2α-羟基雷公藤内酯酮的提取纯化方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于中医药研究技术领域，具体设及一种2a-径基雷公藤内醋酬的提取 纯化方法。
【背景技术】
[0002] 雷公藤（攻祐1T知扣iHook,f)系卫矛科雷公藤属植物，W全根或去 皮根木质部入药。雷公藤具有活血化疲、清热解毒、消肿散结、桂风除湿、杀虫止血的作用， 临床用于治疗类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、肾炎、强制性脊柱炎等，但其有大毒，且其 临床有效剂量与中毒剂量相近，运使雷公藤的全药应用至今未能得到广泛推广。
[0003] 为了充分发挥雷公藤的药用功效，国内外学者已从雷公藤属植物中分离出几十种 化学成分，主要有二祗、=祗、倍半祗、生物碱、巧类、糖类和醇类等。其中，雷公藤内醋酬 (Triptonide)，又叫雷公藤幾内醋、雷公藤酬，是从雷公藤中分离得到的二祗类化合物，其 具有抗炎、免疫抑制、抗新生血管等多种功效，是雷公藤药物活性成分的一个重要的研究方 向。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于提供一种2a-径基雷公藤内醋酬的提取纯化方法，其所得 2a-径基雷公藤内醋酬的纯度高，可为雷公藤内醋酬的化学结构、药理作用等研究提供物 质基础。
[0005] 为实现上述目的，本发明采用如下技术方案： 一种2a-径基雷公藤内醋酬的提取纯化方法，其包括W下步骤： 1) 将雷公藤粉碎，过20目筛，加其重量5倍体积的乙醇浸泡24h后进行渗漉，然后将渗 漉液合并、浓缩，得乙醇浓缩液； 2) 按体积比1:1. 5将所得乙醇浓缩液加乙酸乙醋萃取3-6次，然后将萃取得到的乙酸 乙醋溶液合并、浓缩，经微波干燥制得干粉； 3) 将所得干粉加等体积乙酸乙醋溶解后，采用硅胶柱层析进行分离，将乙酸乙醋与石 油酸按体积比2:3混合作为洗脱剂进行洗脱，每500mL洗脱液收集一份，经浓缩后采用化C 对浓缩液进行定性检测，合并含有相同成分的浓缩液，回收溶剂后微波干燥，得粗提干粉； 4) 将所得粗提干粉加等体积=氯甲烧溶解后，采用硅胶柱层析进行分离，将=氯甲烧 与甲醇混合作为洗脱剂进行梯度洗脱，每200mL洗脱液收集一份，经浓缩后采用TLC对浓缩 液进行定性检测，合并含有相同成分的浓缩液，回收溶剂至干，得精提物； 5) 将所得精提物加二氯甲烧溶解后，在二氯甲烧和乙酸的混合液中重结晶3-5次，得 无色针状结晶，即为所述2a-径基雷公藤内醋酬。
[0006] 步骤1)所述雷公藤为雷公藤植株的根屯、、根皮、茎和叶。
[0007] 步骤1)中用雷公藤重量30-35倍体积的乙醇进行渗漉，渗漉液每500mL收集一 次，浓缩至干，加1血S氯甲烧溶解后采用TLC对其进行定性检测，直至检测为阴性时停止 渗漉。
[0008] 步骤2)每次萃取的过程中需振摇20次，每次萃取后将收集的乙酸乙醋溶液浓缩， 采用TLC对其进行定性检测，直至检测为阴性时停止萃取。
[0009] 步骤2)所述微波干燥的功率为500W，频率为2450MHz，溫度为40°C，干燥时间为 30min〇
[0010] 步骤3)中干粉与硅胶柱层析所用硅胶的重量比为1:80 ;采用湿法上柱。 1] 步骤3)所述微波干燥的功率为500W，频率为2450MHz，溫度为40°C，干燥时间为 lOmin。
[0012] 步骤4)中粗提干粉与硅胶柱层析所用硅胶的重量比为1:120 ;采用湿法上柱。
[0013]步骤4)梯度洗脱中S氯甲烧与甲醇的混合比例依次为100:0、99:1、98:2、97:3、 96:4。
[0014] 所得2a-径基雷公藤内醋酬的结构式为：
mp 233~235°C，HR-MS[M+田+:375. 145,[a]:+165(C0.05，CHCl2)。与Kedde试剂显 紫红色反应，UV:218nm，IR A (cmi):3560,3010,2980，1780，1750，1720，1435，1390,939， 908dMS?/&374,358，：M3,330,315,301，296,255，175，105,55d1H-NMR(CDC13)5:0.93 (d，方7Hz，17-CH3)，1. 16 (d，方7Hz，16-CH3)，1. 19 (s，20-CH3)，1.22，1.95(m，l-H)，2. 39 (Se5pt，^7Hz，15-H)，2.08,2.69 (dd，^5，15Hz，6-H)，2.88(br，5-H)，3.18(s，2-OH)，3.49 (d，方甜z，7-H)，3. 88 (d，方3Hz，12-H)，4. 16 (d，方3Hz，ll-H)，4. 58 (t，方13. 6Hz，2-H)， 5. 03 (d，19-2H)。"c-NMR(CDCl3)5 :38. 3 (1-C)，61.4 (2-C)，127. 9 (3-C)，163. 03 (4-C)， 40. 9 (5-C)，23. 5 (6-C)，59. 89 (7-C)，60. 8 (8-C)，65. 8 (9-C)，36. 0 (10-C)，56. 3 (11-C)， 58.89 (12-0,66.3 (13-0,197.03 (14-0 , 29.23 (15-0,18.30 (16-0,17.3 (17-C), 173.3 (18-0,69.5 (19-0,16.09 (2〇-〇〇
[0015] 本发明的显著优点在于：按本发明提取纯化方法制得的2a-径基雷公藤内醋酬 纯度可达99%，得率为万分之一，比现有文献报道的提取工艺提高近100倍，可为阐明雷公 藤中的化学成分、药理作用等研究提供科学的依据和物质基础，也可为临床应用雷公藤提 供科学的依据。
【具体实施方式】
[0016] 为了使本发明所述的内容更加便于理解，下面结合【具体实施方式】对本发明所述的 技术方案做进一步的说明，但是本发明不仅限于此。
[0017] 实施例1 一种2a-径基雷公藤内醋酬的提取纯化方法，其包括W下步骤： 1) 将雷公藤植株的根屯、、根皮、茎和叶10kg粉碎，过20目筛，加其重量5倍体积的乙 醇浸泡24h后，用雷公藤重量30倍体积的乙醇进行渗漉，渗漉液每500mL收集一次，浓缩至 干，加ImLS氯甲烧溶解后采用TLC对其进行定性检测，然后将渗漉液合并、浓缩，得乙醇浓 缩液； 2) 按体积比1:1. 5将所得乙醇浓缩液加乙酸乙醋进行萃取，每次萃取的过程中需振摇 20次，每次萃取后将收集的乙酸乙醋溶液浓缩，采用TLC对其进行定性检测，萃取3次后将 萃取得到的乙酸乙醋溶液合并、浓缩，经微波干燥制得干粉，微波干燥的功率为500W，频率 为2450MHz，溫度为40°C，干燥时间为30min; 3) 将所得干粉加等体积乙酸乙醋溶解后，按干粉与硅胶的重量比为1:80称取硅胶， 经湿法上柱后采用硅胶柱层析进行分离，将乙酸乙醋与石油酸按体积比2:3混合作为洗脱 剂进行洗脱，每500mL洗脱液收集一份，经浓缩后采用TLC对浓缩液进行定性检测，合并含 有相同成分的浓缩液，回收溶剂后微波干燥得粗提干粉，其微波干燥的功率为500W，频率为 2450MHz，溫度为40°C，干燥时间为lOmin; 4) 将所得粗提干粉加等体积=氯甲烧溶解后，按干粉与硅胶的重量比为1:120称取娃 胶，经湿法上柱后采用硅胶柱层析进行分离，按=氯甲烧与甲醇的混合比例为1〇〇:〇、99:1、 98:2、97:3、96:4配制洗脱剂进行梯度洗脱，每200mL洗脱液收集一份，经浓缩后采用化C对 浓缩液进行定性检测，合并含有相同成分的浓缩液，回收溶剂至干，得精提物； 5) 将从=氯甲烧与甲醇混合比例为97:3的部分得到的精提物加二氯甲烧溶解，在二 氯甲烧和乙酸的混合液中重结晶3次，得无色针状结晶0.98g，即为所述2a-径基雷公藤内 醋酬，纯度为99. 3%。 阳〇1引实施例2 一种2a-径基