直没有新的菌落和结晶产生。
[0014]用灭菌过后的手术刀挑选培养基上的菌落和晶体保存于三角管中，同时用无菌水清洗三次以去除其他杂质，然后在37°C恒温干燥箱中干燥。然后通过对干燥之后的菌落结晶混合做扫面电镜，在一些饼状、球状和半球状的类似结晶附着在细菌表明和周围。通过对产生的菌落和结晶混合物做XRD分析，检出在Ml培养基中有磷酸铵镁产生，Cl培养基中有碳酸钙结晶产生。
[0015]综上所述，通过本方法利用改良的特定的培养基，从生物滤池中滤料表面的生物膜分离筛选酵母菌，通过接种酵母菌到含有钙盐和镁盐的培养基中，通过比较空白培养基发现。酵母菌表面和周围会诱导产生一些饼状、球状和半球状的结晶体。发现诱导培养出来的酵母菌对生物结晶有一定的促进作用。
[0016]本发明的有益效果是:本方法利用从生物滤池中的自然生长的微生物种群中提取出来的酵母菌种群，利用特制的固体培养基，在固体培养基中接种酵母菌，经过一定周期的恒温培养，明显可以在培养皿中发现新的磷酸盐结晶物质产生。发现从生物滤池的提取出的酵母菌能够明显的促进单一磷酸盐的结晶物质产生，可以在生物除磷的过程中，人为的调控生物生长环境，控制利于酵母菌生长的条件，提高生物除磷的效率和回收磷酸盐结晶的纯度。通过环境的细菌的种群的控制，形成高效新型的除磷工艺。
【具体实施方式】
[0017]一种利用酵母菌诱导磷酸盐结晶的方法，具体通过以下的步骤来实现:富含酵母菌的生物膜来自稳定运行的曝气生物滤池。生物滤池高1000mm，直径80mm。过滤填料为普通陶粒，粒径为3-5mm，填料高度为700mm。生物滤池采用自然挂膜的方式，处理普通生物污水。控制水力停留时间为2h，溶解氧为3-5mg/L，每隔10天反冲洗一次，连续培养3个周期，从每个周期出水水质稳定阶段取富含生物膜的滤料。
[0018]取富含生物膜的滤料50颗左右放入10mL的锥形瓶中，加入无菌的生理盐水50mL。首先在功率30W，频率为35KHz超声清洗锅超声5min，震下滤料表明的生物膜，然后在恒温振荡器中以200转/min的转速振荡1.5小时。然后取锥形瓶中的悬浮液备用。
[0019]本发明用特定的固体培养基分离备用悬浮液中酵母菌。培养基的各种营养物质的组成比例为:葡萄糖40g/L，蛋白胨10g/L，琼脂20g/l，KC11.8g/L，KH2P046mmOl/L。酵母菌的适应生长pH为3-5，为了抑制其他细菌的生长利用0.5mol/L的盐酸调节pH=4，同时在灭菌后培养基中加入100mg/L的金酶素，20mg/L的链霉素和20mg/L的氯霉素。利用涂布平板法取0.5mL的混合均匀的备用悬浮液均匀涂布在平板培养基表面，在25°C的恒温生物培养箱中培养72小时。在经过72小时的培养的平板上明显发现生物菌落。利用API 20CAUX系统法明显发现有足够多的酵母菌富集。
[0020]本发明利用钙盐培养基和镁盐培养基来诱导酵母菌促进磷酸盐结晶。钙盐培养基的组成成份:酵母浸膏10g/L，蛋白胨5g/L，葡萄糖lg/L，琼脂18g/L和醋酸钙4g/L。镁盐培养基的组成成份:酵母浸膏10g/L，蛋白胨5g/L，葡萄糖lg/L，琼脂18g/L和醋酸镁8g/L。利用0.5mol/L的氢氧化钠调节pH=7.2。培养基在120°C灭菌锅中灭菌20min。
【主权项】
1.一种利用酵母菌诱导磷酸盐结晶的方法，其特征在于:包括以下步骤: 1)酵母菌的筛选:a、收集滤料表面的生物膜；b、利用固体培养基分离筛选培养生物膜中的酵母菌； 2)酵母菌对磷酸盐结晶的诱导:在钙盐培养基和镁盐培养基中利用从生物膜中筛选的酵母菌诱导磷酸盐结晶的产生。
2.根据权利要求1所述的一种利用酵母菌诱导磷酸盐结晶的方法，其特征在于:所述步骤a收集滤料表面的生物膜的方法为:取富含生物膜的滤料50颗左右放入10mL的锥形瓶中，加入无菌的生理盐水50mL，首先在功率30W，频率为35KHz超声清洗锅超声5min，震下滤料表面的生物膜，然后在恒温振荡器中以200转/min的转速振荡1.5小时，然后取锥形瓶中的悬浮液备用。
3.根据权利要求1所述的一种利用酵母菌诱导磷酸盐结晶的方法，其特征在于:所述步骤b的固体培养基的组成成份:葡萄糖40g/L，蛋白胨10g/L，琼脂20g/l，KCl 1.8g/L，KH2PO4 6mmol/L，利用0.5mol/L的盐酸调节pH=4，同时在灭菌后培养基中加入100mg/L的金酶素，20mg/L的链霉素和20mg/L的氯霉素。
4.根据权利要求1所述的一种利用酵母菌诱导磷酸盐结晶的方法，其特征在于:所述步骤b的培养方法为:利用涂布平板法取0.5mL的混合均匀的备用悬浮液均匀涂布在平板培养基表面，在25°C的恒温生物培养箱中培养72小时。
5.根据权利要求1所述的一种利用酵母菌诱导磷酸盐结晶的方法，其特征在于:所述步骤2)中钙盐培养基的组成成份:酵母浸膏10g/L，蛋白胨5g/L，葡萄糖lg/L，琼脂18g/L和醋酸1? 4g/L。
6.根据权利要求1所述的一种利用酵母菌诱导磷酸盐结晶的方法，其特征在于:所述步骤2)中镁盐培养基的组成成份:酵母浸膏10g/L，蛋白胨5g/L，葡萄糖lg/L，琼脂18g/L和醋酸镁8g/L。
7.根据权利要求5所述的一种利用酵母菌诱导磷酸盐结晶的方法，其特征在于:钙盐培养基利用氢氧化钠调剂pH=7.2，120 °C灭菌锅中灭菌20min。
8.根据权利要求6所述的一种利用酵母菌诱导磷酸盐结晶的方法，其特征在于:镁盐培养基利用氢氧化钠调剂pH=7.2，120 °C灭菌锅中灭菌20min。
【专利摘要】本发明涉及废水处理技术领域，尤其涉及一种利用酵母菌诱导磷酸盐结晶的方法，来回收废水中的磷。本发明的技术方案为：一种利用酵母菌诱导磷酸盐结晶的方法，包括以下步骤：1）酵母菌的筛选：a、收集滤料表面的生物膜；b、利用固体培养基分离筛选培养生物膜中的酵母菌；2）酵母菌对磷酸盐结晶的诱导：在钙盐培养基和镁盐培养基中利用从生物膜中筛选的酵母菌诱导磷酸盐结晶的产生。本发明结合酵母菌主动吸附金属离子的特性，配置特定的培养基，利用酵母菌诱导磷酸盐结晶，最后达到去除和回收磷的目的。
【IPC分类】C02F3-34
【公开号】CN104556409
【申请号】CN201510009365
【发明人】邱立平, 刘志, 张守彬, 王嘉斌, 谢康, 孙成江, 王泽亚, 王彬
【申请人】济南大学
【公开日】2015年4月29日
【申请日】2015年1月9日