一种从葡萄叶中提取白藜芦醇的工艺的制作方法
【技术领域】
[0001]本发明属于生物技术领域，具体涉及的是一种从葡萄叶中提取白藜芦醇工艺。
【背景技术】
[0002]白藜芦醇是一种多酚类化合物，广泛存在于多种植物中。由于其具有抗癌、抗氧化、雌激素调节、抗菌消炎和预防心血管疾病等多方面的药理作用，含有白藜芦醇的功能性食品深受欢迎，市场需求很大。目前，从植物资源中提取和分离纯化白藜芦醇的研究越来越受到人们的关注。在国外，主要从葡萄和葡萄籽中提取白藜芦醇，国内主要以中药虎杖为原料进行提取，但都面临提取所用的植物原料匮乏、成本高等问题。
[0003]据报道，在葡萄的多个组织中都含有白藜芦醇，如葡萄皮、葡萄籽和葡萄叶等。我国葡萄资源丰富，但对葡萄叶的利用不足，仅有极少部分用于饲料或食物辅料，其余则作为废弃物自然分解或燃烧，这不但浪费了农业资源，而且造成了环境污染。因此，研究和开发葡萄叶中的白藜芦醇对扩大白藜芦醇的植物来源及提高葡萄相关产品的经济价值具有重要意义。
[0004]由于葡萄叶片产量巨大且取材方便，价格低廉，因此对葡萄叶中白藜芦醇提取意义深远。遗憾的是以往葡萄种植过程中，葡萄叶作为农业废弃物没有较好的利用。本发明的现实意义在于可以为葡萄产业提供一种变废为宝的方法，增加农民收入，降低农业生产成本，又可以缓解白藜芦醇需求增加与生产原料虎杖资源日益紧张的矛盾。
【发明内容】
[0005]本发明的目的是解决现有技术存在的缺陷，提供一种提取率尚、广品纯度尚、耗能低且对环境危害小，从葡萄叶中提取白藜芦醇的工艺。
[0006]本发明的技术方案是:一种从葡萄叶中提取白藜芦醇的工艺，其工艺步骤为:
(1)原材料采集:选择葡萄生产过程中自然脱落及种植期间人工打掉叶片；将收集到的葡萄叶洗净，避光保存；
(2)原料预处理:葡萄叶片中加入2-10重量份液氮预冷冻2-20分钟，随后进行机械粉碎得到叶粉；
(3)超声波提取白藜芦醇粗粉:将粉碎后的葡萄叶放入乙醇溶剂中，采用超声波提取，其中葡萄叶与乙醇溶剂的重量体积(g/ml)比为1:2 — 3 ;提取温度55?65°C，提取时间40?80min，提取结束后，对提取液进行过滤得滤液和滤渣，将滤液浓缩并回收溶剂，利用回收的溶剂对滤渣再次提取，提取温度和时间与第一次提取相同，提取结束后，对提取液进行过滤得滤液和滤渣，对滤液浓缩并回收溶剂；将两次提取的浓缩液进行混合后，干燥后得白藜芦醇粗粉；
(4)纯化:将白藜芦醇粗粉经HPD450A大孔树脂进行静态吸附及洗脱；柱层析条件为:上样速率为1.0mL/min，充分吸附后，先以30%的乙醇3BV洗脱除去极性大的杂质，再以95%的乙醇5BV洗脱，洗脱流速为1.0mL/min ;白藜芦醇得率为3mg/100g以上，含量为45%以上。
[0007]上述步骤(3)中所述超声波提取是300 W的功率下超声处理30 min。
[0008]本发明的技术方案采用乙醇与超声提取集成，根据葡萄叶中白藜芦醇在乙醇溶剂中的溶解性较高的特性，利用超声波产生的强烈振动、很高的加速度、强烈的空化效应、搅拌等特殊作用，提高物质分子之间的碰撞速度，使本发明的技术方案具有以下特点:1、提取效率高、提取成本低。采用了超声波提取技术，促进了白藜芦醇向提取溶剂中的溶解速度，从而大大减少了溶剂的用量，降低提取成本，提高萃取效率，为工业化生产奠定了基础。与现有技术相比，白藜芦醇的提取率可提高2-4倍左右，白藜芦醇产品的纯度与现有技术相比提高了 15-25个百分点；2、本发明提取的工艺条件温和，避免了在提取过程中白藜芦醇的生物活性的破坏，适合具有生物活性物质的提取。3、本发明能耗低。由于提取时间短、提取温度低、溶剂用量少等特点，降低了能耗，减少了废物的排放。4、由于在提取过程中所用的溶剂可以循环利用、溶剂用量小，对环境的影响较低。
【具体实施方式】
实施例
[0009](1)原材料采集:选择葡萄生产过程中自然脱落及种植期间人工打掉叶片；将收集到的葡萄叶洗净，避光保存；
(2)原料预处理:葡萄叶片中加入2-10重量份液氮预冷冻2-20分钟，随后进行机械粉碎得到叶粉；
(3)超声波提取白藜芦醇粗粉:将粉碎后的葡萄叶放入乙醇溶剂中，采用超声波提取，其中葡萄叶与乙醇溶剂的重量体积(g/ml)比为1:2 — 3 ;提取温度55?65°C，提取时间40?80min，提取结束后，对提取液进行过滤得滤液和滤渣，将滤液浓缩并回收溶剂，利用回收的溶剂对滤渣再次提取，提取温度和时间与第一次提取相同，提取结束后，对提取液进行过滤得滤液和滤渣，对滤液浓缩并回收溶剂；将两次提取的浓缩液进行混合后，干燥后得白藜芦醇粗粉；
(4)纯化:将白藜芦醇粗粉经HPD450A大孔树脂进行静态吸附及洗脱；柱层析条件为:上样速率为1.0mL/min，充分吸附后，先以30%的乙醇3BV洗脱除去极性大的杂质，再以95%的乙醇5BV洗脱，洗脱流速为1.0mL/min ;白藜芦醇得率为3mg/100g以上，含量为45%以上。
[0010]上述步骤(3)中所述超声波提取是300 W的功率下超声处理30 min。
【主权项】
1.一种从葡萄叶中提取白藜芦醇的工艺，其特征在于，包括以下工艺步骤: (1)原材料采集:选择葡萄生产过程中自然脱落及种植期间人工打掉叶片；将收集到的葡萄叶洗净，避光保存； (2)原料预处理:葡萄叶片中加入2-10重量份液氮预冷冻2-20分钟，随后进行机械粉碎得到叶粉； (3)超声波提取白藜芦醇粗粉:将粉碎后的葡萄叶放入乙醇溶剂中，采用超声波提取，其中葡萄叶与乙醇溶剂的重量体积(g/ml)比为1:2 — 3 ;提取温度55?65°C，提取时间40?80min，提取结束后，对提取液进行过滤得滤液和滤渣，将滤液浓缩并回收溶剂，利用回收的溶剂对滤渣再次提取，提取温度和时间与第一次提取相同，提取结束后，对提取液进行过滤得滤液和滤渣，对滤液浓缩并回收溶剂；将两次提取的浓缩液进行混合后，干燥后得白藜芦醇粗粉； (4)纯化:将白藜芦醇粗粉经HPD450A大孔树脂进行静态吸附及洗脱；柱层析条件为:上样速率为1.0mL/min，充分吸附后，先以30%的乙醇3BV洗脱除去极性大的杂质，再以95%的乙醇5BV洗脱，洗脱流速为1.0mL/min ;白藜芦醇得率为3mg/100g以上，含量为45%以上。2.根据权利要求1所述的从葡萄叶中提取白藜芦醇的工艺，其特征在于，上述步骤(3)中所述超声波提取是300 W的功率下超声处理30 min。
【专利摘要】本发明公开了一种从葡萄叶中提取白藜芦醇的工艺，其工艺步骤为：葡萄叶粉碎、乙醇与超声波集成提取白藜芦醇，纯化后得白藜芦醇产品。本发明的技术方案采用乙醇与超声提取集成，根据葡萄叶中白藜芦醇在乙醇溶剂中的溶解性较高的特性，利用超声波提取工艺，使本发明的技术方案具有提取效率高、产品纯度高、提取成本和能耗低，在提取过程中所用的溶剂可以循环利用、溶剂用量小，对环境的影响较低，避免了在提取过程中白藜芦醇生物活性的破坏。
【IPC分类】C07C37/68, C07C39/21, C07C37/72
【公开号】CN105384605
【申请号】CN201510903067
【发明人】不公告发明人
【申请人】重庆三零三科技有限公司
【公开日】2016年3月9日
【申请日】2015年12月9日