专利名称：用蛋白指纹法检测急性心肌梗死在血液中蛋白指纹的用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种新的生物样品中蛋白质分析方法，具体指用于生物样品分析的蛋白指纹法。本发明还涉及用滞留层析法捕获蛋白质组并采用计算机可读取的条码格式(蛋白指纹)分析的蛋白指纹法。
背景技术：
不论是细胞的正常功能还是病理特性都在一定程度上取决于细胞所表达的蛋白质功能。因此，鉴定细胞内表达的蛋白质的区别，可用于诊断疾病，并最终用于药物开发和疾病治疗。而要进行蛋白质表达和功能的差异化分析，要求能够达到分辨细胞内分子的复杂混合物的程度。但细胞内许多物质往往以微量存在，目前用于分析蛋白的方法在上述各方面都有局限，用这些常规手段难以进行定性鉴定和定量分析。
如，一种常用的分子分离方法是凝胶电泳。通常是用凝胶内等电点聚焦先分离蛋白质，再用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳进行第二次分离。结果得到一张根据等电点范围(净电荷)和大小(质量)来区分蛋白质的图。虽然有用，但是该方法存在以下几方面的局限。首先，该方法只提供生物分子的两项特征—质量和等电点(pI)。其次，各维度的分辨率受到凝胶分辨能力的限制。例如，通常很难区分质量差异小于5％或pI差异的生物分子。第三，凝胶的容量和灵敏度都有限，可能无法检测出少量表达的生物分子。第四，无法观察到分子量低于约10-20kDa的小蛋白或小肽。
又如，临床诊断疾病一般方法是要求特异性地检测出疾病的已知标记。但是，制备特异性结合标记并且能在复杂的混合物中鉴别出标记的试剂需要大量时间，这阻碍了此类诊断方法的发展。
其它分析方法可能克服以上局限之一或几项，但是难以将它们有效组合。例如，分析层析能够根据多种分析物/吸附剂相互作用来分离生物分子，但是作多维度分析却困难而费时。而且，该方法的灵敏度也很有限。
用质谱的方法测定蛋白质是较新的方法，但目前的质谱分析方法只能对蛋白质进行定性分析，无法进行定量分析，尤其在是样品中混合物复杂，蛋白质含量极小的情况下。
滞留层析法是上世纪90年代开发的一种新的生物分析方法(Singh TK，Fox PF，HealyA.J Dairy Res.62，629-640；1995 and Siegel MM，Tabei K，Bebernitz GA，Baum EZ.J Mass Spectrom.33，264-273；1998)，有人将其用于分子生物学和细胞生物学的研究中。滞留层析中先将待测样品与选定的吸附剂结合，然后检测滞留在吸附剂上的分析物。与常规层析不同，进行滞留层析时无需将分析物先从吸附剂上洗脱，而是直接进行检测。其优点是能够从复杂的样品混合物中准确地分辨出分析物。但目前未见到文献有用滞留层析法进行蛋白指纹鉴定分析。
蛋白指纹技术最早源于马铃薯/土豆品种鉴定(Desborough S and Peloquin SJ，American Potato Journal.45，220-229；1968 and Desborough S and Peloquin SJ，Theoretical and Applied Genetics.39，43-47；1969)。当时用电泳技术来区别分不同品种土豆。因为不同品种的土豆在电泳下有不同的蛋白指纹组合。由于人体细胞蛋白比土豆要复杂的多，故仅用电泳来鉴别疾病的蛋白指纹远远不能满足临床需要。
发明内容
本发明的目的是建立一种在生物样品中检测正常人细胞、不稳定型心绞痛细胞及急性心肌梗死细胞在血液中蛋白指纹用途的新方法。
本发明采用蛋白指纹法对蛋白质组进行鉴别。
蛋白指纹法是通过鉴别检测特定的蛋白质组用于疾病诊断。蛋白质组学(Proteomics)的定义是研究一组蛋白质在细胞终身表达的变化状态。蛋白质组学的目的之一是鉴定和描述由于不同细胞差异表达的有机生物分子。通过比较表达情况可以鉴定细胞内表达的蛋白质的区别。鉴别出可作为某种疾病标志的蛋白质组，可用于该疾病的诊断及治疗药物的筛选。
本发明所述的鉴别检测蛋白质组的方法是质谱法。
本发明用滞留层析法从复杂的样品混合物中准确地分辨出并捕获到用于检测的蛋白质组。滞留层析法是将样品与用于解吸谱分析的多种吸附剂/洗脱剂组合接触，由此利用其它分离和检测系统所无法达到的高信息分辨能力鉴定在两样品中存在情况不同的分析物(即，两份细胞或组织液提取物中差异表达的蛋白质)。根据吸附剂/洗脱剂组合的化学特性测定包括分子量在内的理化特征的蛋白质。详述本方法如下I 吸附剂包含阴离子，阳离子，亲水，疏水或配位共价金属螯合剂作用吸附剂，分离生物化学中的这些方法和由这些方法产生的吸附剂具有诊断反面的用途(即阴离子吸附剂捕获阳离子蛋白质，配位共价金属螯合剂上滞留说明多肽分析物内存在组氨酸残基)。更具体的说，可以开发出化学生物特异性吸附剂以检测重要的诊断标记。在某实施例中，基质可具有为诊断疾病或综合征所用标记组合而选用的吸附位点排列。
II 信息处理在特定洗脱条件下检测被吸附结合的分析物提供了有关样品中分析物及其化学特征的信息。吸附作用在一定程度上取决于吸附剂的结合特性。与吸附剂结合的分析物具有使得结合成为可能性的特性。例如，在特定pH下是阳离子的分子在具有该pH的洗脱条件下将与阴离子吸附剂结合。强阳离子分子只有在很强的洗脱条件下才从吸附剂上洗脱。所以，样品中特定分析物在特定洗脱条件下结合某种吸附剂的确定不仅通过分析物的彼此分离和与不具有结合所需的相应化学特性的分析的分离而分辨了混合物中的分析物，而且鉴定出了具有特定化学特性的一类或单一分析物。采集有关分析物在多种洗脱条件下在一种或多种吸附剂上的滞留信息不仅可详细分辨混合物中的分析物，而且提供有关分析物的化学信息，这些信息本身就可以完成对他们的鉴定。这种数据被称为“滞留数据”。
用可编程计算机分析滞留试验得出的数据是最简单的。计算机程序一般包括一个储存编码的可读介质。某计算机编码进入存储，其中包含了基质阵列上各种征点的位置，该处的吸附和用来洗涤吸附剂的洗脱条件。程序于是可用这些信息鉴定出阵列上确定某选择性的一组特征。计算机还包括这样的编码，它们接受来自探针上特定可定址位置的不同分子量的信号强度数据。这些数据指示所测分析物的数量，可能包括所测各分析物的信号强度和测得的分子量。
计算机还具有处理数据的编码。实施例之一中，处理方法涉及形成一个分析物识别特征概况。例如，可将据分子量测得的特定分析物的滞留数据根据特定的结合特性(例如与阴离子吸附剂)分类。收集到的数据提供某特定分析物化学特征的概况。滞留特性反映分析物功能，后者继而反映结构。例如，根据不同pH洗脱条件下在多种阳离子和阴离子吸附剂上的滞留水平数据所揭示的信息可以得出某蛋白质的等电点。这进而反映出该蛋白质内离子氨基酸的大致数量。所以，计算机可能包含将结合信息转化结构信息的编码。而且，对分析物的二次处理(例如翻译后修饰)改变识别特征，这可以由结合或质量差异反映出来。
得出的数据即蛋白指纹，它可以各种格式显示。一种格式中，信号强度显示成分子量的函数图。另一种格式又称“条码格式”，其中，信号强度沿着线性轴以暗度强度值显示，得出外观类似商场上所用条码带读取商品名称。
III 滞留层析涉及多种分离方法的组合，包括并行检测和描述多种分析物。这些组合方法具有多种用途。发展靶分析物检测法；差异蛋白质展示；毒理学筛选；多种诊断标记的同时检测；药物开发。
实施例对该方法进行了详细的描述。细胞样品通常包含数以百千计的蛋白质。人们可能希望准确分辨出样品中的每一种靶蛋白。第一步，用多种选择性条件建立靶分析物的滞留图。例如，吸附剂可以是阴离子交换剂。
从该滞留图可以挑选出至少一种靶分析物被保留的选择条件。可以挑选靶分析物发生最大结合的选择性条件。但是，如果该选择性条件对靶分析物的选择性比其他选择性条件更强，则宜选择靶分析物吸附并非最大的条件。例如，假设滞留图分析显示，在中性pH附近，靶分析物被阴离子交换保留，但也弱吸附于亲水性吸附剂。
IV 鉴定生物材料间差异表达的分析物的方法本发明的另一方面内容提供了鉴定在两种以上样品中差异表达的有机生物分子，特别是蛋白质的方法。“差异表达”指两样品间分析物量或质上的差异。这些差异可能缘于蛋白质表达的任一阶段，该方法利用了滞留层析的超常分辨能力和灵敏度。首先，使用同一组选择性条件制备的分辨率越高，所以，可比较的分析物数量也越多。然后，比较识别图以鉴定被两组吸附剂差异保留的分析物。差异滞留包括定量滞留。这提示表达的正调控或负调控。差异滞留还包括分析物质的差异。例如，蛋白质翻译后修饰的不同会造成识别图的不同，检测时表现为结合特性差异(例如，如果蛋白质被糖基化与凝集素结合将不同)或质量差异(例如翻译后切割的不同)。这种分析也可以用可编程计算机进行。
该方法特别适用于检测两种细胞差异表达的蛋白。两种细胞可以是正常细胞和病理细胞例如癌细胞，或不同水平的细胞，或不同发育或分化阶段的细胞，或细胞周期内不同部分的细胞。但是。该方法也可用来检测不同条件下的同种细胞。在这样的方法中，一份生物样品与测试试剂接触，另一份不接触。然后，比较两者的滞留图。根据滞留特性或质量的不同，该方法可以显示蛋白质或其他生物分子表达的增加或减少，或发生了某种改变。
利用滞留图获得的差异表达蛋白质理化特性信息，用本发明方法可测定蛋白质的候选特征。
本方法适用于鉴定疾病的诊断标记。与正常样品或细胞相比，患者样品或病理培养细胞中差异表达的蛋白质可能就是诊断标记。
V 通过分解代谢信号扩增提高灵敏度将大蛋白分裂成小片段然后检测这些小片段能够显著提高检测大蛋白在复杂混合物差异存在(例如，因为差异表达)的灵敏度。灵敏度的提高有几个原因。首先，当样品中所有蛋白质都被(例如)酶解而片段化时，大蛋白可能产生更多片段而不是小蛋白。其次，解吸谱法的整体灵敏度在低分子量时高于高分子量时。第三，蛋白片段化增加了来自靶分析物的信号数量，因此提高了测得分析物的可能性。第四，蛋白片段化提高了捕获可能性，因此提高了测得靶分析物的可能性。第五，如果蛋白质在两种样品中差异存在，那么通过增加来自该蛋白的信号数量，量的差异更可能被测得。
人体内的疾病蛋白标志物往往会受血液中酶的降解。这样，我们就可以用滞留层析法来捕获这种分解代谢信号，从而提高蛋白指纹的灵敏度。滞留层析分辨的分析物的具体实例包括生物大分子，例如肽，蛋白质，酶，糖，寡糖，多糖；上述生物大分子的片段，例如肽片段和蛋白质片段；上述生物大分子复合物，蛋白质-DNA复合物，受体-配体复合物，酶-底物，酶抑制剂，肽复合物，蛋白质复合物，糖复合物和多糖合物；生物小分子，例如氨基酸，药物，激素，合成小分子，例如药学或治疗上的有效药物。
本发明提供一种统一的操作系统，用于蛋白质功能，细胞功能和生物整体功能的发现和诊断。
更具体的说，根据分析物在至少两种不同选择条件下吸附固定相的能力(例如阴离子/阳离子，疏水性/亲水性，或特异性生物分子识别作用)在至少两种不同的第一维度上分离分析物。然后，用解吸谱(例如激光解吸质谱)根据质量在第二维度上分离分析物，进一步检测已分离的分析物。分析物所吸附的性质提供了分析物的物理化学信息。
在实施例中，所述的方法包括I)分析物与确切位置上的第一选择性条件(吸附剂)接触，使得分析物被吸附剂保留。II)在第一选择性条件下用解吸谱检测滞留的分析物。III)检测步骤包括用激光解吸质谱测定分析物的质量。
洗脱条件的差异在于pH，缓冲能力，离子强度，水结构特征，除垢剂种类，除垢剂强度，疏水性或介电常数。
本发明提供一种确定某分析物在第一和第二品中是否差异存在(例如差异表达)的方法。该方法可以用于通过差异蛋白质展示检测差异蛋白表达的组合方法。该方法包括A)测定分析物在第一样品中至少一种选择性条件下的第一滞留图；B)测定分析物在第二样品中相同选择性条件下的第二滞留图；和C)比较第一和第二滞留图之间的差异。两滞留图的差异肯定了分析物在第一和第二样品中的差异存在。
实施例之一是测定某种蛋白是否在两种不同样品，包含细胞的第一和第二样品或来自细胞的材料中差异表达。在实施例中，第一生物样品来自健康者，第二生物样品来自某种病症的患者。样品可选自例如血液，尿液，血清和组织。以在患者样品中增加的分析物作为侯选诊断标记。通常，确认一种诊断标记需在多个受试者中检测到该标记物。
本发明在可分析的样品类型上没有限制。本发明特别适用于分辨生物样品，尤其是生物液体和提取物中的分析物；还特别适用于分辨非生物有机组合物中的分析物，尤其是有机分子和无机分子的组合物。
滞留层析及蛋白指纹方法的具体操作步骤以下是用本发明提供的滞留层析及蛋白指纹方法的一个操作方案实例。
1.样品处理将生物样品稀释在溶液中。视需要离心澄清样品。
2.上样将样品点样在基质(包括阴离子、阳离子、亲水、疏水或配位共价金属螯合剂)一个位点上。
3.洗涤用结合溶剂洗涤。在样品完全干燥前将第一份2μL洗涤溶液加到该位点。洗涤溶液在位点上至少停留15秒。用移液管吸进几次。彻底清除第一份洗涤溶液，用第二份2μL洗涤液重复以上步骤。
用水彻底洗涤整个阵列。
自然干燥芯片。
加0.5μL吸能分子SINAPINIC酸(以50％乙腈，0.5％三氟乙酸的制备的标准溶液)。
自然干燥芯片。
用激光解吸/离子化飞行时间质谱仪用氮激光仪(335nm)和80cm飞行管分析阵列分析滞留与各位点的蛋白质。用计算机分析数据进行数据重叠展示。
本发明滞留层析及蛋白指纹法可用于细胞和临床疾病的诊断，如急性心肌梗死细胞的诊断。
本发明提供的方法的特点为(1)准确滞留层析的一个特点是能够从复杂的样品混合物中准确地分辨出分析物。滞留层析中检测的是滞留在吸附剂上的分析物。所以，滞留层析可提供有关滞留分析物化学或结构特征的直接信息。
滞留层析与常规层析存在以下区别。首先，滞留层析中检测的是滞留在吸附剂上的分析物。在常规层析中，分析物先从吸附剂上洗脱，然后进行检测。用常规方法检测不出吸附剂上洗脱下的分析物。第二，吸附层析与解吸质谱检测相结合提供了毫微微摩尔级的优良灵敏以及极高的分辨率。第三，在一定程度上，因为允许直接检测分析物，滞留层析提供了用多种不同选择性条件迅速分析滞留物的能力，由此提供多样品中分析物的快速维度描述。第四，吸附剂可以于预先确定的排列，可定址位置附着于基质上。这就能够对在不同洗脱条件下接触不同吸附位置(即，“亲合性位置”或“位点”)的分析物进行并行处理。
质谱直接分析有很强的准确性，一般误差率只有0.1-1.0Da。例如，检测出8131Da及8221Da被配位共价金属螯合剂表面的基质所捕捉的蛋白，由于质谱差率只有0.1-1.0Da，蛋白8131Da及8221Da不可能是一种蛋白质。因为蛋白质是由氨基酸组成的而氨基酸的平均质量为100Da，因此，必须有50Da以上的差距，才可能是第二种蛋白质。
(2)方便本方法将血清蛋白分成了几大类，即阴离子、阳离子、亲水、疏水或配位共价金属螯合剂作用蛋白。这样，可用质谱仪直接进行分析。
(3)快捷用本发明提供的蛋白指纹法进行疾病血清诊断时，无需对蛋白质进行测序。本发明采用了计算机“条码格式”，信号强度沿着线性轴以暗度强度值显示。此强度可以用扫描仪记录并用分析软件自动分析对比强弱，从而有助于临床复杂的诊断，如可用此“蛋白指纹”或条码格式进行医学分析。
心肌梗死是心血管疾病中死亡率最高的疾病之一，是严重威胁人类健康的重要疾病。目前临床上诊断急性心肌梗死的标准是①典型的持续的胸痛史，②典型的心电图改变，包括ST段抬高和Q波出现，③心肌酶学的改变。并认为以上三项中的二项以上阳性可诊断为急性心肌梗死。急性心肌损伤的临床诊断常依赖心电图和病史，但单一心电图还存在不足，心电图诊断急性心肌梗死的阳性率可达80％，仍有部分病人必须依靠生化标志物确诊。而心电图和心肌酶谱对心肌梗死确诊存在不足，因此寻求灵敏度和特异性均较高的血清学诊断方法是必要的。本研究通过蛋白质组学研究来发现一种灵敏度和特异性均较高且易于临床检测的方法。
具体实施例方式
实施例1 正常人细胞、不稳定型心绞痛细胞及急性心肌梗死细胞在血液中蛋白指纹的区分(1)实验方法一、材料1.标本来源急性心肌梗死患者组有99例患者，均经心电图和心肌酶谱诊断为急性心肌梗死，其中患者入院时立即采血45例，3小时后采血6例，6小时后采血11，9小时后采血12例，12小时后采血12例，24小时后采血8例，48小时采血5例；正常人组有45例正常人；不稳定型心绞痛患者组有21例患者。三个组年龄均在40-60岁间，有相似的暴露史。男女比例急性心肌梗死患者组为男性56例、女性43例；不稳定型心绞痛组为男性12例、女性9例；正常人组男性30例、女性25例。三组均无影响血清中蛋白质含量的其它相关性疾病。
2.试剂Cibacron Blue、尿素、乙腈、三氟乙酸、SPA(Sinapinic acid)均购自Sigma公司。
二、方法1.样品的收集全血采集后立即放入4℃冰箱静置3h，4℃1000r/min离心、30min后，吸取血清按100μl/管分装，置于-70℃保存；2.样品的准备用Cibacron Blue除去人血清中的白蛋白，后取20μl，按1∶7用pH7.0缓冲液(100mmol/L磷酸钠，250mmol/L氯化钠)稀释至150μl。
3.芯片的预处理芯片每孔加50μl 100mmol/L硫酸铜，室温下200r/min振荡5min，倒除硫酸铜，用去离子水冲洗5次后甩干，每孔中加入50μl 100mmol/L醋酸钠(pH4.0)室温下200r/min振荡5min，以除去没有结合的铜离子，芯片每孔加入150μl结合/洗脱缓冲液(50mmol/L HEPES pH7.0)，置于振荡器上，室温孵育5min后除去缓冲液，重复1次，后每孔加入50μl稀释好的样品，置于振荡器上，4℃孵育60min后除去缓冲液，接着用150μl结合/洗脱缓冲液冲洗3次，每次振荡5min，最后1次用1mM HEPES pH7.0快速冲洗，取出芯片，在每孔周围用疏水笔圈样品孔并风干，在EAM(SPA)中加入75μl乙氰，75μl 1％TFA，充分振荡5min确保SPA全部溶解，离心1min；每孔分2次加SPA(1μl/次)，2次之间允许各孔风干。
4.芯片检测用加有All-in-one标准蛋白质的芯片校正质谱仪，设定仪器参数，结果用计算机分析质谱数据。计算机以每秒1GHz的速度从所获得的原始数据快速精确的绘制出蛋白质质谱图。其中纵坐标为蛋白质相对含量，横坐标为蛋白质质荷比。
4.1蛋白质质荷比结合EAM后的蛋白质在激光的轰击下电离，带有电荷的蛋白质在加速电场的作用下，不同质荷比的蛋白质在长度一定的真空管中飞行所需的时间不同，蛋白质的质荷比(M/Z)与离子飞行时间的平方成正比。
由E＝UZ＝1/2mv2；t=Lv]]>推出M/Z=Kt2=2UL2t2]]>其中Z为离子所带电荷数，U为电压，v为飞行速度，L为加速飞行电场电压，K为常数。
4.2蛋白质相对含量带有正电荷的蛋白质离子束在到达检测器的一瞬间，电子倍增器将产生的瞬时电流(瞬时电流It＝Q/t，其中Q为t时刻检测器检测到的电荷数)转换成蛋白质的相对含量。
(2)实验结果用统计学方法，分析所得数据的形式是用计算机读取的条码格式，蛋白指纹显示为沿蛋白指纹着线性轴的暗度强度值信号，此强度可以用扫描仪记录并用分析软件自动分析对比强弱。通过分析几千种血清蛋白指纹峰，发现下述3种蛋白指纹可以用于区分正常人细胞、不稳定型心绞痛细胞及急性心肌梗死细胞。
1.质谱图分析设定参数分别对三组所得质谱图进行分析，共测三组有差异的蛋白质峰为38个，心肌梗死组与不稳定型心绞痛组及正常人组在33处蛋白质含量存在统计学显著性(P＜0.05)。
2.三组蛋白质的对比99例急性心肌梗死患者与45例正常人和21例不稳定型心绞痛患者血清中蛋白质的组成，结果发现8149.84±1Da，4649.63±1Da，3778.71±1Da三个蛋白质组成的生物标志物可将急性心肌梗死患者与正常人及不稳定型心绞痛患者准确的分组。用这个生物标志物分析数据共产生4个终节点其中终节点1只包含急性心肌梗死患者，共99例，满足M8149.84≤3.042(M代表相应蛋白质相对含量，下同)为终节点1；终节点2只包含正常人，其41例，满足M4649.63≤2.603为终节点；终节点3只包含正常人，共4例，满足M3778.71≤0.263为终节点3；终节点4只包含变异型心绞痛，其21例，满足M3778.71≥0.263为终节点4。错误分率为0％。
3.三组8149Da蛋白质含量差异正常人质荷比为8149Da蛋白质含量明显高于不稳定型心绞痛患者和急性心肌梗死患者，而不稳定型心绞痛患者又比急性心肌梗死患者要高。经方差分析，三组蛋白质含量差异有显著性(P≤0.01)。
表1三组在质荷比为8149Da处蛋白质的相对含量
注三组蛋白质相对含量比较(P≤0.01)。
4.预测准确率用统计学分析三组，结果显示用这3个蛋白质组成的生物标志物进行检测，发现99/99例急性心肌梗死患者与45/45例正常人及21/21例不稳定型心绞痛患者被正确分组，准确率为100％(165/165)。
5.特异性和敏感度99例急性心肌梗死患者用本方法均被诊断为急性心肌梗死患者，45例正常人用本方法均被诊断为正常人，不稳定型心绞痛患者均被本方法诊断为不稳定型心绞痛患者。灵敏度和特异性分别为100％(99/99)，100％(66/66)。
6.实验的重复性从我们的试验结果看，重复性很好，实验结果可靠，两样品孔测定的结果满足y＝0.9865x+0.098；R2＝0.9583。
(2)结论本研究利用IMAC3-Cu芯片对99例确诊为急性心肌梗死患者与45例正常人血清和21例结不稳定型心绞痛患者血清进行蛋白质对比分析，结果发现血清中质荷比4kDa至10kDa中的11个蛋白质相对含量三组有明显的差异，三组在质荷比为8149Da的蛋白质相对含量有明显差异，并且3个蛋白质所组合成的分组标准诊断急性心肌梗死的灵敏度为100％(99/99)，特异性为100％(66/66)。
本实验中心肌梗死患者组有发病后不同时间的血清标本，但结果仍与正常人与不稳定型心绞痛可以完全分开，表明在急性心肌梗死病程的不同时期都有相同的血清蛋白质的变化。
权利要求
1.一种用滞留层析法捕获生物样品中蛋白质的蛋白质分析方法，其特征是采用蛋白指纹法对样品中蛋白质组进行鉴别检测。
2.权利要求1所述的蛋白质分析方法，其中所述的鉴别检测中蛋白质组的方法是质谱法。分析所得数据的形式是可用计算机读取的条码格式(蛋白指纹)—蛋白指纹法，其质谱分析范围为0～500kDa。每一条码带代表一种分子量，其颜色深浅代表蛋白质量多与少。
3.权利要求1所述的蛋白质分析方法，其中所述的蛋白指纹(条码格式或质谱分子量的函数图)可以被编程计算机存储和用软件分析。
4.权利要求1所述的蛋白质分析方法，在滞留层析法中所用的吸附剂包括阴离子、阳离子、亲水、疏水或配位共价金属螯合剂作用吸附剂。
5.权利要求1中滞留层析法所用吸附剂的支持物可以是金属片，玻璃片，陶瓷片，陶瓷珠，磁性微粒或多聚体。
6.权利要求1所述生物样品来源于血液。
7.权利要求1所述蛋白指纹图谱在定期监测生物样品中蛋白指纹动态变化的用途。
8.用权利要求1的方法分析生物样品中特异的蛋白质组以检测正常人细胞、不稳定型心绞痛细胞及急性心肌梗死细胞在血液中蛋白指纹的用途。
全文摘要
本发明涉及一种用滞留层析法捕获蛋白质组进行分析的蛋白指纹法。本方法用质谱法进行鉴别检测蛋白质组。分析所得数据的形式是可用计算机读取的条码格式(蛋白指纹)。本发明的方法可用于检测血液中正常人细胞、不稳定型心绞痛细胞及急性心肌梗死患者细胞的蛋白指纹。本方法准确、方便且快捷。
文档编号G01N30/95GK1737567SQ20041005813
公开日2006年2月22日 申请日期2004年8月16日 优先权日2004年8月16日
发明者许洋, 高春芳 申请人:北京赛尔迪科技开发有限公司