专利名称：快速检测巴比妥类药的胶体金试纸的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种利用胶体金免疫分析方法检测巴比妥类药(BAR)的试纸。
背景技术：
巴比妥类(barbiturates)为巴比妥酸在C5位上进行取代而得到一组中枢抑制药。取代基长而有分支(如异戊巴比妥)或双键(如司可巴比妥)，则作用强而短；以苯环取代(如苯巴比妥)则有较强的抗惊厥作用；C2位的O被S取代(如硫喷妥)，则脂溶性增高，静脉注射立即生效，但维持时间很短。主要分为长效类、中效类、短效类、超短效类。
巴比妥类是普遍性中枢抑制药。随剂量由小到大，相继出现镇静、催眠、抗惊厥和麻醉作用。10倍催眠量时则可抑制呼吸，甚至致死。此类药物需用至镇静剂量时才显示抗焦虑作用。由于本类药物的安全性远不及苯二氮卓类，且较易发生依赖性，因此，目前已很少用于镇静和催眠。其中只有苯巴比妥和戊巴比妥仍用于控制癫痫持续状态；硫喷妥偶而用于小手术或内窥镜检查时作静脉麻醉。催眠剂量的巴比妥类可致眩晕和困倦，精细运动不协调。偶可致剥脱性皮炎等严重过敏反应。中等量即可轻度抑制呼吸中枢，严重肺功能不全和颅脑损伤致呼吸抑制者禁用。其药酶诱导作用可加速其他药物的代谢，影响药效。巴比妥类连续久服可引起习惯性。突然停药易发生“反跳”现象。此时，快动眼睡眠时间延长，梦魇增多，迫使病人继续用药，终至成瘾。成瘾后停药，戒断症状明显，表现为激动、失眠、焦虑，甚至惊厥。巴比妥类药为镇静催眠药和抗惊厥药，属第二类精神药品，它使大脑细胞从兴奋转入抑制，产生困倦、镇静和催眠作用。其不良反应有笨拙或眩晕、醉态，较少的有腹泻、头痛、关节或肌肉疼痛、恶心、呕吐、语言不清。这两种药品如果和酒一起服用，会增加松弛、眩晕、醉态等快感。由于其具有成瘾性、依赖性，所以国家相关部门将其列为毒品行列。
对巴比妥类药(BAR)的检测方法如气相色谱(GC)，气相色谱/质谱(GC/MS)，高效液相色谱(HPLC)等已有报道。高效毛细管电泳是近年来发展起来的分析方法，它具有分离能力强、分离效率高、分析时间短，所需的样品及溶剂量小等特点。国外已有利用胶束毛细管电动色谱法等，但是所需的时间较长，因此需要一种快速、方便的检测方法。
胶体金试纸的原理是利用抗原抗体的特异结合反应和免疫层析技术，利用特定的显色反应在试纸上准确的显示测试的结果，具有灵敏度高，特异性强，重复性好，精确度高，操作简单，检测快速准确的特点，无须复杂的设备。
发明内容
本发明目的在于提供了一种利用胶体金免疫分析方法来检测巴比妥类药(BAR)的试纸。
为了达到所述目的，本发明是通过以下技术方案实现的
在巴比妥类药(BAR)检测试纸底板中部为硝酸纤维素膜，硝酸纤维素膜上有一条巴比妥类药(BAR)合成免疫原试验线和一条羊抗鼠多克隆抗体控制线，在底板一端端头为吸水层，另一端端头为玻璃纤维样品层，硝酸纤维素膜两端分别与吸水层和抗巴比妥类药(BAR)单抗金标垫相互交叠连接，在抗巴比妥类药(BAR)单抗金标垫上压有玻璃纤维样品层。
把巴比妥类药(BAR)检测试纸的样品层放入被检测尿液中(液面不得超过MAX线)由于毛细管作用样品将沿着试纸条向吸水层端移动，当移动至抗巴比妥类药(BAR)单抗金标垫时，样品中的巴比妥类药(BAR)与抗巴比妥类药(BAR)金标探针发生特异试验，当移动至固定有巴比妥类药(BAR)合成免疫原试验线时，由于抗巴比妥类药(BAR)单抗金标垫中的抗体会与样品中巴比妥类药(BAR)结合而失去其与巴比妥类药(BAR)合成免疫原结合位点，因此其胶体金不能滞留于试验线上；相反，如果样品中没有与抗巴比妥类药(BAR)单抗金标垫中的抗体结合的巴比妥类药(BAR)，抗巴比妥类药(BAR)单抗金标探针就会与试验线上的巴比妥类药(BAR)合成免疫原发生特异结合，使胶体金滞留于试验线上，这就是免疫竞争法原理。所以试验线的颜色深浅与样品中巴比妥类药(BAR)含量高低成反比。设定界限值为300ng/ml，出现两条红线代表尿样中BAR低于300ng/ml，为阴性；出现一条红线表示尿样中BAR超过界限值300ng/ml，为阳性。
当移动至抗鼠多克隆抗体控制线时，无论样品中巴比妥类药(BAR)含量多少，金标探针都会与已包被在硝酸纤维素膜上的鼠IgG结合滞留，使控制线显示红色。因此控制线无色带产生则代表操作有误(检测时，样品液面超过MAX线)或试纸已经过期。
在用试纸检测尿液后，将其试验线与检测色标进行比色，按颜色深浅判断为阳性、可疑或阴性，进而确定所测尿液中巴比妥类药(BAR)含量是否超标。用含巴比妥类药(BAR)对照品得尿液检测，设定最低检出量应不高于300ng/ml。
由于采用上述技术方案，本发明所提供的检测巴比妥类药(BAR)的试纸具有这样的有益效果，即特异性强，灵敏度高，易储存，无须专门技术人员操作，不需要仪器设备，而且结果易读。
图1为巴比妥类药(BAR)检测试纸的主视结构图。
图2为巴比妥类药(BAR)检测试纸的俯视剖视结构图。
图3为巴比妥类药(BAR)检测试纸应用于测试时显示为阳性结果图。
图4为巴比妥类药(BAR)检测试纸应用于测试时显示为阴性结果图。
具体实施方式
1.应用活化脂法，将半抗原巴比妥类药(BAR)结合牛血清白蛋白(BSA)制备巴比妥类药(BAR)合成免疫原。
2.抗巴比妥类药(BAR)单克隆抗体的制备。
(1)将制备的巴比妥类药(BAR)合成免疫原免疫小鼠。
(2)提取小鼠腹水，分离纯化以得到抗巴比妥类药(BAR)单克隆抗体。
3.胶体金的制备及与抗巴比妥类药(BAR)单克隆抗体的结合。
(1)10％氯化金(0.5ml)+10％柠檬酸三钠(0.75ml)+去离子水(500ml)→胶体金。
(2)胶体金500ml+0.1M磷酸缓冲液pH7.4(50ml)+抗巴比妥类药(BAR)单克隆抗体→抗巴比妥类药(BAR)单抗胶体金。
(3)抗巴比妥类药(BAR)单抗胶体金+吸水纸→金标记抗体吸附吸水纸上备用。
4.选择硝酸纤维素膜做为底物覆着处，利用毛细管原理使胶体金朝向底物处移动。
5.特种制膜机制膜机器特制，利用电脑控制传动速度，保证每单位膜上包被的抗体量相等。
控制线选用羊抗鼠IgG，浓度2-10mg/ml试验线选用巴比妥类药(BAR)合成免疫原，浓度2-10mg/ml6.组合(1)塑料条+薄膜+胶体金垫(2)切条7.使用方法(1)除去外包装，取出试剂条。将试剂条插入尿样中，尿液界面物超过纸条上的“MAX”线。如为试剂盒，则将尿液滴入样品孔中。
(2)15秒后取出试纸条或继续插在尿液中，5分钟时观察结果；如为试剂盒，则在5分钟后直接在观察孔中观察结果。
(3)结果判断仅在控制区出现一条红色线为阳性；如在检测区及控制区出现两条红色线，则为阴性。控制区未出现红色线，表面试纸无效。
8.注意事项(1)仅供定性筛检。
(2)稀释及不洁净的尿样或操作不当，均可产生错误结果。
(3)密封保存，在有效期12个月内使用。
权利要求1.一种快速检测巴比妥类药的胶体金试纸，其特征在于是由底板(7)、吸水板(1)、硝酸纤维素膜(2)、巴比妥类药单抗金标垫(5)、玻璃纤维样品吸液层(6)组成；底板中部为硝酸纤维素膜，硝酸纤维素膜上有一条试验线(4)和一条羊抗鼠多克隆抗体控制线(3)，底板一端端头为吸水板，另一端端头为样品吸液层，硝酸纤维素膜两端分别与吸水板和单克隆抗体金标垫相互交叠连接，在单克隆抗体金标垫上压有样品吸液层。
2.根据权利要求1所述的一种快速检测巴比妥类药的胶体金试纸，其特征在于控制线是由羊抗鼠多克隆抗体包被制成。
3.根据权利要求1所述的一种快速检测巴比妥类药的胶体金试纸，其特征在于试验线是由巴比妥类药合成免疫原包被制成。
4.根据权利要求1所述的一种快速检测巴比妥类药的胶体金试纸，其特征在于金标垫是由巴比妥类药单克隆抗体作为胶体金标记。
5.根据权利要求1所述的试纸条其特征在于吸水纸用双层吸水纸。
专利摘要本发明涉及一种快速检测巴比妥类药的胶体金试纸，属于胶体金免疫检测领域。试纸是由底板、吸水板、硝酸纤维素膜、单抗金标垫、玻璃纤维样品吸液层组成，是一种用于检测巴比妥类药(BAR)的试纸。底板中部为硝酸纤维素膜，硝酸纤维素膜上有巴比妥类药(BAR)合成免疫原试验线和一条多克隆抗体控制线，底板一端端头为吸水板，另一端端头为样品吸液层，硝酸纤维素膜两端分别与吸水板和单克隆抗体金标垫相互交叠连接，在单克隆抗体金标垫上压有样品吸液层，通过胶体金免疫竞争方法制成试纸。其原理是利用抗原抗体的特异结合反应和免疫层析技术，在试纸上出现特定的显色结果。具有灵敏度高，特异性强，重复性好，精确度高，操作简单，检测快速准确的特点，无须复杂的设备。
文档编号G01N33/544GK2935154SQ200620004308
公开日2007年8月15日 申请日期2006年2月22日 优先权日2006年2月22日
发明者万志静, 万志强 申请人:万华普曼生物工程有限公司