用通常的方法进行，没有特别限定。
[0043] 例如，可以使用市售的核酸提取试剂盒(Water RNA/DNA Purification Kit-0.22 ym，Norgen Biotek Corporation制），用过滤器过滤液体而浓缩微生物，将其细胞破碎、溶 菌，提纯核酸，由此来恰当地进行核酸的提取。另外，也可以利用CTAB法(Cetyl trimethyl ammonium bromide)、DNA提取装置等来进行核酸的提取。
[0044] (3)核酸扩增工序
[0045] 核酸扩增工序中，将核酸提取工序中所提取的核酸的一部分扩增。由此，就可以将 成为试样的基因组DNA中的扩增对象区域扩增到检测所必需的数量。
[0046] 如此所述，根据本实施方式的微生物的检查方法，可以在采集工序中使用气旋式 的空气采样器将飘浮于空气中的微生物回收到液体中，并且在核酸扩增工序中将微生物的 核酸扩增。
[0047] 因此，即使在采集工序中不长时间进行微生物的回收，也可以在核酸扩增工序中 充分地扩增微生物的核酸，从而能够在检测工序中恰当地检测该微生物。
[0048] 作为核酸的扩增方法，没有特别限定，然而例如可以合适地使用PCR法。
[0049 ] PCR法中所用的PCR用反应液例如优选设为包含以下的组成的反应液。即，可以合 适地使用含有核酸合成底物、引物组、核酸合成酶、标记成分、试样的基因组DNA、缓冲液、以 及作为剩下的容量部分的水的PCR用反应液。
[0050] PCR法中，可以使用用于使试样的基因组DNA中的扩增对象区域扩增的引物组使该 扩增对象区域扩增，得到扩增产物。此外，在后面的检测工序中，使扩增产物与能够与扩增 对象区域的一部分互补地结合的探针杂交。此后，检测杂交了的扩增产物中所含的标记成 分，由此就能够鉴定具有该基因组DNA的微生物。
[0051] 作为缓冲液，例如可以使用AmpdireCt(R)(株式会社岛津制作所）。
[0052] 作为PCR装置，可以使用普通的热循环仪等。
[0053] 作为PCR的反应条件，例如优选如下所示。
[0054] (a)95°C10分钟、（b)95°C(DNA变性工序)30秒、（c)56°C (退火工序)30秒、（d)72°C (0嫩合成工序)60秒(将(13)~心循环40次）、（6)72°(：10分钟
[0055] (4)检测工序
[0056] 检测工序中，将含有利用PCR法得到的扩增产物的溶液滴加到预先固定化有多种 微生物的探针的载体中。在该载体上固定化有与扩增产物互补地结合的探针的情况下，扩 增产物与探针发生杂交。此后，检测杂交了的扩增产物中所含的标记成分，由此可以分别特 异性地同时鉴定多种微生物的种类。
[0057]作为此种载体，可以合适地使用DNA芯片。DNA芯片只要是预先合成出检测对象的 微生物的基因组DNA中的、从借助PCR法的扩增对象区域中选择的探针、并固定化在基板上 的芯片即可，其他的方面没有特别限定。例如可以使用斑点型芯片、合成型DNA 芯片等。
[0058]具体而言，扩增产物的标记成分的检测例如可以如下所示地进行。
[0059]首先，向扩增产物中混合规定的缓冲液后滴加到DNA芯片，将DNA芯片在45°C静置1 小时。其后，使用规定的缓冲液，将没有杂交的PCR产物从DNA芯片冲掉。
[0060] 然后，将DNA芯片装在标记检测装置中进行标记成分的检测，判定是否存在有检测 对象的微生物。作为标记检测装置，例如可以使用荧光扫描装置等一般的标记检测装置。标 记及其检测方法并不限定于借助荧光的方法，也可以使用其他的方法。
[0061] 如上说明所示，根据本实施方式的微生物的检查方法，可以在采集工序中使用气 旋式的空气采样器将飘浮于空气中的微生物回收到液体中，并且在核酸扩增工序中将微生 物的核酸扩增。因此，即使不进行以往在核酸提取工序之前必须进行的微生物的前培养，也 可以获得足够检测的量的核酸，能够在检测工序中同时特异性地检测多种微生物。
[0062] 另外，即使在采集工序中不长时间进行微生物的回收，也可以在核酸扩增工序中 将微生物的核酸充分地扩增，因此能够在检测工序中恰当地检测微生物。
[0063] 因此，根据本实施方式的微生物的检查方法，能够进一步缩短包括取样在内的整 个检查的期间。
[0064] 另外，根据本实施方式的微生物的检查方法，可以不进行微生物的前培养地进行 该微生物的检测，因此也可以根据飘浮于空气中的微生物的残骸来鉴定该微生物。即使是 微生物的残骸，一旦由人吸入也会有产生健康损害的情况，因而能够更加迅速地检测它是 有益的。
[0065] [实施例]
[0066] 以下，对本发明的微生物的检查方法的实施例进行具体的说明。
[0067] 在采集工序中，为了将飘浮于空气中的微生物回收到液体中，使用气旋式的空气 采样器(Coriolis y，Bertin公司制），抽吸2个地点的空气，如下所示，得到共计4个样品。以 300L/分钟固定空气采样器的流速。
[0068] 首先，在地点A(厕所室内）进行3次空气的抽吸，将回收时间分别设为1分钟、3分 钟、5分钟，得到样品1-3。样品1-3的回收空气量分别为300L、900L、1500L。
[0069] 另外，在地点B(接待室内）进行1次空气的抽吸，将回收时间设为10分钟，得到样品 4。样品4的回收空气量为3000L。
[0070] 对于所有的样品，在空气回收的开始时刻，用于回收微生物的液体的量为10mL。在 空气回收后，液量因回收中的样品的蒸发而减少，因此回收时间越长，残存液量越少，对于 所有的样品，残存液量存在有5. lmL以上。
[0071] 从样品1 -4的液体中分别取出0. lmL，在直径90mm的皿中涂布在灭菌了的M40Y培养 基上。每个样品对2个培养基进行该操作，在25°C培养7天。该M40Y培养基是可以合适地培养 嗜干性霉菌、耐干性霉菌、嗜湿性霉菌的任意一种的培养基，是向1L蒸馏水中添加20g的麦 芽提取物、5g的酵母提取物、400g的蔗糖、20g的琼脂而得的培养基。
[0072]此后，在各个培养基中在第四天、第七天取出样品并利用目视计数生长了的菌落 数，对每个样品算出平均。将其结果表示于图1中。
[0073] 如图1所示，样品卜4的0. lmL中的霉菌数的平均分别为2、9、15、3个。因而，液体5mL 中的霉菌数分别可以换算为100、450、750、150个。如果考虑到回收空气量，则得到地点八的 样品1-3中的霉菌数大于地点B的样品4中的霉菌数的结果。对于其理由可以认为是因为，地 点A的空气比地点B的空气脏。
[0074] 然后，在核酸提取工序中，使用市售的核酸提取试剂盒（Water RNA/DNA Purification Kit_0.22ym，Norgen Biotek Corporation制），依照说明书进行操作，从样 品1-4的各液体中的霉菌中提取核酸。
[0075] 此时，将样品1-4的液体中的5mL分别用过滤器过滤，然后分离过滤器，回收到含有 玻璃珠的破碎管中后，加入溶菌缓冲液，以4800rpm进行5分钟破碎。利用该工序将回收到液 体中的霉菌依照每个过滤器用玻璃珠进行破碎，进行了规定的溶菌处理。在由此得到的溶 液中，从空气中回收到液体中的霉菌的胞子及菌丝的细胞壁都被破碎、溶菌。
[0076] 此后，对每个样品1-4得到的溶液进行提纯，得到DNA溶液。
[0077]然后，在核酸扩增工序中，将每个样品卜4的DNA溶液中的DNA的一部分利用