一种乙酰化龙眼肉多糖及其在制药中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种乙酰化龙眼肉多糖及其在制药中的应用。
【背景技术】
[0002] 现代社会环境质量问题和生态生活问题日益突出，如何增强人体自身免疫功能成 为研究领域的热点，多糖类化合物是生物体内除蛋白质和核酸外又一类重要的生物大分 子，已被证实具有调节免疫、抗肿瘤、抗病毒、降血糖、降血脂、抗氧化等生物活性，尤其是能 够增强机体的免疫功能而对正常细胞没有毒副作用，受到国内外医药界的广泛重视。多糖 生物活性的发挥与其结构有关，通过利用糖链上的羧基、羟基、氨基等基团进行化学方法修 饰引入其他基团，能够提高多糖的活性甚至增加新的活性。常用的多糖结构修饰的方法有 硫酸化、羧甲基化、烷基化、部分水解、硒化、乙酰化、氧化、磷酸酯化、双基团衍生化等。乙酰 化分子修饰是糖类物质的一种常用的分子修饰方法，主要是修饰多糖分子的支链。修饰后 的多糖溶解度可以得到较大的改善，其主要原因是乙酰基能使多糖支链得到伸展而发生变 化，导致多糖羟基暴露在外，从而增加在水中的溶解度。一般来讲，修饰后带有乙酰基的多 糖溶解度增加有利于其活性的发挥。例如:斜顶菌多糖经乙酰化修饰后，抑肿瘤活性较修饰 前有所提高；乙酰化修饰后的壳聚糖表现出明显的抗肿瘤活性;茶多糖经乙酰化修饰可以 显著改变茶多糖APTT凝血指标，导致其抗凝血活性显著增强。因此非常有必要对多糖进行 乙酰化修饰，探寻乙酰基团取代位点、构效关系以及相关的生物活性，为设计多糖类乙酰化 衍生物提供参考依据。
【发明内容】
[0003] 本发明的目的是提供乙酰化龙眼肉多糖的合成方法，获得乙酰化龙眼肉多糖抗氧 化作用和体内调节免疫作用的结果。
[0004] 本发明通过以下技术方案达到上述目的：
[0005] -种乙酰化龙眼肉多糖，由以下方法合成:将龙眼肉多糖溶于超纯水中，交替加入 氢氧化钠溶液和乙酸酐，搅拌反应并使反应体系的pH始终保持在8.0~10.0范围内，反应后 将反应液进行透析浓缩、醇沉和冷冻干燥后即得乙酰化龙眼肉多糖。
[0006] 所述的乙酰化龙眼肉多糖的合成方法具体为:将龙眼肉多糖溶于超纯水中，调节 溶液pH范围为8.0~10.0,在42°C条件下交替加入氢氧化钠溶液和乙酸酐，并使反应体系的 pH始终保持在8.0~10.0范围内，直至乙酸酐加完，搅拌反应30min后用盐酸溶液调至中性， 将反应液置于截留分子量为3500的透析袋中透析48h，透析液经浓缩，醇沉和冷冻干燥后即 得乙酰化龙眼肉多糖。
[0007] 本发明还要求保护乙酰化龙眼肉多糖在制药中的应用。
[0008] 所述的乙酰化龙眼肉多糖在制药中的应用包括以下7个方面：
[0009] (1)乙酰化龙眼肉多糖在制备抗氧化或免疫调节制剂中的应用。
[001 0] (2)乙酰化龙眼肉多糖在制备清除自由基制剂中的应用，乙酰化龙眼肉多糖有效 浓度为2~12mg/ml。
[0011] (3)乙酰化龙眼肉多糖在制备抗脂质过氧化制剂中的应用，乙酰化龙眼肉多糖有 效浓度为0.25~4.00g/L。
[0012] (4)乙酰化龙眼肉多糖在制备抑制红细胞溶血制剂中的应用，乙酰化龙眼肉多糖 有效浓度为28.60~457. lyg/m。
[0013] (5)乙酰化龙眼肉多糖在制备提高T淋巴细胞免疫水平制剂中的应用，乙酰化龙眼 肉多糖有效浓度为20~160mg/kg。
[0014] (6)乙酰化龙眼肉多糖在制备增强体液免疫功能制剂中的应用，乙酰化龙眼肉多 糖有效浓度为40~160mg/kg。
[0015] (7)乙酰化龙眼肉多糖在制备增强非特异性免疫功能制剂中的应用，乙酰化龙眼 肉多糖有效浓度为40~160mg/kg。
[0016] 本发明的有益效果在于：
[0017]将人工合成的乙酰化龙眼肉多糖用于体外抗氧化和体内免疫活性实验，获得乙酰 化龙眼肉多糖抗氧化作用及免疫调节作用的实验结果，为乙酰化龙眼肉多糖在制药中的应 用提供参考依据。
【附图说明】
[0018] 图1为实施例所述的龙眼肉多糖乙酰化修饰前后红外光谱分析结果示意图。其中A 线代表龙眼肉多糖A，B线代表乙酰化龙眼肉多糖A。
[0019] 图2为实施例所述的羟基自由基清除实验结果示意图。
[0020] 图3为实施例所述的龙眼肉多糖A和乙酰化龙眼肉多糖A对小鼠脾脏指数的影响结 果示意图。（其中，11 = 10，$〈0.05或*$〈0.01"环磷酰胺组）
[0021] 图4为实施例所述的龙眼肉多糖A和乙酰化龙眼肉多糖A对小鼠迟发型变态反应的 影响结果示意图。（其中，n = 10/p〈0.05或#p〈0.01vS环磷酰胺组）
[0022]图5为实施例所述的龙眼肉多糖A和乙酰化龙眼肉多糖A对小鼠血清中溶血素 (HC5Q)的影响结果示意图。（其中，n=10，*p〈0.05或、〈O.Olvs环磷酰胺组）
[0023]图6为实施例所述的龙眼肉多糖A和乙酰化龙眼肉多糖A对小鼠脾脏中LZM的影响 结果示意图。（其中，n = 10/p〈0.05或#p〈0.01vS环磷酰胺组）
[0024]图7为实施例所述的龙眼肉多糖A和乙酰化龙眼肉多糖A对小鼠血清中LZM的影响 结果示意图。（其中，n = 10/p〈0.05或#p〈0.01vS环磷酰胺组）
【具体实施方式】
[0025]以下通过实施例对本发明的技术方案作进一步说明。
[0026] 1、龙眼肉多糖A的制备
[0027] 龙眼干果剥壳去核后，称取1.5kg龙眼肉于4倍量水中，控制水浴温度为90°C，每次 提取4h，提取次数3次。滤液浓缩后醇沉，干燥得龙眼肉粗多糖。龙眼肉粗多糖经脱蛋白、脱 色处理后得到龙眼肉精制多糖。DEAE-纤维素柱(2.5cmX80cm)分级纯化龙眼肉精制多糖， 依次用水，〇.125mol/L NaCl，0.30mol/L NaOH溶液进行洗脱，选取NaCl流分，用 36口1^〇巧13-300册柱(2.0〇111\40〇11)作进一步纯化，用水洗脱(48/滴），收集最大富集峰浓 缩后冷冻干燥，即得龙眼肉多糖A。
[0028] 2、龙眼肉多糖A乙酰化修饰
[0029] 准确称取龙眼肉多糖A样品0.2500g置于三角锥瓶中，加入10ml超纯水，超声助溶。 用氢氧化钠调节溶液pH至9.0。在42 °C条件下交替加入氢氧化钠溶液和乙酸酐，使反应体系 的pH始终保持在8.0~10.0范围内，直至乙酸酐加完，搅拌反应30min后用盐酸溶液调至中 性，将反应液置于截留分子量为3500的透析袋中透析48h，透析液经浓缩，醇沉和冷冻干燥 后即得乙酰化龙眼肉多糖A。
[0030] 3、龙眼肉多糖乙酰化前后红外光谱分析
[0031 ]在干燥灯下，分别精密称取lmg龙眼肉多糖A和乙酰化龙眼肉多糖A样品，加入 100mg KBr于玛瑙研钵轻轻研磨均匀，经压片机压成透明薄片，在4000-400(31^1下扫描，扣除 空气空白背景后得到龙眼肉多糖A和乙酰化龙眼肉多糖A的红外扫描图谱。
[0032]由图1可知，3430CHT1处的宽吸收峰表示0-H的伸缩振动，2927CHT1处的弱吸收表示 C-H的特征峰。龙眼肉多糖A经乙酰化修饰后出现了两个特征吸收峰：1740(^^1左右出现的 峰，推断为乙酰酯基C = 0的伸缩振动峰；1245CHT1左右出现的弱峰，推断为酯基的C-0伸缩振 动峰。以上结果证实乙酰基团的存在。此外，两图的红外吸收光谱非常接近，这说明乙酰化 修饰并未改变龙眼肉多糖的大体结构。
[0033] 4、乙酰化龙眼肉多糖A分子量的测定
[0034] SephadexG-100凝胶柱填装完毕后，平衡24h，待柱平衡后，依次精确称取T系列标 准葡聚糖(!'-500、1'-70、1'-40、1'-10)和乙酰化龙眼肉多糖六，用111110.1111〇1/1恥(：1溶解后， 分别上样，以〇. lmol/L NaCl溶液为洗脱液，过SephadexG-100凝胶柱，以6.8s/滴的