[0060] 葡萄糖：福晨分析纯
[0061] 硫酸锰：广东汕头市西陇化工厂分析纯
[0062] 硫酸镁：国药集团化学试剂有限公司分析纯
[0063] 乙酸钠：西陇化工股份有限公司
[0064] 吐温80 :天津市福晨化学试剂厂
[0065] 柠檬酸二胺：西陇化工股份有限公司分析纯
[0066] 柠檬酸三胺：西陇化工股份有限公司分析纯
[0067] 752型分光光度计：上海光谱仪器有限公司
[0068] 立式压力蒸汽灭菌器：江阴滨江医疗设备有限公司LSB50L-I
[0069] 超净工作台：吴江市蓝林空气净化设备有限公司100级
[0070] 分析天平：赛多利斯科学仪器有限公司BSA124S-CW
[0071] 微生物发酵罐：上海广世生物工程设备有限公司GS-8000-10L
[0072] 台式高速冷冻离心机：湘智离心机仪器有限公司型号090613
[0073] 小型喷雾干燥仪：SY_6000
[0074]L 3培养基及培养条件
[0075] 活化和计数培养采用MRS培养基，蛋白胨10g、牛肉膏10g、酵母膏5g、KH2P042g、柠 檬酸二胺 2g、乙酸钠 2g、葡萄糖 20g、Tween80lmL、MgS04.7H20 0.58g、MnS04.4H20 0.25g， 用蒸馈水定容至1L,调pH6. 2~6. 4, 121°C灭菌15min。
[0076] 以MRS培养基为基础，按照试验设计添加不同生长因子，接种量2% -5%接入 150mL液体培养基中，37°C静置培养24h，测其生长曲线。
[0077]1. 4方法
[0078] 1. 4. 1不同碳源、氮源、磷源的选择
[0079] 在MRS液体培养基的基础上，分别添加2 % (w/v)乳糖、鹿糖、葡萄糖、果糖、半乳 糖、淀粉、麦芽糖作为不同碳源；分别加入2. 5% (w/v)胰蛋白胨、大豆蛋白胨、酵母膏、牛 肉膏、安琪蛋白胨FP101、安琪酵母浸粉FM902、猪肝浸粉、牛肝浸粉、牛肉蛋白胨作为的不 同氮源，其他组分均相同。在培养基中接入活化后的罗伊氏乳杆菌，在37°C的条件下培养 24h，稀释10倍后，在600nm波长下测定菌液0D值，以MRS培养基为对照，比较不同的碳 源、氮源对罗伊氏乳杆菌生长的影响。
[0080] 1.4. 2培养基的优化
[0081] 采用正交试验设计优化碳源、氮源的用量由于，因素水平如表1所示。其中A因 素为麦芽糖，B因素为安琪酵母粉FM902,C因素为安琪蛋白胨PF101，D因素为澳博星猪肝 浸粉，测定菌液0D值。
[0082] 表1正交试验因素水平
[0083]
[0084] 1. 4. 30D值测定
[0085] 用722型分光光度计，将菌液稀释10倍后，以相同条件下的未接菌的培养基做 参比，在600nm波长下测定菌液吸光度。
[0086] 1. 4. 4菌落计数
[0087] 以MRS固体培养基为计数培养基，采取适当的稀释倍数，倾注于平板上，37°C培 养48h后计数。
[0088] 2结果与分析
[0089] 2. 1碳源对罗伊氏乳杆菌生长的影响
[0090] 经过对比四种不同碳源乳糖、蔗糖、葡萄糖、麦芽糖、半乳糖、淀粉对罗伊氏乳杆菌 生长的影响，发现麦芽糖的效果较为显著。
[0091] 2. 2氮源对罗伊氏乳杆菌生长的影响
[0092] 以MRS培养基为对照，对比四种单一氮源胰蛋白胨、大豆蛋白胨、酵母膏，牛肉 膏、牛肉蛋白胨、猪肝浸粉、牛肝浸粉、酪蛋白胨，对罗伊氏乳杆菌的生长影响。由实验结果 可以看出，罗伊氏乳杆菌的生长在以猪肝浸粉为单一氮源时，0D值略高于对照，明显高于 罗伊氏乳杆菌在其它单一氮源中的生长；罗伊氏乳杆菌在以胰蛋白胨为氮源时生长效果较 差，单独添加时不利于罗伊氏乳杆菌的生长，不能很好的促进菌种生长。
[0093] 2. 3罗伊氏乳杆菌培养基的优化
[0094] 根据单因素试验的结果，设计正交试验，因素A、B、C、D分别为麦芽糖、安琪酵母 粉、安琪蛋白胨、猪肝浸粉，以吸光值（〇D600nm)为评价指标，测定结果和相应的极差分析 见表2。
[0095] 表2正交试验因素水平
[0096]
[0097] 由表2可以看出，影响因素大小排列为A>D>C>B，即麦芽糖〉猪肝浸粉〉安琪蛋白 胨〉安琪酵母粉；麦芽糖影响因素水平最高含量2. 5%时吸光值（0D600nm)最高，猪肝浸粉 的含量越多越好，综合考虑定在2 %较为适宜，安琪蛋白胨含量在0. 7-0. 8 %之间，安琪酵 母粉影响因素最低，定在〇. 3-0. 5%之间。
[0098] 3检验：检测活菌量
[0099]
[0100] 4 小结
[0101] 采用正交试验优化后罗伊氏乳杆菌LZ262培养基，活菌量检验为7. 6*109cfu/ml， 高于MRS的 9. 2*10scfu/ml。
[0102] 5罗伊氏乳杆菌LZ262培养方法
[0103] 5. 1试验菌种
[0104] 罗伊氏乳杆菌LZ262
[0105] 5. 2材料与设备
[0106] 同上
[0107] 5. 3培养基及培养条件
[0108] 活化和计数培养采用MRS培养基：蛋白胨10g、牛肉膏10g、酵母膏5g、KH2P042g、柠 檬酸二胺2g、乙酸钠2g、葡萄糖20g、Tween 80 lmL、MgS04.7H20 0? 58g、MnS04.4H20 0? 25g， 用蒸馈水定容至1L,调pH 6. 2~6. 4, 121°C灭菌15min。
[0109] 发酵培养基：猪肝浸粉20g、安琪蛋白胨PF1017g、安琪酵母浸粉PM9023g、 K2HP042g、柠檬酸钠2g、乙酸钠5g、麦芽糖25g、Tween 80 lmL、MgS04?7H20 0? 58g、 MnS04?4H20 0? 25g,用蒸馈水定容至1L,调pH 6. 5, 115°C灭菌20min。
[0110] 冻干保护剂配方：脱脂乳10% -20%、乳糖0.5% -1.5%、蔗糖5% -10%、谷氨酸 钠 0? 1% _1%〇
[0111] 喷雾保护剂配方：脱脂乳5%