本发明涉及的是一种食品安全技术领域的方法，具体的说，是涉及食用植物油中的叔丁基对苯二酚残留测试过程中高选择性分离、纯化、富集的叔丁基对苯二酚分子印迹固相萃取填充材料的制备方法。
背景技术：
叔丁基对苯二酚，结构式如下：
叔丁基对苯二酚，英文名称：tert-butylhydroquinone。分子式：c10h14o2，分子量：166.22。叔丁基对苯二酚可用于食用油脂、油炸食品、干鱼制品、饼干、方便面、速煮米、干果罐头、腌肉制品等食品中。研究表明tbhq能导致dna损伤，对人体的健康极为不利。如2010年的麦当劳事件。因此建立简便、快速、灵敏的各类食品中tbhq的检测方法，掌握目前食品中tbhq的添加浓度，对于tbhq的膳食暴露风险评估来说具有重要意义。食品样品基质比其他性质的样品(如土壤、空气)复杂，为获取准确可靠的检测结果，样品前处理过程十分重要。目前常用的检测样品前处理方法主要有直接用有机溶剂稀释、有机溶剂萃取法、凝胶渗透色谱法和基质固相分解法，这些方法前处理时间长、回收率不够理想，因此在前处理方法中使用专一性的的叔丁基对苯二酚分子印迹固相萃取柱做为前处理方法可实现tbhq检测的简便、快速及灵敏度高的要求。
分子印迹固相萃取(molecularlyimprintedsolid-phaseexaction,mispe)是利用mip选择性吸附机理制备spe填料，不仅可以提高spe净化效果，实现低浓度残留的富集，提高检测方法的灵敏度，而且可以实现spe柱的多次重复使用，降低检测成本。
技术实现要素：
本发明的目的在于针对现有的技术的不足，在检测过程中，富集浓度低，无法检测低含量的叔丁基对苯二酚。提供一种叔丁基对苯二酚分子印迹固相萃取柱填料的制备方法，使其能够简单、快速、高效测定食品塑料中的叔丁基对苯二酚残留量的选择性纯化和富集，可直接用于对叔丁基对苯二酚的特异选择性分离、高效富集。
为达到上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种叔丁基对苯二酚分子固相萃取柱填充材料的制备方法，其特征在于该方法的具体步骤为：
a.分子印迹聚合物的制备：将反应原料模板分子叔丁基对苯二酚、甲基丙烯酸、交联剂二甲基丙烯酸乙二醇酯按1：(4～6)：(40～60)的摩尔比加到18～40ml致孔剂乙酸乙酯中，混合均匀后，再按模板分子与过氧化二苯甲酰的摩尔比为1：(0.6～1.2)的比例，加入过氧化二苯甲酰，经脱气、充氮后，密封，在40～80℃温度下反应20～48hr，得粗的叔丁基对苯二酚分子印迹聚合物；
b.将上述粗的分子印迹聚合物研磨到粒度35～80μm，用甲醇，乙酸和水的混合溶剂进行索氏提取，甲醇和乙酸及水的体积比为(60～80)：(20～10)：(20～10)，提取时间24～72h，用乙腈反复清洗去除甲醇和乙酸，至中性为止。最后再用丙酮反复沉降，以除去细小的颗粒，得到叔丁基对苯二酚分子印迹固相萃取柱填充材料。
由于叔丁基对苯二酚分子印迹聚合物是一种具有特定空间结构和有效功能基团的交联聚合物，它对叔丁基对苯二酚分子的立体结构具有“记忆”功能，用此分子印迹聚合物材料装填于聚丙烯柱体内，制得叔丁基对苯二酚分子印迹固相萃取柱，对食品中叔丁基对苯二酚具有高选择性的分离、富集和纯化作用。
叔丁基对苯二酚分子印迹固相萃取柱层析法较普通溶剂萃取法、普通阳离子聚合物基体填料萃取柱简便、高效。具有专一选择性。可实现叔丁基对苯二酚残留的高纯化，低残留检测。
具体实施
现将本发明的具体实施叙述于后。
实施例1
叔丁基对苯二酚分子印迹固相萃取柱填充材料的制备，具体原料用用量见表1。
表1反应原料及用量
1.将反应原料模板分子叔丁基对苯二酚、功能单体甲基丙烯酸、交联剂二甲基丙烯酸乙二醇酯和致孔剂乙酸乙酯，按表1的用量依次加到磨口的两口瓶中，超声35min,混合均匀后，再加入过氧化二苯甲酰73mg，超声脱气15min，通氮气35min后，密封，在40℃油浴中反应20h,得粗叔丁基对苯二酚分子印迹聚合物。放入60℃鼓风干燥烘箱中除去溶剂后得到干燥叔丁基对苯二酚分子聚合物。
2.将上述的叔丁基对苯二酚分子印迹聚合物研磨到75μm，放入索氏提取器，用混合溶剂v(甲醇)：v(乙酸)：v(水)＝60：20：20反复抽提，连续提取时间24h,用乙腈反复清洗去除甲醇和乙酸，至中性为止。最后再用丙酮反复沉降，以除去细小的颗粒。将去除模板分子的聚合物，真空干燥(50℃)，得到叔丁基对苯二酚分子印迹固相萃取柱填充材料。
实施例2
叔丁基对苯二酚分子印迹固相萃取柱填充材料的制备，具体原料用用量见表2。
表2反应原料及用量
1.将反应原料模板分子叔丁基对苯二酚、功能单体甲基丙烯酸、交联剂二甲基丙烯酸乙二醇酯和致孔剂乙腈和水，按表2的用量依次加到磨口的两口瓶中，超声35min,混合均匀后，再加入过氧化二苯甲酰73mg，超声脱气15min，通氮气35min后，密封，在80℃油浴中反应48h,得粗叔丁基对苯二酚分子印迹聚合物。放入60℃鼓风干燥烘箱中除去溶剂后得到干燥叔丁基对苯二酚分子聚合物。
2.将上述的叔丁基对苯二酚分子印迹聚合物研磨到70μm，放入索氏提取器，用混合溶剂v(甲醇)：v(乙酸)：v(水)＝80：10：10反复抽提，连续提取时间72h,用乙腈反复清洗去除甲醇和乙酸，至中性为止。最后再用丙酮反复沉降，以除去细小的颗粒。将去除模板分子的聚合物，真空干燥(50℃)，得到叔丁基对苯二酚分子印迹固相萃取柱填充材料。
实施例3
叔丁基对苯二酚分子印迹固相萃取柱填充材料的制备，具体原料用用量见表3。
表3反应原料及用量
1.将反应原料模板分子叔丁基对苯二酚、功能单体甲基丙烯酸、交联剂二甲基丙烯酸乙二醇酯和致孔剂乙酸乙酯，按表3的用量依次加到磨口的两口瓶中，超声30min,混合均匀后，再加入过氧化二苯甲酰61mg，超声脱气15min，通氮气35min后，密封，在60℃油浴中反应24h,得粗叔丁基对苯二酚分子印迹聚合物。放入60℃鼓风干燥烘箱中除去溶剂后得到干燥叔丁基对苯二酚分子聚合物。
2.将上述的叔丁基对苯二酚分子印迹聚合物研磨到75μm，放入索氏提取器，用混合溶剂v(甲醇)：v(乙酸)：v(水)＝80：10：10反复抽提，连续提取时间24h,用乙腈反复清洗去除乙醇和乙酸，至中性为止。最后再用丙酮反复沉降，以除去细小的颗粒。将去除模板分子的聚合物，真空干燥(50℃)，得到叔丁基对苯二酚分子印迹固相萃取柱填充材料。
称量上述的叔丁基对苯二酚分子印迹固相萃取柱填充材料0.2g均匀填充在聚丙烯柱体内，得到叔丁基对苯二酚分子印迹固相萃取柱。
将上述的叔丁基对苯二酚分子印迹固相萃取柱应用于食品中叔丁基对苯二酚分子的高选择性分享富集，具体步骤为：
本发明上述方法制备的叔丁基对苯二酚分子印迹固相萃取小柱，应用于检测食品中叔丁基对苯二酚残留量的样品溶液的选择性纯化、富集，具体步骤如下：
(1).固相萃取小柱装填好后，首先用1ml甲醇活化，再用1ml乙腈活化；
(2).加入样品提取液或样品溶液(水样等液体样品)1ml；
(3).用5ml正已烷淋洗2次
(4).用5ml甲醇、乙酸的混合溶液，v(甲醇)：v(乙酸)＝85：15收集洗脱液，0.20μm滤膜过滤后，仪器分析。
其发明效果为，该固相萃取柱小柱净化食品提取液效果较好，在0.05～5.0mg/l的添加浓度范围内，叔丁基对苯二酚的回收率为86.3％～100.2％之间，rsd在0.8～4.73之间，符合叔丁基对苯二酚残留分析要求。
本发明制得的叔丁基对苯二酚分子印迹聚合物微球是一种具有固定孔穴大不、形状和有确定排列功能基团的高分子交联聚合物，对叔丁基对苯二酚分子的立体结构具有动态“记忆”功能。本发明采用其制备的叔丁基对苯二酚分子印迹固相萃取小柱，可应用测定食品样品中叔丁基对苯二酚残留量的提取溶液的选择性纯化、富集，较普通的液－液萃取法、普通的阳离子聚合物基体固相萃取柱的法更为简单、快速、效率可高达5～7倍。