一种四环二萜类化合物及其制备方法与应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于植物有效成分提取技术领域，具体设及一种四环二祗类化合物及其制 备方法与应用。
【背景技术】
[0002] 目前全球癌症发病形势严峻，发病率与死亡率呈持续上升趋势，已经成为严重危 害人类健康、导致现代人类死亡的第一大恶疾和顽症。世界卫生组织于2014年2月发布报 告，预测全球癌症病例将逐年呈现迅猛增长态势，由2012年的1400万人，逐年递增至2025 年的1900万人，到2035年将达到2400万人。该组织统计数据还显示，中国每年新增癌症 病例约350万，约有250万人因此死亡。因此寻找有效的抗癌药物已成为当务之急。在抗 癌药物研究中，化疗药物的研究和临床应用已取得很大进展。化学合成的抗癌药物如金属 配合物销络合物、有机错化合物等，虽然具有强抗癌性，但存在毒副作用，水溶性差等缺陷。 近年来，中外研究人员逐渐将目光投向资源丰富、纯天然的中草药、民族药，希望从中寻找 新的抗癌药物。目前从中草药、民族药中发现了紫杉醇、喜树碱、=尖杉醋碱类、长春新碱、 鬼白毒素、揽香締乳等一系列天然抗癌药物，并且每年都有多只新品上市。运些天然药物均 表现了良好的抗癌活性并在临床上得到了广泛的应用，也日益证明从天然产物中筛选抗肿 瘤药物是一个很有前景的方向。
[0003] 黑果上当归沁曲e妃r歴Hand. -Mazz)系五加科（Araliaceae)惚木属 植物，在云南称"牛角屯"，"白九股牛"，"蜜油参"。民间W根入药，入脾、胃二经。中草药， 2001,32(9) :847-850报道，该植物有补中益气、托毒外出、消炎的功效，用于淋己腺炎、慢性 化脈性骨髓炎和巧痴等症。该属植物化学成分主要含二祗、=祗皂巧、香豆素、黄酬、木脂素 及酱醇。该属植物中的二祗类化合物有抗肿瘤、抗炎等活性。本发明试图对黑果±当归中 二祗类化合物的抗肿瘤作用做进一步深入研究，W期发现其中的细胞毒活性天然产物，为 筛选高效、低毒的抗肿瘤药物提供依据。
【发明内容】
[0004] 本发明的第一目的是提供一种四环二祗类化合物；第二目的在于提供所述四环二 祗类化合物的制备方法；第=目的在于提供所述四环二祗类化合物的应用。 阳〇化]本发明的第一目的是运样实现的，所述的四环二祗类化合物是W黑果±当归根为 原料，经浸膏提取、有机溶剂萃取、硅胶柱层析、高压液相色谱分离得到的，该化合物分子式 为〔2化。〇3,命名为dumetorumaneB，具有下述结构式：
o
[0006] 本发明的第二目的是运样实现的，是W黑果上当归根为原料，经浸膏提取、有机溶 剂萃取、硅胶柱层析、高压液相色谱分离获得，具体为： A、 浸膏提取：将黑果±当归根惊干粉碎得到0. 05~0. 15cm粒径大小的颗粒，加入黑果 ±当归根重量比4~8倍的体积百分浓度80~95%乙醇溶液于65~74°C下回流提取3~5次，每 次1~化，合并提取液，提取液过滤，减压浓缩提取液至比重为1. 1~1. 3得到浸膏a; B、 有机溶剂萃取：浸膏a中加入重量比2~4倍量的水，依次用与水等体积的石油酸、乙 酸乙醋和正下醇溶剂进行萃取，每种溶剂萃取4~6次，蒸去溶剂分别得到石油酸萃取物b、 乙酸乙醋萃取物C和正下醇萃取物d; C、 硅胶柱层析： 1) 将乙酸乙醋萃取物C上硅胶柱，装柱硅胶为100~200目，用量为萃取物C重量6~8倍 量；用体积比为30:1~0:1的氯仿-甲醇有机溶剂梯度洗脱，收集梯度洗脱液、浓缩，经化C 监测，合并相同的部分； 2) 将1)中W15:1配比的氯仿-甲醇有机溶剂进行洗脱得到的洗脱液e上硅胶柱，装 柱硅胶为200~300目，用量为洗脱液e体积6~8倍量；用体积比25:1~5:1的氯仿甲醇有机 溶剂梯度洗脱，收集梯度洗脱液、浓缩，经TLC检测，合并相同的部分； D、 高效液相色谱分离：将C步骤2)中W20:1配比的氯仿-甲醇有机溶剂进行洗 脱得到的洗脱液采用半制备高效液相色谱仪分离纯化，即得所述的四环二祗类化合物 dumetorum曰neB〇
[0007] 本发明四环二祗类化合物是首次被分离出来的，通过核磁共振和其他波谱技术测 定方法确定为四环二祗类化合物，并表征其具体结构为：
化合物dumetorumaneB，为白色无定型粉末（溶剂为氯仿），
0. 45，CHCI3);IR化Br)谱在3345，2969，1711，1652，1123，1067cm1 有吸收，表明分 子中存在簇基、径基和双键。HRESI-MS(附图1)显示其准分子离子峰m/z317. 2131 [M-田 (calcd. 317. 2116)，结合NMR谱确定其分子式为〔2。&。03，不饱和度为6。电醒3(附图2，数 据归属见表1)显示分子中有3个甲基单峰，分别为5H1.25 (3H，S)，1.18 (3H，S)及 0. 81 (3H,S))，有 1 个连氧亚甲基峰（5h3. 72 (lH，dd,J= 11.2，7. 2Hz) ;3. 60 (1H, dd，J= 11.2，8.0Hz));"CNMR(附图3及附图4,数据归属见表1)显示分子中有20个 碳，其中有6个季碳，3个次甲基，8个亚甲基，及3个甲基。结合服QC相关谱（附图5)，并 对比文献数据可证实，该化合物与已知化合物acasianeA结构相似，为含有1个=元小 环的二祗类化合物，区别在于分子中多了 1个幾基（5C182. 7)和1个双键（5t127.8及 135. 5)，少了 1个连氧亚甲基（5c63.8)和2个次甲基（5c56. 3及37. 1);进一步经HMBC 相关（附图6)证实C-18 (幾基）与C-4位相连，C-8及C-9位为一双键。进一步经HMBC 相关（附图6)、C0SY相关（附图7)和R犯SY(附图8)及与文献化inA.S.，LinC.R.， DuY.C. ,LlibkenT. ,ChiangM.Y. ,ChenI.H. ,WuC.C. ,HwangT.L. ,ChenS. L.，YenM.H.，ChangF.民.，WuY.C.AcasianeAandBandfarnesiraneAandB, diterpenederivativesfromtherootsofAcacia farnesiana.PlantaMed2009， 75: 256-261.)对比证实，使化合物的结构最终得到确认，化合物具有下述结构式：
通过SCIFINDm?数据库检索和文献查询证实该化合物为新化合物。 阳00引表1本发明化合物的电-和"C-NMR仰化）数据
本发明的第=目的是运样实现的，所述的四环二祗类化合物在制备预防和/或治疗肿 瘤药物中的应用。
[0009] 所述的四环二祗类化合物在制备预防和/或治疗人肺腺癌、人急性早幼粒白血病 或人乳腺癌药物中的应用。
[0010] 本发明所述的四环二祗类化合物进行了细胞毒活性测试，实验结果显示出良好的 抑制人肺腺癌、人急性早幼粒白血病及人乳腺癌细胞株活性，可为医用工业提供有应用价 值的新化合物或先导化合物。 阳011] 本发明的优点： 1、本发明中的四环二祗类化合物对人肺腺癌、人急性早幼粒白血病或人乳腺癌细胞株 有显著的抑制作用，提示其具有良好的抗癌活性，可W作为抗癌活性成分或先导化合物。
[0012] 2、本发明中的四环二祗类化合物可为天然存在的有机化合物，原料来源广泛，并 且化合物制备操作流程简单，所获得的化合物纯度高，随后的工业化生产易实现。
【附图说明】
[0013] 图1是本发明化合物高分辨质谱（HRESI-M巧； 图2是本发明化合物的核磁共振氨谱（电NMR); 图3是本发明化合物的核磁共振碳谱（"CNMR); 图4为本发明化合物的DEPT谱； 图5是本发明化合物的HSQC相关谱； 图6是本发明化合物的HMBC相关谱； 图7是本发明化合物的COSY相关谱； 图8是本发明化合物的R0ESY相关谱。