专利名称：一种杀虫脒分子印迹固相萃取柱的制备方法和应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及材料制备及农药分析领域，具体地说是涉及一种杀虫脒分子印迹固相萃取(MISPE)柱及制备方法，并主要用于蜂蜜样品中杀虫脒的选择性分离。
背景技术：
杀虫脒(chlordimeform)，化学名为N-(4-氯-邻甲苯基)-N'，N' -二甲基甲脒，别名N' -(2-甲基-4-氯苯基)-N，N-二甲基甲脒，杀螨脒，氯苯脒，克死螨，用于蜜蜂峰螨的防治，是剧毒品。由于实际样品中各种各样的基质成分和共存物的存在，农药残留又具有痕量特征，如果不对样品进行净化和富集，将会影响其检测的准确度和检出水平。目前液液萃取 (LLE)和固相萃取(SPE)是样品处理中最常用的样品处理方法，较之LLE，SPE耗时短，节约试剂，对操作人员的伤害较小，因而其应用也越来越广泛。但是众所周知，SPE的填料通常都是一些非选择性的吸附材料，在实际应用时，往往容易同时提取出其它的干扰物质，影响检测结果。因此，发展快速、高效、高选择性的样品前处理技术非常重要。分子印迹聚合物 (MIP)是为模板分子量身定做的高分子聚合物，具有预定性、实用性和识别性等特点，由于模板选择的多样性，使得MIP能广泛应用于物质的分离与分析过程，它对目标分子的高度选择性也是普通SPE填料所不能比拟的。目前关于杀虫脒MISPE柱的制备未见报道。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种杀虫脒MISPE柱及制备方法， 并加以应用，以高效地选择性分离蜂蜜样品中的杀虫脒，结合光度法即可实现蜂蜜样品中杀虫脒的快速分析。为实现上述目的，本发明以杀虫脒为模板，甲基丙烯酸为功能单体，乙二醇二甲基丙烯酸酯为交联剂，偶氮二异丁腈为引发剂，进行聚合制备出MIP，将其填充在固相萃取柱内得到杀虫脒MISPE柱。本发明中杀虫脒分子印迹固相萃取小柱的制备方法，按照下述步骤进行
(1)将杀虫脒、甲基丙烯酸按照摩尔比1:2 8的混合溶解于乙腈中，超声30min，使其分散于乙腈溶液中，于振荡器中25°C振荡他；然后按照甲基丙烯酸与乙二醇二甲基丙烯酸酯摩尔比为1:5的比例将乙二醇二甲基丙烯酸酯和偶氮二异丁腈加入到溶液中超声振荡 30min，其中所述的偶氮二异丁腈与杀虫脒的质量比为10 :4 ；向装有溶液的圆底试管通入氮气5min，密封后放入55°C恒温水浴中，反应Mh，制得块状聚合物；将得到的块状聚合物用研钵磨碎，过筛得到杀虫脒的分子印迹聚合物(MIP)。(2)将上述含有杀虫脒的MIP的颗粒，用索式提取器以含甲醇乙酸=9:1(V/V)的混合溶剂洗去模板分子。取出洗去模板分子的聚合物，加入甲醇浸泡过夜，以清洗去除分子印迹聚合物中残留的乙酸，干燥至恒重。(3)称取IOOmg上述杀虫脒分子印迹聚合物(MIP)颗粒，填充至空的固相萃取柱中，敲实压紧，制得杀虫脒分子印迹固相萃取(MISPE)柱。
上述杀虫脒分子印迹固相萃取柱的应用，可以应用于蜂蜜样品杀虫脒残留的选择性分离。本发明与以往的普通萃取法等相关技术相比，富集、净化效率高，并且杀虫脒分子印迹固相萃取小柱可以重复使用，成本低，可望成为蜂蜜样品中杀虫脒残留前处理的必备的手段。
附图1为上述杀虫脒、甲基丙烯酸、乙二醇二甲基丙烯酸酯按1:4:20的摩尔比条件合成的MIP对杀虫脒乙腈溶液的吸附量与非印迹聚合物(NIP)对同样溶液的吸附量随溶液浓度变化的曲线。
具体实施例方式
实施例1
一杀虫脒分子印迹固相萃取小柱制备
A将杀虫脒(0.0393g)、甲基丙烯酸按照摩尔比为1:4的比例混合溶解于乙腈中，超声 30min，使其分散于乙腈溶液中，置于振荡器中25°C震荡他。然后按照甲基丙烯酸与乙二醇二甲基丙烯酸酯摩尔比为1:5的比例将乙二醇二甲基丙烯酸酯和0. Ig偶氮二异丁腈加入到溶液中超声振荡30min。向装有溶液的圆底试管通入氮气5min，密封后放入55°C恒温水浴中，反应Mh，制得块状聚合物。将得到的块状聚合物用研钵磨碎，过筛得到杀虫脒的 MIP。B将上述含有杀虫脒的MIP的颗粒，用索式提取器以含甲醇乙酸=9:1(V/V)的混合溶剂洗去模板分子。取出洗去模板分子的聚合物，加入甲醇浸泡过夜，以清洗去除分子印迹聚合物中残留的乙酸，干燥至恒重。C称取IOOmg上述杀虫脒MIP颗粒，填充至空的固相萃取柱中，敲实压紧，制得杀虫脒MISPE柱。二杀虫脒分子印迹固相萃取小柱应用于蜂蜜样品杀虫脒残留的选择性分离
A取4. OOg均勻样品于离心管中，加入4mL 5. Omol/L的氢氧化钠和4mL石油醚，快速混勻3min,在离心机上3000r/min离心2min。弃去水相，加入2mL 1. Omol/L盐酸，快速混勻，以2000r/min离心lmin。弃石油醚层，加入5. Omol/L的氢氧化钠ImL和石油醚2mL，混勻，以2000r/min离心lmin。将石油醚相取出，于水浴(低于60°C )上挥发至干，用乙腈定容，作为蜂蜜样品提取液。B将上述杀虫脒分子印迹固相萃取小柱用2mL乙腈活化。C将制备的样品溶液加入到柱中，在重力作用下流过固相萃取小柱。D用5mL乙腈丙酮=1:2 (V/V)的混合溶剂在重力作用下淋洗固相小柱。E用5mL甲醇乙酸=9:1 (V/V)的混合溶剂在重力作用下进行洗脱，收集洗脱液。F将洗脱液用氮气吹干溶剂，用乙腈定容至0. 5mL后用分光光度计检测杀虫脒的含量。所制得的固相萃取小柱对蜂蜜中的杀虫脒具有专一性的选择，对蜂蜜样品提取液加标20 mg/L杀虫脒，杀虫脒的回收率为92. 60%。实施例2
一杀虫脒分子印迹固相萃取小柱制备
A将杀虫脒(0.0393g)、甲基丙烯酸按照摩尔比为1:4的比例混合溶解于乙腈中，超声 30min，使其分散于乙腈溶液中，置于振荡器中25°C震荡他。然后按照甲基丙烯酸与乙二醇二甲基丙烯酸酯摩尔比为1:5的比例将乙二醇二甲基丙烯酸酯和0. Ig偶氮二异丁腈加入到溶液中超声振荡30min。向装有溶液的圆底试管通入氮气5min，密封后放入55°C恒温水浴中，反应Mh，制得块状聚合物。将得到的块状聚合物用研钵磨碎，过筛得到杀虫脒的 MIP。B将上述含有杀虫脒的MIP的颗粒，用索式提取器以含甲醇乙酸=9:1(V/V)的混合溶剂洗去模板分子。取出洗去模板分子的聚合物，加入甲醇浸泡过夜，以清洗去除分子印迹聚合物中残留的乙酸，干燥至恒重。C称取IOOmg上述杀虫脒MIP颗粒，填充至空的固相萃取柱中，敲实压紧，制得杀虫脒MISPE柱。二杀虫脒分子印迹固相萃取小柱应用于蜂蜜样品杀虫脒残留的选择性分离
A取4. OOg均勻样品于离心管中，加入4mL 5. Omol/L的氢氧化钠和4mL石油醚，快速混勻3min,在离心机上3000r/min离心2min。弃去水相，加入2mL 1. Omol/L盐酸，快速混勻，以2000r/min离心lmin。弃石油醚层，加入5. Omol/L的氢氧化钠ImL和石油醚2mL，混勻，以2000r/min离心lmin。将石油醚相取出，于水浴(低于60°C )上挥发至干，用乙腈定容，作为蜂蜜样品提取液。B将上述杀虫脒分子印迹固相萃取小柱用2mL乙腈活化。C将制备的样品溶液加入到柱中，在重力作用下流过固相萃取小柱。D用5mL乙腈丙酮=1:2 (V/V)的混合溶剂在重力作用下淋洗固相小柱。E用7. 5mL甲醇乙酸=9:1 (V/V)的混合溶剂在重力作用下进行洗脱，收集洗脱液。F将洗脱液用氮气吹干溶剂，用乙腈定容至0. 5mL后用分光光度计检测杀虫脒的含量。所制得的固相萃取小柱对蜂蜜中的杀虫脒具有专一性的选择，对蜂蜜样品提取液加标20 mg/L杀虫脒，杀虫脒的回收率为91. 06%。实施例3
一杀虫脒分子印迹固相萃取小柱制备
A将杀虫脒(0.0393g)、甲基丙烯酸按照摩尔比为1:6的比例混合溶解于乙腈中，超声 30min，使其分散于乙腈溶液中，置于振荡器中25°C震荡他。然后按照甲基丙烯酸与乙二醇二甲基丙烯酸酯摩尔比为1:5的比例将乙二醇二甲基丙烯酸酯和0. Ig偶氮二异丁腈加入到溶液中超声振荡30min。向装有溶液的圆底试管通入氮气5min，密封后放入55°C恒温水浴中，反应Mh，制得块状聚合物。将得到的块状聚合物用研钵磨碎，过筛得到杀虫脒的 MIP。B将上述含有杀虫脒的MIP的颗粒，用索式提取器以含甲醇乙酸=9:1(V/V)的混合溶剂洗去模板分子。取出洗去模板分子的聚合物，加入甲醇浸泡过夜，以清洗去除分子印迹聚合物中残留的乙酸，干燥至恒重。C称取IOOmg上述杀虫脒MIP颗粒，填充至空的固相萃取柱中，敲实压紧，制得杀虫脒MISPE柱。二杀虫脒分子印迹固相萃取小柱应用于蜂蜜样品杀虫脒残留的选择性分离
A取4. OOg均勻样品于离心管中，加入4mL 5. Omol/L的氢氧化钠和4mL石油醚，快速混勻3min,在离心机上3000r/min离心2min。弃去水相，加入2mL 1. Omol/L盐酸，快速混勻，以2000r/min离心lmin。弃石油醚层，加入5. Omol/L的氢氧化钠ImL和石油醚2mL，混勻，以2000r/min离心lmin。将石油醚相取出，于水浴(低于60°C )上挥发至干，用乙腈定容，作为蜂蜜样品提取液。B将上述杀虫脒分子印迹固相萃取小柱用2mL乙腈活化。C将制备的样品溶液加入到柱中，在重力作用下流过固相萃取小柱。D用5mL乙腈丙酮=1:2 (V/V)的混合溶剂在重力作用下淋洗固相小柱。E用5mL甲醇乙酸=9 1(V/V)的混合溶剂在重力作用下进行洗脱，收集洗脱液。F将洗脱液用氮气吹干溶剂，用乙腈定容至0. 5mL后用分光光度计检测杀虫脒的含量。所制得的固相萃取小柱对蜂蜜中的杀虫脒具有专一性的选择，对蜂蜜样品提取液加标20 mg/L杀虫脒，杀虫脒的回收率为89. 35%。实施例4
一杀虫脒分子印迹固相萃取小柱制备
A将杀虫脒(0.0393g)、甲基丙烯酸按照摩尔比为1:6的比例混合溶解于乙腈中，超声 30min，使其分散于乙腈溶液中，置于振荡器中25°C震荡他。然后按照甲基丙烯酸与乙二醇二甲基丙烯酸酯摩尔比为1:5的比例将乙二醇二甲基丙烯酸酯和0. Ig偶氮二异丁腈加入到溶液中超声振荡30min。向装有溶液的圆底试管通入氮气5min，密封后放入55°C恒温水浴中，反应Mh，制得块状聚合物。将得到的块状聚合物用研钵磨碎，过筛得到杀虫脒的 MIP。B将上述含有杀虫脒的MIP的颗粒，用索式提取器以含甲醇乙酸=9:1(V/V)的混合溶剂洗去模板分子。取出洗去模板分子的聚合物，加入甲醇浸泡过夜，以清洗去除分子印迹聚合物中残留的乙酸，干燥至恒重。C称取IOOmg上述杀虫脒MIP颗粒，填充至空的固相萃取柱中，敲实压紧，制得杀虫脒MISPE柱。二杀虫脒分子印迹固相萃取小柱应用于蜂蜜样品杀虫脒残留的选择性分离
A取4. OOg均勻样品于离心管中，加入4mL 5. Omol/L的氢氧化钠和4mL石油醚，快速混勻3min,在离心机上3000r/min离心2min。弃去水相，加入2mL 1. 0mol/L盐酸，快速混勻，以2000r/min离心lmin。弃石油醚层，加入5. 0mol/L的氢氧化钠ImL和石油醚2mL，混勻，以2000r/min离心lmin。将石油醚相取出，于水浴(低于60°C )上挥发至干，用乙腈定容，作为蜂蜜样品提取液。B将上述杀虫脒分子印迹固相萃取小柱用2mL乙腈活化。C将制备的样品溶液加入到柱中，在重力作用下流过固相萃取小柱。D用5mL乙腈丙酮=1:2 (V/V)的混合溶剂在重力作用下淋洗固相小柱。
E用7. 5mL甲醇乙酸=9:1 (V/V)的混合溶剂在重力作用下进行洗脱，收集洗脱液。F将洗脱液用氮气吹干溶剂，用乙腈定容至0. 5mL后用分光光度计检测杀虫脒的含量。所制得的固相萃取小柱对蜂蜜中的杀虫脒具有专一性的选择，对蜂蜜样品提取液加标20 mg/L杀虫脒，杀虫脒的回收率为89. 35%。
权利要求
1.杀虫脒分子印迹固相萃取小柱的制备方法，其特征在于按照下述步骤进行(1)将杀虫脒、甲基丙烯酸按照摩尔比1:2 8的混合溶解于乙腈中，超声30min，使其分散于乙腈溶液中，于振荡器中25°C振荡他；然后按照甲基丙烯酸与乙二醇二甲基丙烯酸酯摩尔比为1:5的比例将乙二醇二甲基丙烯酸酯和偶氮二异丁腈加入到溶液中超声振荡 30min，其中所述的偶氮二异丁腈与杀虫脒的质量比为10 :4 ；向装有溶液的圆底试管通入氮气5min，密封后放入55°C恒温水浴中，反应Mh，制得块状聚合物；将得到的块状聚合物用研钵磨碎，过筛得到杀虫脒的分子印迹聚合物；(2)将上述含有杀虫脒的MIP的颗粒，用索式提取器以含甲醇乙酸=9:1的混合溶剂洗去模板分子；取出洗去模板分子的聚合物，加入甲醇浸泡过夜，以清洗去除分子印迹聚合物中残留的乙酸，干燥至恒重；(3)称取IOOmg上述杀虫脒分子印迹聚合物颗粒，填充至空的固相萃取柱中，敲实压紧，制得杀虫脒分子印迹固相萃取柱。
2.权利要求1所述的杀虫脒分子印迹固相萃取柱的应用，其特征在于可以应用于蜂蜜样品杀虫脒残留的选择性分离。
全文摘要
本发明一种杀虫脒分子印迹固相萃取柱的制备方法和应用，涉及材料制备及农药分析领域。以杀虫脒为模板，甲基丙烯酸为功能单体，乙二醇二甲基丙烯酸酯为交联剂，偶氮二异丁腈为引发剂，乙腈为致孔剂，采用本体聚合法合成分子印迹聚合物。将分子印迹聚合物颗粒均匀填充于固相萃取柱内，得到杀虫脒分子印迹固相萃取柱；以乙腈为上样溶剂、乙腈-丙酮为淋洗溶剂、甲醇-乙酸为洗脱溶剂，实现了蜂蜜样品中杀虫脒的分离、富集。与以往的普通萃取法等相关技术相比，富集、净化效率高，并且杀虫脒分子印迹固相萃取小柱可以重复使用，成本低，可望成为蜂蜜样品中杀虫脒残留前处理的必备的手段。
文档编号B01D15/08GK102228825SQ20111017726
公开日2011年11月2日 申请日期2011年6月28日 优先权日2011年6月28日
发明者代永佳, 吴娴, 王坤, 石杰, 童明珠, 陈冠华 申请人:江苏大学