专利名称：检测多种过敏原特异性抗体的预备载体及其制备方法
技术领域：
本发明涉及检测多种过敏原特异性抗体预备载体技术领域。
本发明是通过以下技术方案实现的检测多种过敏原特异性抗体的预备载体，至少两种过敏原附着在同一载体表面的不同位置上。所说的载体分别为玻璃片、塑料片、尼龙膜、醋酸纤维素膜及硝酸纤维素膜。
本发明检测多种过敏原特异性抗体预备载体的制备方法，将过敏原用PH7.2的缓冲液分别稀释成2-50ug\ml，然后用仪器或手工直接将其分别加在载体上，每点加样量为5nl-3ul，两点间的距离为50um-6mm，全部过敏原加样点组成一个正方形或长方形组合，同一组合中，同时加阳性对照物和阴性对照物；同一组合中每种过敏原可重复加样2-3次，然后经干燥、封闭、干燥、包装后待用；将玻璃载片浸入0.01-1％聚赖氨酸中37℃3小时或2-8℃24小时，取出晾干，然后将2-50ug\ml过敏原加到载体上，每点加样量为5nl-3ul，两点间的距离为50um-6mm，全部过敏原加样点组成一个正方形或长方形组合，同一组合中，同时加阳性对照物和阴性对照物；同一组合中每种过敏原可重复加样2-3次，然后经干燥、封闭、干燥、包装后待用；将载体加入5-20ug\ml亲和素中，37℃3小时或2-8℃过夜，取出晾干，将各种过敏原按常规方法进行生物素化，然后将生物素化的过敏原用仪器或手工的方式加在包被有亲和素的载体上，每点加样量为5n1-3ul，两点间的距离为50um-6mm，全部过敏原加样点组成一个正方形或长方形组合，同一组合中，同时加阳性对照物和阴性对照物；同一组合中每种过敏原可重复加样2-3次，然后经干燥、封闭、干燥、包装后待用。
本发明能够产生的有益效果因将至少两种过敏原附着在同一载体表面的不同位置上，它能够只通过一次抽血即可同时对多种过敏原特异性抗体进行定性或定量检测，它操作简单、对患者所造成的痛苦较小。
全部过敏原点和阳性对照点及阴性对照点构成一长方形组合。在10×10cm的醋酸纤维膜上共点90个相同的组合。将点好的膜置37℃20-60分钟取出，常规用2％BSA进行封闭，干燥后将其贴在一双面胶纸上，密封，2-8℃保存。
使用时，根据检测样品的多少，剪下组合，将其贴在一玻璃片或其他硬性薄片上，与标记物、洗涤液、反应物(底物)配合使用，可进行标记免疫的定性或定量测定。
实施例2取一制备好的本发明预备载体，将其贴在一玻璃片上，加待检血清样品100ul，使其覆盖全部过敏原组合点，置37℃1小时，用洗涤液洗5次，每次5分钟，加辣根过氧化物酶标记的抗人IgE(测IgG时用抗人IgG；测IgA时用抗人IgA)100ul，使其覆盖全部组合点，37℃1小时，洗涤5次，每次为5分钟，加50ul发光底物，反应30-60秒，于发光扫描仪上进行检测。出现明显发光点者，即为该种过敏原特异性IgE(或IgG、IgA)阳性。无发光点者即为阴性。
实施例3过敏原特异性IgE(或IgG或IgA)定量测定用实施例1制备的预备载体与同样方法制备的只点加抗人IgE(或抗人IgG或IgA)的预备载体及相应标记物，底物等配合使用，可同时定量检测预备载体上全部过敏原的特异性IgE(或IgG或IgA)。
取实施例1预备载体组合和6个同样方法制备的只点有抗人IgE(或IgG或IgA)重复3点的组合间隔贴在同一张玻璃片上，过敏原预备载体加待检血清样品100ul，应覆盖组合全部，抗人IgE(或IgG或IgA)预备载体分别加0，0.5，1，1.5，25，100Iu/ml的标准IgE(或IgG或IgA)，置37℃1小时，洗涤5次，每次5分钟，各预备载体分别加辣根过氧化物酶标记的抗人IgE(或IgG或IgA)100ul，37℃，1小时，洗涤，每载体加发光底物50ul，室温反应60秒后，于发光扫描仪上进行扫描。经分析软件分析，将标准载体上的光强度进行处理后，绘制出标准曲线，待测样品可根据各种过敏原点发光强度不同，从标准曲线上查出其相应的IgE(或IgG或IgA)的浓度。全部分析测试过程可由软件分析系统控制。
权利要求
1.检测多种过敏原特异性抗体的预备载体，其特征在于至少两种过敏原附着在同一载体表面的不同位置上。
2.根据权利要求1所述的检测多种过敏原特异性抗体的预备载体，其特征在于所说的载体分别为玻璃片、塑料片、尼龙膜、醋酸纤维素膜及硝酸纤维素膜。
3.检测多种过敏原特异性抗体预备载体的制备方法，其特征在于将过敏原用PH7.2的缓冲液分别稀释成2-50ug\ml，然后用仪器或手工直接将其分别加在载体上，每点加样量为5nl-3ul，两点间的距离为50um-6mm，全部过敏原加样点组成一个正方形或长方形组合，同一组合中，同时加阳性对照物和阴性对照物；同一组合中每种过敏原可重复加样2-3次，然后经干燥、封闭、干燥、包装后待用。
4.检测多种过敏原特异性抗体预备载体的制备方法，其特征在于将玻璃载片浸入0.01-1％聚赖氨酸中37℃3小时或2-8℃24小时，取出晾干，然后将2-50ug\ml过敏原加到载体上，每点加样量为5n-3ul，两点间的距离为50um-6mm，全部过敏原加样点组成一个正方形或长方形组合，同一组合中，同时加阳性对照物和阴性对照物；同一组合中每种过敏原可重复加样2-3次，然后经干燥、封闭、干燥、包装后待用。
5.检测多种过敏原特异性抗体预备载体的制备方法，其特征在于将载体加入5-20ug\ml亲和素中，37℃3小时或2-8℃过夜，取出晾干，将各种过敏原按常规方法进行生物素化，然后将生物素化的过敏原用仪器或手工的方式加在包被有亲和素的载体上，每点加样量为5nl-3ul，两点间的距离为50um-6mm，全部过敏原加样点组成一个正方形或长方形组合，同一组合中，同时加阳性对照物和阴性对照物；同一组合中每种过敏原可重复加样2-3次，然后经干燥、封闭、干燥、包装后待用。
全文摘要
本发明公开了一种检测多种过敏原特异性抗体的预备载体及其制备方法,至少两种过敏原附着在同一载体表面的不同位置上。将过敏原用pH7.2的缓冲液分别稀释成2－50ug/ml,然后用仪器或手工将其分别加在载体上,每点加样量为5nl－3ul,两点间的距离为50um－6mm,全部过敏原加样点组成一个正方形或长方形组合,同一组合中,同时加阳性对照物和阴性对照物;同一组合中每种过敏原可重复加样2－3次,然后经干燥、封闭、干燥、包装后待用。本发明解决了现有技术无法同时检测多种过敏原特异性抗体,以及操作繁琐并对患者造成痛苦较大的问题。
文档编号G01N33/543GK1374527SQ0211014
公开日2002年10月16日 申请日期2002年4月4日 优先权日2002年4月4日
发明者朱有名, 杨先锋, 朱晓蕾 申请人:朱有名