一种氨基磁珠、其制备方法及应用与流程

文档序号:23430614发布日期:2020-12-25 12:04阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种氨基磁珠,其特征在于,包括二氧化硅包被的四氧化三铁纳米颗粒,其表面共价接枝有富氨基基团,磁纳米颗粒表面键合氨基密度大于0.18μmol/mg。

2.如权利要求1所述的氨基磁珠,其特征在于,所述富氨基基团,为c3以上的直链。

3.如权利要求2所述的氨基磁珠,其特征在于,所述富氨基基团为-ch2nh-c2h5nh-c2h5nh2。

4.如权利要求1所述的氨基磁珠,其特征在于,所述四氧化三铁纳米颗粒粒径≤30nm,所述二氧化硅包被的四氧化三铁纳米颗粒粒径在35nm-50nm之间。

5.如权利要求1至4任意一项所述的氨基磁珠的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:

将二氧化硅包被的四氧化三铁纳米磁珠颗粒,采用3-[2-(2-氨基乙基氨基)乙基氨基]丙基三甲氧基硅烷作为烷基化试剂,进行表面改性,共价接枝富氨基基团。

6.如权利要求5所述的氨基磁珠的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:

(1)将二氧化硅包被的四氧化三铁纳米磁珠颗粒分散于有机溶液中,使得二氧化硅包被的四氧化三铁纳米磁珠颗粒的浓度在2-7mg/ml,获得二氧化硅包被的四氧化三铁纳米磁珠颗粒分散液;

(2)向步骤(1)中加入烷基化试剂3-[2-(2-氨基乙基氨基)乙基氨基]丙基三甲氧基硅烷、以及氨水,使得每0.1g氧化硅包被的四氧化三铁纳米磁珠颗粒,对应添加烷基化试剂4-10mmol、以及氨水0.15-0.2ml,维持纳米颗粒的分散状态获得前体分散液;

(3)对于步骤(2)中获得的前体分散液,在室温至100℃反应8~12h发生烷基化反应,洗涤烘干后获得所述氨基磁珠。

7.如权利要求5所述的氨基磁珠的制备方法,其特征在于,步骤(1)所述有机溶液优选为二甲基甲酰胺(dmf)、和/或甲苯;所述氧化硅包被的四氧化三铁纳米磁珠颗粒的粒径在35nm-50nm之间。

8.如权利要求5所述的氨基磁珠的制备方法,其特征在于,所述二氧化硅包被的四氧化三铁纳米磁珠颗粒按照以下方法制备:

取纳米四氧化三铁颗粒分散与醇水溶液中,加入正硅酸四乙酯的乙醇溶液和氨水,使得每0.1g四氧化三铁粉末相应添加0.4-0.6g的正硅酸四乙酯、以及1-2.5ml的氨水,发生溶胶凝胶反应,洗涤烘干获得所述二氧化硅包被的四氧化三铁纳米磁珠颗粒;所述纳米四氧化三铁颗粒粒径≤30nm优选20nm,所述醇水溶液中乙醇与水体积比为3:1-4:1;所述硅酸四乙酯的乙醇溶液浓度在0.1-0.5g/ml之间;所述溶胶凝胶反应的反应条件为维持纳米颗粒分散、60℃~100℃反应8~12h。

9.如权利要求1至4任意一项所述的氨基磁珠的应用,其特征在于,应用于全血dna提取。

10.如权利要求9所述的氨基磁珠的应用,其特征在于,包括以下步骤:

s1、向经蛋白酶预处理的全血样本中加入dna结合液和本发明提供的氨基磁珠,混匀反应10min-40min,固液分离获得吸附有dna的氨基磁珠;每200μl全血样本对应使用所述氨基磁珠2mg-3mg;

s2、采用乙醇的水溶液进行洗涤;所述乙醇的水溶液1ml-3ml,浓度在70-75v/v%之间,洗涤次数大于等于两次,获得磁珠-dna复合物;所述磁珠-dna复合物可直接用于扩增、测序,也可以进行步骤s3洗脱;

s3、向所述磁珠-dna复合物加入洗脱液,将dna洗脱,固液分离收集液相获得提取的全血dna样本。


技术总结
本发明公开了一种氨基磁珠、其制备方法及应用。所述氨基磁珠,包括二氧化硅包被的四氧化三铁纳米颗粒,其表面共价接枝有富氨基基团,磁纳米颗粒表面键合氨基密度大于0.18μmol/mg。其制备方法包括以下步骤:(1)制备二氧化硅包被的四氧化三铁纳米磁珠颗粒分散液;(2)制备前体分散液;(3)发生烷基化反应,洗涤烘干后获得所述氨基磁珠。所述氨基磁珠用于全血DNA提取,能够一次性提取大量DNA样本供扩增和检测之用。

技术研发人员:徐佳;肖晗;杨渊;高雯琪;龚红建
受保护的技术使用者:武汉儿童医院
技术研发日:2020.09.30
技术公布日:2020.12.25
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