.AcasianeA 曰ndB曰ndf曰rnesir曰neA曰ndB,diterpenederiv曰tivesfromtherootsofAcacia /kraesiana.PlantaMed2009, 75: 256-261.)对比证实，使化合物的结构最终得到确 认，命名为dumetorum曰neB〇
[0037] 实施例7 取实施例2制备的化合物，为黄色胶状物；按实施例6中的方法进行结构测定，结果为： 其结构同实施例6,分子式为〔2。&。〇3。确认实施例2制备的化合物为所述的四环二祗类化 合物dumetorumaneB。 阳0測实施例8 取实施例3制备的化合物，为黄色胶状物；按实施例6中的方法进行结构测定，结果为： 其结构同实施例6,分子式为〔2。&。〇3。确认实施例3制备的化合物为所述的四环二祗类化 合物dumetorumaneB。
[0039] 实施例9 取实施例4制备的化合物，为黄色胶状物；按实施例6中的方法进行结构测定，结果为： 其结构同实施例6,分子式为〔2。&。〇3。确认实施例4制备的化合物为所述的四环二祗类化 合物dumetorumaneB。
[0040] 实施例10 取实施例5制备的化合物，为黄色胶状物；按实施例6中的方法进行结构测定，结果为： 其结构同实施例6,分子式为〔2。&。〇3。确认实施例5制备的化合物为所述的四环二祗类化 合物dumetorumaneB。
[0041] 实施例11 本发明化合物抗肿瘤活性检测 取实施例1~5所制备的任一四环二祗类化合物进行抗肿瘤活性检测试验，试验情况如 下： 采用改良M1T法评价四环二祗类化合物对肿瘤细胞的增值抑制作用； 取备用的肿瘤细胞悬液接种于96孔培养板，90化/孔，继续培养24h后加入不同浓 度的受试样品，10化/孔，使其终浓度为1〇〇、1〇、1、〇. 1、〇.〇1嗦/mU每个浓度均设3个复 孔。顺销（DDP)为阳性对照，等体积RPMI1640培养基为阴性对照。同时设化合物100、10 嗦/mL时相应的DMSO浓度为溶媒对照，W消除DMSO对细胞生长的影响。加药后继续置于37 °C，5%C〇2培养箱培养72h，每孔加入MTT(5mg/mL)20化，继续培养4h，每孔加入S联 液[10%SDS-5%异下醇一0. 012mol/L肥1 (W/V/V)] 100化溶解甲臘。用酶标仪在570 nm波长下测定各孔的0D值。
[0042] 按下列公式计算细胞增值抑制率： 抑制率（％) = (0D值对照孔一0D值给药孔）/0D值对照孔X100% 数据统计分析：采用Microsoft Excel 2003计算抑制率，采用logit法，SPSS11. 5软件包计算半数抑制浓度ICe。。
[0043] 计算半数抑制浓度ICw，对人肺腺癌细胞株（A549)、人急性早幼粒白血病细胞株 (NB4)及人乳腺癌细胞株（MCF7)的半数抑制浓度（ICJ测定结果分别为6. 7 ± 0. 5剛， 4. 2 ± 0.3剛，5.3 ± 0.6剛，表明本发明的化合物具有较好的抗肿瘤活性。
[0044] W上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用W限制本发明，凡在本发明的精 神和原则之内所作的任何修改等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1. 一种四环二祗类化合物，其特征在于所述的四环二祗类化合物是W黑果±当归根为 原料，经浸膏提取、有机溶剂萃取、硅胶柱层析、高压液相色谱分离得到的，该化合物分子式 为〔2化。〇3,命名为dumetorumaneB，具有下述结构式：2. -种权利要求1所述的四环二祗类化合物的制备方法，其特征在于是W黑果±当归 根为原料，经浸膏提取、有机溶剂萃取、硅胶柱层析、高压液相色谱分离获得，具体为： A、 浸膏提取：将黑果±当归根惊干粉碎得到0. 05~0. 15cm粒径大小的颗粒，加入黑果 ±当归根重量比4~8倍的体积百分浓度80~95%乙醇溶液于65~74°C下回流提取3~5次，每 次1~化，合并提取液，提取液过滤，减压浓缩提取液至比重为1. 1~1. 3得到浸膏a; B、 有机溶剂萃取：浸膏a中加入重量比2~4倍量的水，依次用与水等体积的石油酸、乙 酸乙醋和正下醇溶剂进行萃取，每种溶剂萃取4~6次，蒸去溶剂分别得到石油酸萃取物b、 乙酸乙醋萃取物C和正下醇萃取物d; C、 硅胶柱层析： 1) 将乙酸乙醋萃取物C上硅胶柱，装柱硅胶为100~200目，用量为萃取物C重量6~8倍 量；用体积比为30:1~0:1的氯仿-甲醇有机溶剂梯度洗脱，收集梯度洗脱液、浓缩，经化C 监测，合并相同的部分； 2) 将1)中W15:1配比的氯仿-甲醇有机溶剂进行洗脱得到的洗脱液e上硅胶柱，装 柱硅胶为200~300目，用量为洗脱液e体积6~8倍量；用体积比25:1~5:1的氯仿甲醇有机 溶剂梯度洗脱，收集梯度洗脱液、浓缩，经TLC检测，合并相同的部分； D、 高效液相色谱分离：将C步骤2)中W20:1配比的氯仿-甲醇有机溶剂进行洗 脱得到的洗脱液采用半制备高效液相色谱仪分离纯化，即得所述的四环二祗类化合物 dumetorum曰neB〇3. 根据权利要求2所述的四环二祗类化合物的制备方法，其特征在于A步骤所述的过 滤是经80~120Jim的滤纸进行过滤。4. 根据权利要求2所述的四环二祗类化合物的制备方法，其特征在于A步骤所述的减 压浓缩是在5(TCW下的溫度条件下用旋转蒸发仪进行减压浓缩。5. 根据权利要求2所述的四环二祗类化合物的制备方法，其特征在于B步骤中所述的 蒸去溶剂是采用旋转蒸发仪蒸去溶剂。6. 根据权利要求2所述的四环二祗类化合物的制备方法，其特征在于C步骤1)中所述 的氯仿-甲醇有机溶剂的体积配比为30:1、25:1、20:1、15:1、10:1、5:1、2:1和0:1。7. 根据权利要求2所述的四环二祗类化合物的制备方法，其特征在于C步骤2)中所述 的氯仿-甲醇有机溶剂的体积配比为25:1、20:1、15:1、10:1、8:1和5:1。8. 根据权利要求2所述的四环二祗类化合物的制备方法，其特征在于D步骤中所述的 采用半制备高效液相色谱仪分离纯化，是W体积配比为60:40的乙腊-水为流动相，流速 2. 5ml/min，250X10mm，5Jim的C18为固定相，紫外检测器检测波长为210nm，每 次进样50y以收集35 ~37min的色谱峰，多次累加后蒸干，得到所述的四环二祗类化合物 dumetorum过打eBd9. 一种权利要求1所述的四环二祗类化合物在制备预防和/或治疗肿瘤药物中的应 用。10. -种权利要求1所述的四环二祗类化合物在制备预防和/或治疗人肺腺癌、人急性 早幼粒白血病或人乳腺癌药物中的应用。
【专利摘要】本发明公开了一种四环二萜类化合物及其制备方法与应用，所述的四环二萜类化合物是以黑果土当归根为原料，经浸膏提取、有机溶剂萃取、硅胶柱层析、高压液相色谱分离得到的，该化合物分子式为C20H30O3，命名为dumetorumane？B，具有下述结构式：？。制备方法是以黑果土当归根为原料，经浸膏提取、有机溶剂萃取、硅胶柱层析、高压液相色谱分离获得。应用为四环二萜类化合物在制备预防和/或治疗肿瘤药物中的应用和在制备预防和/或治疗人肺腺癌、人急性早幼粒白血病或人乳腺癌药物中的应用。所述的四环二萜类化合物对人肺腺癌、人急性早幼粒白血病或人乳腺癌细胞株有显著的抑制作用，提示其具有良好的抗癌活性，可以作为抗癌活性成分或先导化合物。
【IPC分类】C07J61/00, A61P35/00, A61P35/02
【公开号】CN105198951
【申请号】CN201510687727
【发明人】田凯, 黄相中, 江志勇, 孙静贤, 夏福婷, 李艳红, 王韦
【申请人】云南民族大学
【公开日】2015年12月30日
【申请日】2015年10月22日