专利名称：血清钠离子酶法测定试剂及方法
技术领域：
本发明属于临床生化分析方法，用于血清中钠离子的测定。
背景技术：
在生物化学的临床实验中，血清钠离子测定是医院里常规的分析项目。钠的正常值是136-145mmol/L，临床上常见的电解质紊乱是低血钠症。
最早钠离子的分析方法是火焰光度法。该方法的原理是，某些待测钠原子通过加热刺激被激发，当回到基态时发出具有特征波长的光。火焰中由被激发的待测钠原子产生的特征波长，辐射能的强度直接与火焰中被激发的待测钠原子的数量成正比，而被激发的待测钠原子数量直接与样本中所要测定的钠原子的浓度成正比。这种方法需要的装置复杂而且昂贵，并且要使用可燃气体。
目前医院里普遍使用的钠离子测定的方法是离子选择电极法。理想的情况是，每个电极都具有单离子选择性，使电极只对一种离子有反应。实际情况却不是这样，所有的离子选择电极都存在有干扰离子。况且，尽管能对离子特异性电极进行校正，但通常特异性仍不是绝对的，所以用电极法测得的结果也不是十分准确。而且测定成本也比较高，尤其是辅助材料及仪器比较昂贵。
近几年又出现了血清钠离子的酶法测定方法。该测定方法的理论基础是许多离子都有激活酶的作用。钠离子的测定原理是通过钠依赖性β-半乳糖苷酶催化底物O-硝基吡喃糖苷的酶动力学反应检测钠，其产物O-硝基酚在405nm的吸光值上升与钠浓度成比例。由于血清中钠离子浓度太高，不适于直接测定，需要加入离子载体络合一部分钠离子，从而将钠离子调整到一个合适的浓度。酶对钠离子在这个浓度范围内的微小变化最敏感，这样就能够获得更准确的测定结果。
酶法测定不仅准确，而且更加方便，可以同其它常规检测项目一起用全自动分析仪进行检测，摆脱了原来的电极法的仪器，同时也降低了检测成本。原来的电极法不仅要另外购买仪器，而且还要经常更换电极，电解液的消耗也比较快，这些原因使电极法测定血清中的钠离子成本比较高，而采用酶法测定就不存在这些问题，所以测定成本降低很多。
发明内容
本发明的目的是提供一种用酶法测定血清中钠离子的试剂。
本发明的另一目的是提供该试剂的测定方法。
本发明提供的血清钠离子酶法测定试剂组成如下
本发明的试剂是由稀释液和冻干品组成的。因为有些组分在水溶液中保存的时间很短，所以要冻干保存。R1和R2测试时的用量比为2.5∶1，所以配制量比例为2.5∶1。配制过程如下R1(1)稀释液(1000ml)Tris-Hcl buffr pH 8.7(25℃)500mmol/L 1000ml，依次准确加入以下物质MgSO4LiCl乙二醇(α-氨基乙基)醚四乙酸锂15-冠-5醚(2)冻干品(100ml，10倍浓缩液)
Tris-Hcl buffer pH8.7(25℃)500mmol/L 100ml，依次准确加入以下物质二巯基乙醇β-galactosidase蔗糖18克(成型剂)R2(1)稀释液(400ml)Tris buffer pH8.7(25℃)10.0mmol/L 400ml(2)冻干品(100ml，4倍浓缩液)新蒸H2O 100ml，依次准确加入以下物质O-硝基-β-D-吡喃糖苷蔗糖15克(成型剂)除乙二醇(α-氨基乙基)醚四乙酸锂之外，都可以买到。乙二醇(α-氨基乙基)醚四乙酸锂是用乙二醇(α-氨基乙基)醚四乙酸(简称EGTA)和氢氧化锂(LiOH)配制的。方法如下称取1.902gEGTA溶解于5ml去离子水中，再加入4mol/L的LiOH溶液至EGTA全部溶解，再用去离子水稀释到50ml。(pH应该为8.7，25℃)。配制成品试剂时根据配方中的用量来取用。
本发明利用冠醚具有穴醚的特点与钠离子络合的能力，采用不同试剂的配比寻找出以上的用于血清钠离子酶法测定试剂。
本发明的关键在于使用了一种新型的离子载体，这种载体价格便宜，它属于冠醚类物质。与文献报道的方法不同之处在于他们使用的是一种穴醚类载体Kryptofix-2.2.1(简称K221)，它的化学分子式为C16H32N2O5，而穴醚是非常昂贵的，1ml大约4000元人民币。我们使用的冠醚类载体非常便宜。经过配方的筛选，获得了比较好的测定结果。该物质的化学式如下15-crown-5，称为15-冠-5醚，分子式C10H20O5。有文献报道(林自力，冠醚化合物比色测定钾钠的应用进展。)穴醚和冠醚对钠离子的络合能力如下
由于它们的大环结构中有空穴，加之内部的氧原子有共用电子对可与金属离子络合，故根据空穴的大小，可选择性络合不同直径的金属离子。虽然冠醚类物质络合钠离子的能力远远不如穴醚类物质，但是我们经过大量的实验，筛选了一个比较好的浓度，在灵敏度、准确度、精密度方面获得了与使用穴醚相同的效果。
血清钠离子测定的主要试剂的典型浓度范围如下
附表用冠醚配制钠离子测定试剂与用穴醚配制钠离子测定试剂性能比较
图1为用冠醚配制钠离子测定试剂与用穴醚配制钠离子测定试剂测定临床样本(n＝26)相关性比较x轴为用穴醚配制的试剂测定临床样本的结果；y轴为用冠醚配制的试剂测定临床样本的结果。
有益效果本发明使用价值比穴醚低得多的冠醚，并且测定效果达到与穴醚相似，测定方法简便的特点。
具体实施例方式
实施例
1.血清钠离子测定试剂组成
测试程序仪器全自动或半自动生化分析仪；温度37℃；比色杯1ml；主波长405nm；副波长660nm；方法两点速率法；操作；
充分混合，于37℃孵育0.5min，读A1，2min之后读A2，吸光度的变化ΔA＝A2-A1；计算使用高低两个标准，以吸光度的变化值对相对应的标准品的浓度值作标准曲线，样品的浓度可以根据样品吸光度的变化值从标准曲线上查出。
标准品是用氯化钠和氯化钾配制的标准溶液，为了使标准品和临床样本相近，所以要加入氯化钾。配制方法如下先配制两个基础溶液200mmol/LNaCl，4mmol/LKCl溶液(1#)1400ml和4mmol/LKCl溶液(2#)600ml，然后按照下表将两个溶液按照一定体积混合，就可以得到钠试剂盒的高低标准品。
因为通过计算所得的浓度不是很准确，需要用电极法来测定准确浓度，然后再用Randox的质控品检验证。
2.血清钠离子测定试剂组成
3.血清钠离子测定试剂组成
以上测定方法同实施例1。
权利要求
1.一种血清钠离子酶法测定试剂的组成如下
2.根据权利要求1所述的测定试剂，其特征在于冠醚为15-冠-5醚。
3.如权利要求1所述的测定试剂，其特征在于采用两点速率法，操作程序如下
充分混合，于37℃孵育0.5min，读A1，2min之后读A2，吸光度的变化ΔA＝A2-A1；计算使用高低两个标准，以吸光度的变化值对相对应的标准品的浓度值作标准曲线，样品的浓度可以根据样品吸光度的变化值从标准曲线上查出。
4.如权利要求1所述的测定试剂的用途用于测定血清中的钠离子。
全文摘要
本发明公开了血清中钠离子酶法测定试剂及方法，本发明采用冠醚具有穴醚的特点与钠离子络合能力应用不同试剂的配比寻找到比较好的浓度在灵敏度、准确度、精密度方法与穴醚效果相同。采用本发明测定的效果达到与穴醚相似但测定方法简便成本大大降低。
文档编号G01N33/84GK1869652SQ20061002845
公开日2006年11月29日 申请日期2006年6月30日 优先权日2006年6月30日
发明者朱绍荣 申请人:上海荣盛生物技术有限公司