除去交联透明质酸中交联剂的方法
【专利摘要】本发明涉及一种除去交联透明质酸钠凝胶中交联剂1，4?丁二醇二缩水甘油醚的方法，方法是用30KD中空纤维膜超滤，纯化水循环体积为进料体积的2～4倍，超滤进料流速为4～10L/h，跨膜压力为0.02～0.15Mpa。本发明可以使交联透明质酸钠凝胶中交联剂1，4?丁二醇二缩水甘油醚的残留量小于1ppm，达到安全的范围内，确保交联透明质酸钠凝胶产品的安全性。
【专利说明】
除去交联透明质酸中交联剂的方法
技术领域
[0001] 本发明涉及一种除去交联透明质酸钠凝胶中交联剂1，4_ 丁二醇二缩水甘油醚的 方法，特别指的是用中空纤维膜超滤法去除交联透明质酸钠凝胶中交联剂1，4_ 丁二醇二缩 水甘油醚。 技术背景
[0002] 透明质酸(hyaluronic acid)又名玻尿酸，是由葡萄糖醛酸和乙酰氨基葡萄糖双 糖相互结合的线性大分子酸性粘多糖，广泛存在于人和脊椎动物组织的细胞外基质和链球 菌的荚膜中，具有良好的理化性能和生物相容性，在生物体内发挥着重要的作用。
[0003] 高纯度的药物级透明质酸钠已被制成注射剂，用于眼科手术、骨科手术、预防术后 粘连、治疗骨性关节炎和类风湿性关节炎，此外，也被用于面部注射美容，改进皮肤外观和 结构、减轻皱纹、阻止皮肤衰老或改进唇部性状。但在临床医学中发现，天然的透明质酸易 被生物降解，在体内存留时间较短，限制了透明质酸的应用。
[0004] 采用1，4_ 丁二醇二缩水甘油醚作为透明质酸的交联剂，将透明质酸进行交联，交 联后的透明质酸除了可以保留透明质酸原有的力学性能、生物降解性、生物相容性、安全 性、无免疫源性、无刺激性等特性外，还对自由基、热和透明质酸酶的降解作用具有更强的 抵抗性，这极大的提高了透明质酸在体内的保留时间，使其在体内的保留时间可以延长至6 个月甚至更久，这使得交联透明质酸的应用获得极大地推广，尤其是在获得新型医用生物 材料方面，如防术后粘连材料、软组织填充材料、新型药物释放基质、美容和整形填充物等。
[0005] 然而交联透明质酸中残留的交联剂1，4_ 丁二醇二缩水甘油醚不能被人体降解，交 联剂量过高，有致突变和引起不良反应甚至癌症的风险，故《整形手术用交联透明质酸钠凝 胶》对1，4_ 丁二醇二缩水甘油醚的残留有严格的规定，限制其残留量小于2ppm。去除交联剂 残留的常规方法是用乙醇侵泡洗涤，缓冲盐溶液溶胀透析，过滤等，这些方法效率不高，不 能有效去除交联剂的残留。因此，开发一种有效降低1，4_丁二醇二缩水甘油醚残留量的方 法，且能够实现大规模的放大生产，这对交联透明质酸钠凝胶的应用具有重大的意义。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的在于提供一种除去交联透明质酸钠凝胶中交联剂1，4_ 丁二醇二缩 水甘油醚的方法，采用中空纤维膜超滤法去除交联透明质酸钠凝胶中交联剂1，4-丁二醇二 缩水甘油醚，使交联剂的含量达到安全的范围，确保交联透明质酸凝胶产品的安全性。
[0007] 本发明提供一种除去交联透明质酸钠凝胶中交联剂1，4_ 丁二醇二缩水甘油醚的 方法，包括如下步骤：
[0008] 将交联透明质酸钠凝胶进行透析溶胀处理后，超滤浓缩，真空干燥，得到去除交联 剂1，4_ 丁二醇二缩水甘油醚的交联透明质酸钠凝胶。
[0009] 本发明中的交联透明质酸钠凝胶，其所使用的交联剂为1，4_ 丁二醇二缩水甘油 醚，其中交联剂加入量与透明质酸钠凝胶的质量比为〇. 〇 1 -〇. 1。
[0010] 本发明中透析溶胀是将透明质酸钠凝胶加入用磷酸氢二钠和磷酸二氢钠与0.9 % 生理盐水配制，用0.1 m ο 1 / L的盐酸调节ρ Η值至7.0所得到的透析液中，在2 0 °C~3 0 °C范围 内，透析12~15小时，直至达到透明质酸吸水平衡，其中透明质酸与透析液的质量体积比为 lg/L〇
[0011] 本发明中交联透明质酸凝胶进行透析溶胀处理后的浓度<lg/L，使其具有较好的 流动性。
[0012] 本发明中超滤以纯化水为循环体系，在一定的流速与跨膜压力下，用中空纤维膜 进行超滤。
[0013] 本发明中纯化水循环体积为进料体积的0~4倍，超滤进料流速为1~10L/h，跨膜 压力为0 · 02~0 · 2Mpa，中空纤维膜〈980KD。
[0014] 本发明中纯化水循环体积优选为进料体积的2~4倍，超滤进料流速为4~10L/h， 跨膜压力为〇 . 02~0.15Mpa，中空纤维膜为30KD进行超滤，在60°C真空干燥，得到浓度为 50mg/mL的透明质酸，可通过气相色谱法测得交联透明质酸中1，4-丁二醇二缩水甘油醚的 残留量。气相色谱使用的是Agilent DB-170(0.32mmX30m，0.25ym)色谱柱，气相色谱测试 条件：柱温：初温120°C，以30°C/min升至260°C，保持lOmin;检测器:FID;检测器温度：300 °C ;进样口温度:260°C ;载气:;载气流速:4mL/min;分流比：1:1。
[0015] 本发明提供了一种用中空纤维膜超滤除去交联透明质酸钠凝胶中交联剂1，4_ 丁 二醇二缩水甘油醚的方法，该方法不仅可以确保透明质酸产品的安全性，且操作简单，成本 低廉，绿色无污染，可以实现工业化生产。
【具体实施方式】
[0016] 实施例：
[0017] 1)交联透明质酸凝胶的制备
[00?8] 在25°C下将1 · 60mg的氢氧化钠溶解于400mL的水中，加入0 · 5g的1，4-丁二醇二缩 水甘油醚，溶解后，加入l〇g透明质酸(购自山东福瑞达生物化工有限公司，平均分子量为98 万道尔顿），搅拌30分钟后，升高温度至50°C，搅拌4小时，得到交联透明质酸钠凝胶。
[0019] 2)透析溶胀处理
[0020] 在25 °C下，将8.55g磷酸氢二钠和1.20g磷酸二氢钠溶于10L含量为0.9 %生理盐水 中，过滤，滤液用0.1m〇l/L盐酸调节pH值至7.0,加入步骤1)得到的透明质酸钠凝胶，透析溶 胀12小时，直至透明质酸达到吸水平衡。
[0021] 3)超滤
[0022]将步骤2)得到的透明质酸钠凝胶用30KD中空纤维膜进行超滤，控制跨膜压力，纯 化水循环体积，进料流速等参数，同时使各组透明质酸钠凝胶超滤浓缩后的体积为2L。超滤 条件与结果如表1所示：
[0023]表1:超滤条件与实验结果
[0025] 4)真空干燥
[0026] 在60°C下，对步骤3)得到的凝胶进行真空浓缩，得到50mg/mL除去交联剂1，4-丁二 醇二缩水甘油醚的交联透明质酸钠凝胶。
[0027] 其中，透明质酸凝胶浓度由硫酸咔唑法进行检测；1，4_丁二醇二缩水甘油醚含量 由气相色谱法进行检测；
[0028]实验结果表明，该方法在保证收率不小于80%的情况下，可以有效将交联透明质 酸钠凝胶中交联剂1，4_丁二醇二缩水甘油醚残留降至O.lppm以下，保证了该交联透明质酸 凝胶样品的安全性，证明了超滤法去除交联透明质酸凝胶中1，4_丁二醇二缩水甘油醚的有 效性。
【主权项】
1. 一种除去交联透明质酸钠凝胶中交联剂I，4-丁二醇二缩水甘油醚的方法，特征在 于： 将交联透明质酸钠凝胶进行透析溶胀处理后，超滤浓缩，真空干燥，得到去除交联剂1， 4-丁二醇二缩水甘油醚的交联透明质酸钠凝胶。2. 根据权利要求1所述的方法，其中，交联透明质酸凝胶进行透析溶胀处理后的浓度< lg/L〇3. 根据权利要求1所述的方法，其中，所述的超滤以纯化水为循环体系，在一定的流速 与跨膜压力下，用中空纤维膜进行超滤。4. 根据权利要求3所述的方法，其中，纯化水循环体积为进料体积的0~4倍，超滤进料 流速为1~l〇L/h，跨膜压力为0.02~0.2Mpa，中空纤维膜<980KD。5. 根据权利要求3所述的方法，其中，纯化水循环体积为进料体积的2~4倍，超滤进料 流速为4~10L/h，跨膜压力为0 · 02~0 · 15Mpa，中空纤维膜为30KD。
【文档编号】C08L5/08GK105949478SQ201610292499
【公开日】2016年9月21日
【申请日】2016年5月5日
【发明人】郭振权, 石江水, 凌世兰, 赵裕栋, 林小鹊, 张鸿
【申请人】广东东阳光药业有限公司