一种脱除卵丘细胞装置的制造方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种脱除卵丘细胞装置。
【背景技术】
[0002]卵母细胞俗称卵子，卵母细胞在早期发育过程中被卵丘细胞包裹，形成卵丘卵母细胞复合物，待卵母细胞发育成熟后，卵母细胞周围的卵丘细胞完成了其生理功能。在生殖发育等诸多研究中为了深入研究卵母细胞的发生发育机制，需要脱除卵母细胞周围的卵丘细胞。目前，脱除卵母细胞周围的卵丘细胞主要是通过在操作液中添加透明质酸酶，透明质酸酶作为商品化生物试剂，其生物活性不稳定，对贮存条件要求较高，消化卵丘细胞时易对卵母细胞造成伤害，并且，添加透明质酸酶后也需要机械人工吹打，如果吹打力度不够可能会导致不能轻易脱掉卵丘细胞，力度过大又会造成卵母细胞伤害或死亡；采取人工机械吹打脱除卵丘细胞，目前由于缺乏专业的操作装置，操作起来比较耗时且效率较低，操作时间过长时卵母细胞在外界操作环境时间就越长，容易造成卵母细胞大量死亡或者影响卵母细胞后期发育。针对这一问题，本发明设计一个新的脱除卵丘细胞装置来解决这一难题。
【发明内容】
[0003]本发明要解决的技术问题是提供一种脱除卵丘细胞装置。
[0004]本发明要解决的另外一个技术问题是提供一种脱除卵丘细胞方法。
[0005]对于脱除卵丘细胞装置，本发明采用的技术方案是，一种脱除卵丘细胞装置，包括漏孔皿、吹打针、气囊；
[0006]漏孔皿为圆形，皿底均布脱除卵丘细胞用的漏孔，漏孔直径为90 μ m?150 μ m，漏孔内设有内螺纹；
[0007]吹打针设有手柄，吹打针的针尖圆滑，吹打针通过气管与气囊连接。
[0008]作为优选，漏孔直径分别为150 μ m、120 μπκ90 μ m，3种不同直径的漏孔从圆形皿底的圆心沿半径按直径从大到小由内向外均匀分布。
[0009]作为优选，漏孔皿的皿底设有用于连接培养皿的圆形凹坑。
[0010]作为优选，漏孔皿的直径为66mm，皿底的圆形凹坑直径为60mm，用于连接60mm培养皿。
[0011]作为优选，吹打针的针尖直径设定为120 μπι?160 μm。
[0012]作为优选，气囊为脚踩压缩产气式。
[0013]作为优选，气管包括外层和内层，外层为保护层，内层为送气管，气管的长度为L 5 ?2m ο
[0014]作为优选，还包括用塑料制成的洗刷工具；洗刷工具上部为把手，下部为活塞，把手与活塞中间连接；活塞直径与漏孔皿的内径相适配，活塞边缘设有多层凹槽。
[0015]作为优选，漏孔皿为玻璃制成。
[0016]对于脱除卵母细胞方法，本发明采用的技术方案是，包括以下步骤:
[0017](I)在漏孔皿中加入培养液，将洗好的卵丘卵母细胞复合物移入漏孔皿中，前后左右晃动漏孔皿，目的使卵丘卵母细胞复合物均匀分布；
[0018](2)将移入卵丘卵母细胞复合物的漏孔皿皿底的环形凹槽置于一培养皿上面，在培养皿中加入适量操作液；
[0019](3)将卵丘卵母细胞复合物放到显微镜下，手持吹打针的手柄，脚踩气囊，首先吸入一段液体，而后在显微镜下找到目的卵丘卵母细胞复合物，将吹打针与目的卵丘卵母细胞复合物、漏孔皿皿底的漏孔三者对齐，踩压气囊，吹打针将目的卵丘卵母细胞复合物吹入脱除卵丘细胞用的漏孔，经过漏孔内壁上凹凸交错的螺纹的刮擦阻滞作用，使得附在卵母细胞周围的卵丘细胞脱落并从卵母细胞周围分离，分离后的卵母细胞和部分卵丘细胞最终落入与漏孔皿底部连接的培养皿中，进行后续操作；
[0020](4)挑出已经脱除卵丘细胞后的卵母细胞移入培养液进行培养；
[0021 ] (5)将漏孔皿内的液滴倒掉，加入蒸馏水清洗备用。
[0022]本发明的有益效果是:
[0023]1、操作简单，效率高，节省人力；
[0024]2、机械脱除卵丘细胞，减少对卵母细胞的伤害；
[0025]3、耗时短，提高卵母细胞成活率。
【附图说明】
[0026]下面结合附图和【具体实施方式】对本发明作进一步详细的说明。
[0027]图1是本发明脱除卵丘细胞装置实施例的漏孔皿主视图。
[0028]图2是本发明脱除卵丘细胞装置实施例的漏孔皿俯视图。
[0029]图3是本发明脱除卵丘细胞装置实施例的吹打针结构示意图。
[0030]图4是本发明脱除卵丘细胞装置实施例的洗刷工具结构示意图。
[0031]图5是本发明脱除卵丘细胞装置实施例的使用示意图。
[0032]图中标记，1-漏孔皿，2-大孔，3-中孔，4-小孔，5-针头，6-手柄，7-气管，8-气囊，9-活塞，10-凹槽，11-把手，12-培养皿。
【具体实施方式】
[0033]图5是一种脱除卵丘细胞装置，由漏孔皿、吹打针、气囊组成。
[0034]如图1所示的漏孔皿I为直径66mm的圆形玻璃皿，漏孔皿的皿底设有圆形凹坑，圆形凹坑的直径为60mm且与皿底为同一圆心，圆形凹坑用于连接60mm直径的培养皿。在漏孔皿皿底均布脱除卵丘细胞用的漏孔，漏孔分别为直径150 μm的大孔2、直径120 μπι的中孔3、直径90 μπι的小孔4，3种不同直径的漏孔从圆形皿底的圆心沿半径按直径从大到小由内向外均匀分布(图2)。
[0035]漏孔中直径为150 μπι的大孔适合于卵母细胞直径(包括卵母细胞周围透明带)在120 μπι?150 μπι之间，直径为120 μm的中孔适合于卵母细胞的直径(包括卵母细胞周围透明带)在90 μπι?120 μm之间，直径为90 μπι适合于卵母细胞的直径(包括卵母细胞周围透明带)在60 μπι?90 μπι之间。目前，常见实验动物卵母细胞直径(包括卵母细胞周围透明带)在60 μπι?150 μm之间。
[0036]在漏孔内设有内螺纹，漏孔内的螺纹具有机械脱除卵母细胞周围卵丘细胞的功能，