一种四环二萜类化合物及其制备方法与应用_2

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【具体实施方式】
[0014] 下面结合实施例和附图对本发明作进一步的说明,但不W任何方式对本发明加W 限制,基于本发明教导所作的任何变换或改进,均落入本发明的保护范围。
[0015] 本发明所述的四环二祗类化合物,是W黑果上当归根为原料,经浸膏提取、有 机溶剂萃取、硅胶柱层析、高压液相色谱分离得到的,该化合物分子式为〔2品。〇3,命名为 dumetorumaneB,具有下述结构式:
[0016] 本发明所述的四环二祗类化合物的制备方法,是W黑果上当归根为原料,经浸膏 提取、有机溶剂萃取、硅胶柱层析、高压液相色谱分离获得,具体为: A、 浸膏提取:将黑果±当归根惊干粉碎得到0. 05~0. 15cm粒径大小的颗粒,加入黑果 ±当归根重量比4~8倍的体积百分浓度80~95%乙醇溶液于65~74°C下回流提取3~5次,每 次1~化,合并提取液,提取液过滤,减压浓缩提取液至比重为1. 1~1. 3得到浸膏a; B、 有机溶剂萃取:浸膏a中加入重量比2~4倍量的水,依次用与水等体积的石油酸、乙 酸乙醋和正下醇溶剂进行萃取,每种溶剂萃取4~6次,蒸去溶剂分别得到石油酸萃取物b、 乙酸乙醋萃取物C和正下醇萃取物d; C、 硅胶柱层析: 1) 将乙酸乙醋萃取物C上硅胶柱,装柱硅胶为100~200目,用量为萃取物C重量6~8倍 量;用体积比为30:1~0:1的氯仿-甲醇有机溶剂梯度洗脱,收集梯度洗脱液、浓缩,经化C 监测,合并相同的部分; 2) 将1)中W15:1配比的氯仿-甲醇有机溶剂进行洗脱得到的洗脱液e上硅胶柱,装 柱硅胶为200~300目,用量为洗脱液e体积6~8倍量;用体积比25:1~5:1的氯仿甲醇有机 溶剂梯度洗脱,收集梯度洗脱液、浓缩,经TLC检测,合并相同的部分; D、 高效液相色谱分离:将C步骤2)中W20:1配比的氯仿-甲醇有机溶剂进行洗 脱得到的洗脱液采用半制备高效液相色谱仪分离纯化,即得所述的四环二祗类化合物 dumetorumaneB〇
[0017]A步骤所述的过滤是经80~120ym的滤纸进行过滤。
[0018] A步骤所述的减压浓缩是在50°CW下的溫度条件下用旋转蒸发仪进行减压浓缩。
[0019] B步骤中所述的蒸去溶剂是采用旋转蒸发仪蒸去溶剂。
[0020] C步骤1)中所述的氯仿-甲醇有机溶剂的体积配比为30:1、25:1、20:1、15:1、 10:1、5:1、2:1和 0:1。
[0021] C步骤2)中所述的氯仿-甲醇有机溶剂的体积配比为25:1、20:1、15:1、10:1、8:1 和 5:1。
[0022] D步骤所述的采用半制备高效液相色谱仪分离纯化,具体为将C步骤2)中W20:1 配比的氯仿-甲醇有机溶剂进行洗脱得到的洗脱液经半制备高效液相色谱仪分离纯化,W 体积配比为60:40的乙腊-水为流动相,流速2. 5ml/min,250X10mm,5化的C18为固 定相,紫外检测器检测波长为210nm,每次进样50化,收集35 ~37min的色谱峰,多次累加 后蒸干,得到所述的四环二祗类化合物dumetorumaneB; 本发明的应用为所述的四环二祗类化合物在制备预防和/或治疗肿瘤药物中的应用。
[0023] 本发明的应用为所述的四环二祗类化合物在制备预防和/或治疗人肺腺癌、人急 性早幼粒白血病或人乳腺癌药物中的应用。
[0024] 下面W具体实施例对本发明做进一步说明: 实施例1 化合物的制备 材料来源:黑果±当归采于云南昆明,经云南民族大学民族医药学院杨青松副教授鉴 定为沁wetoru?Hand. -Mazz,标本保存于云南民族大学民族医药学院标本馆。
[00对采用W下步骤: a. 粉碎:将lOKg黑果±当归根惊干粉碎成粒径0. 1cm大小的颗粒,得黑果±当归粉, 备用; b. 回流提取:将步骤a中制得的黑果±当归粉在65°C的溫度下回流提取4次,每次2 小时,每次用60Kg80%浓度的乙醇提取,合并乙醇提取液,备用; C、浓缩:将步骤b制得的乙醇提取液经80-120微米滤纸过滤并在50°C的溫度下用旋 转蒸发仪进行减压浓缩,至比重为1. 2时,得浸膏1380g,备用; t萃取:将1380g浸膏混悬于4500ml水中,依次用4500ml石油酸、4500ml乙酸乙醋W及4500ml正下醇进行萃取,每种溶剂萃取5次,再用旋转蒸发仪蒸去溶剂,分别得石油酸、 乙酸乙醋W及正下醇萃取物390g、112g、405g。
[0026] e.分离:将步骤d中制得的乙酸乙醋萃取物经100-200目硅胶柱色谱,用体积比 30:1、25:1、20:1、15:1、10:1、5:1、2:1、0:1的氯仿-甲醇梯度洗脱得到化.1-Fr. 8共8个组 分,化.1 为 8. 8g,化.2 为 8.Ig,化.3 为 3. 2g,化.4 为 15. 7g,化.5 为 34. 3g,化.6 为 6. 2邑, 化.7为5.Ig,化.8为21. 5g,化.4经200-300目硅胶柱层析,W体积比25:1、20:1、15:1、 10:1、8:1、5:1的氯仿:甲醇梯度洗脱,得到组分化.4A-Fr. 4F共6个组分,化.4A为l.Og, 化.4B为 1. 9g,化.4C为 0. 6g,化.4D为 3. 6g,化.4E为 1. 5g,化.4F为 3.Ig。化.4B经半制 备高效液相色谱仪,W乙腊-水(体积比60:40)作为流动相,流速2. 5ml/min,250X10mm, 5化的C18为固定相,紫外检测器检测波长为210皿,每次进样50化,收集35~37min的色 谱峰,多次累加后蒸干,制备得到白色无定型粉末式目标化合物dumetorumaneB(12mg)。
[0027] 实施例2化合物的制备 采用W下步骤: a. 粉碎:将lOKg黑果±当归根惊干粉碎成粒径0. 1cm大小的颗粒,得黑果±当归粉, 备用; b. 回流提取:将步骤a中制得的黑果±当归粉在67°C的溫度下回流提取3次,每次2. 5 小时,每次用60Kg84%浓度的乙醇提取,合并乙醇提取液,备用; C、浓缩:将步骤b制得的乙醇提取液经80-120微米滤纸过滤并在50°C的溫度下用旋 转蒸发仪进行减压浓缩,至比重为1. 2时,得浸膏1340g,备用; d、萃取:将1340g浸膏混悬于4000ml水中,依次用4000ml石油酸、4000ml乙酸乙醋W及4000ml正下醇进行萃取,每种溶剂萃取4次,再用旋转蒸发仪蒸去溶剂,分别得石油酸、 乙酸乙醋化及正下醇萃取物372g、103g、396g。
[0028]e.分离:将步骤d中制得的乙酸乙醋萃取物经100-200目硅胶柱色谱,用体积 比 30:1、25:1、20:1、15:1、10:1、5:1、2:1、0:1 的氯仿-甲醇梯度洗脱得到化.1-Fr. 8 共 8 个组分,化.1为7. 6g,化.2为6. 8g,化.3为3.Og,化.4为14. 5g,化.5为32. 4g,化.6为 5. 3g,化.7为4. 8g,化.8为18. 7g,化.4经200-300目硅胶柱层析,W体积比25:1、20:1、 15:1、10:1、8:1、5:1的氯仿:甲醇梯度洗脱,得到组分化.4A-Fr. 4F共6个组分,化.4A为 0. 9g,化.4B为 1. 7g,化.4C为 0. 5g,化.4D为 3. 4g,化.4E为 1. 4g,化.4F为 3.Og。化.4B 经半制备高效液相色谱仪,W乙腊-水(体积比60:40)作为流动相,流速2. 5ml/min,250 X10mm,5帕的C18为固定相,紫外检测器检测波长为210nm,每次进样50化,收集35 ~37min的色谱峰,多次累加后蒸干,制备得到白色无定型粉末式目标化合物dumetorumane B(14mg)。
[0029] 实施例3 化合物的制备 采用W下步骤: a. 粉碎:将lOKg黑果±当归根惊干粉碎成粒径0. 1cm大小的颗粒,得黑果±当归粉
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