专利名称：：威灵仙药材中有效成分含量的测定方法
技术领域：
：本发明涉及了一种威灵仙药材中有效成分含量的测定方法，尤其是涉及一种威灵仙药材中齐墩果酸、常春藤皂苷元含量的测定方法。
背景技术：
：威灵仙为毛茛科植物威灵仙ClematischinensisOsbeck、棉团铁线莲ClematishexapetaaPalI.或东北铁线莲ClematismanshuricaRupr.的干燥根及根茎。味辛咸，性温。有祛风除湿、通络止痛之功，用于风湿痹痛，肢体麻木，筋脉拘挛，屈伸不利，骨哽咽喉。威灵仙药材中化学成分较为复杂。现代植物化学和药理学研究表明，齐墩果酸及常春藤皂苷元为其多种药理作用的活性成分它的含量威灵仙药材中齐墩果酸、常春藤皂苷元的含量是确定威灵仙药材质量标准的重要参数，但目前尚未有一种准确地测定威灵仙药材中齐墩果酸、常春藤皂苷元含量的测定方法。
发明内容本发明的目的在于提供一种准确测定威灵仙药材中有效成分含量的测定方法，该方法主要是测定齐墩果酸、常春藤皂苷元的含量。本发明的目的是通过以下技术方案来实现一种威灵仙药材中有效成分含量的测定方法，主要步骤如下-(1)对照品溶液的制备(2)供试品溶液的制备(3)分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，采用蒸发光散射检测器进行测定，然后获到齐墩果酸、常春藤皂苷元两种有效成分的含量；色谱条件为-以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水-冰醋酸-三乙胺为流动相，各溶剂之间的体积比为8095:520:0.010.1:0.010.1;理论板数按齐墩果酸计算不低于2000。所述步骤(3)中的流动相甲醇-水-冰醋酸-三乙胺的各溶剂间的体积比为85:15:0.05:0,03。所述步骤(3)中采用外标两点法对数方程计算齐墩果酸、常春藤皂苷元含量。所述步骤(l)的具体方法为精密称取齐墩果酸对照品、常春藤皂苷元对照品，加甲醇制成齐墩果酸、常春藤皂苷元浓度均为lml/mg的混合溶液，即为对照品溶液。所述步骤(2)的具体方法为精密称定威灵仙药材粉末，按料液重量体积比1:1050加入甲醇，超声处理2030分钟，滤过，残渣用甲醇洗涤，合并滤液与洗液，回收溶剂至干，残渣加水溶解，用饱和正丁醇振摇提取24次，每次l(K30ml，合并提取液，蒸干，残渣加甲醇1030ml、盐酸l3ml，加热水解35小时，水解物加水稀释，用三氯甲烷振摇提取24次，每次1030ml，合并提取液，回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解并转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得到供试品溶液。本发明公开测定方法操作简单，只需测定威灵仙药材中齐墩果酸、常春藤皂苷元的特征峰面积后通过外标两点法对数方程计算即可准确得出威灵仙药材中齐墩果酸、常春藤皂苷元的含量。具体实施方式以下实施例仅用于阐述本发明，而本发明的保护范围并非仅仅局限于以下实施例。所述
技术领域：
的普通技术人员依据以上本发明公开的内容，均可实现本发明的目的。实施例一(1)对照品溶液的制备精密称取齐墩果酸对照品、常春藤皂苷元对照品适量，加甲醇制成齐墩果酸、常春藤皂苷元浓度均为lml/mg的混合溶液，即为对照品溶液；(2)供试品溶液的制备取威灵仙药材粉末2g，精密称定，加甲醇50ml，超声处理30分钟，滤过，残渣用甲醇适量洗涤，合并滤液与洗液，回收溶剂至干，残渣加10ml水溶解，用饱和正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并提取液，蒸干，残渣加甲醇20ml、盐酸2ml，加热水解4小时，水解物加水10ml，用三氯甲垸振摇提取2次，每次20ml，合并提取液，回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解并转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得到供试品溶液；(3)精密吸取对照品溶液5^1、10^1，供试品溶液10pl，注入waters2695-2420高效液相色谱仪，采用蒸发光散射检测器进行测定得到对照品和供试品溶液中齐墩果酸、常春藤皂苷元的特征峰面积，并根据外标两点法对数方程计算得出威灵仙样品中齐墩果酸、常春藤皂苷元的含量，结果见表l。色谱条件为以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水-冰醋酸-三乙胺为流动相，它们之间的体积比为85:15:0.05:0.03，蒸发光散射检测器，理论板数按齐墩果酸计算不低于2000。回归方程常春藤皂苷元Y=0.0748X+6.6867齐墩果酸Y-0.0829X+6.4278表1:<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>实施例二与实施例一不同的是步骤(2)供试品溶液的制备取威灵仙药材粉末2g，精密称定，加甲醇20ml，超声处理20分钟，滤过，残渣用甲醇适量洗涤，合并滤液与洗液，回收溶剂至干，残渣加10ml水溶解，用饱和正丁醇振摇提取2次，每次10ml，合并提取液，蒸干，残渣加甲醇10ml、盐酸lml，加热水解4小时，水解物加水10ml，用三氯甲烷振摇提取3次，每次10ml，合并提取液，回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解并转'移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得到供试品溶液；(3)精密吸取对照品溶液5^1、10pl，供试品溶液10nl，注入waters2695-2420高效液相色谱仪，采用蒸发光散射检测器进行测定得到对照品和供试品溶液中齐墩果酸、常春藤皂苷元的特征峰面积，并根据外标两点法对数方程计算得出威灵仙样品中齐墩果酸、常春藤皂苷元的含量，结果见表2。色谱条件为以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水-冰醋酸-三乙胺为流动相，它们之间的体积比为80:20:0.02:0.01，蒸发光散射检测器，理论板数按齐墩果酸计算不低于2000。回归方程常春藤皂苷元Y=0.0791X+6.7115齐墩果酸Y-0.0721X+6.5771表2:<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>实施例三-与实施例一不同的是步骤(2)供试品溶液的制备取威灵仙药材粉末2g，精密称定，加甲醇100ml，超声处理25分钟，滤过，残渣用甲醇适量洗涤，合并滤液与洗液，回收溶剂至干，残渣加10ml水溶解，用饱和正丁醇振摇提取4次，每次30ml，合并提取液，蒸千，残渣加甲醇30ml、盐酸3ml，加热水解4小时，水解物加水10ml，用三氯甲烷振摇提取4次，每次30ml，合并提取液，回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解并转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得到供试品溶液；(3)精密吸取对照品溶液5^1、lOjil，供试品溶液1(^1，注入waters2695-2420高效液相色谱仪，采用蒸发光散射检测器进行测定得到对照品和供试品溶液中齐墩果酸、常春藤皂苷元的特征峰面积，并根据外标两点法对数方程计算得出威灵仙样品中齐墩果酸、常春藤皂苷元的含量，结果见表3。色谱条件为以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水-冰醋酸-三乙胺为流动相，它们之间的体积比为90:10:0.07:0.05，蒸发光散射检测器，理论板数按齐墩果酸计算不低于2000。回归方程常春藤皂苷元Y-0.0738X+6.6891齐墩果酸Y-0.0918X+6.3068表3:<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>权利要求1、一种威灵仙药材中有效成分含量的测定方法，其特征是，其主要步骤是(1)对照品溶液的制备；(2)供试品溶液的制备；(3)分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，采用蒸发光散射检测器进行测定，然后获到齐墩果酸、常春藤皂苷元两种有效成分的含量；色谱条件为以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水-冰醋酸-三乙胺为流动相，各溶剂间的体积比为80～95∶5～20∶0.01～0.1∶0.01～0.1；理论板数按齐墩果酸计算不低于2000。2、根据权利要求1所述的测定方法，其特征是，所述步骤(3)中的流动相甲醇-水-冰醋酸-三乙胺的各溶剂间的体积比为85:15:0.05:0.03。3、根据权利要求1所述的测定方法，其特征是，所述步骤(3)中采用外标两点法对数方程计算齐墩果酸、常春藤皂苷元含量。4、根据权利要求1所述的测定方法，其特征是，所述步骤(l)的具体操作步骤为精密称取齐墩果酸对照品、常春藤皂苷元对照品，加甲醇制成齐墩果酸、常春藤皂苷元浓度均为lml/mg的混合溶液，即为对照品溶液。5、根据权利要求1所述的测定方法，其特征是，所述步骤(2)的具体操作步骤为精密称定威灵仙药材粉末，以料液重量体积比1:1050加入甲醇，超声处理2030分钟，滤过，残渣用甲醇洗涤，合并滤液与洗液，回收溶剂至干，残渣加水溶解，用饱和正丁醇振摇提取24次，每次1030ml，合并提取液，蒸干，残渣加甲醇10~30ml、盐酸l3ml，加热水解35小时，水解物加水稀释，用三氯甲烷振摇提取24次，每次10~30ml，合并提取液，回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解并转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得到供试品溶液。全文摘要本发明公开了一种威灵仙药材中有效成分含量的测定方法，其主要步骤是(1)对照品溶液的制备；(2)供试品溶液的制备；(3)分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，采用蒸发光散射检测器进行测定，然后获到齐墩果酸、常春藤皂苷元两种有效成分的含量；色谱条件为以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水-冰醋酸-三乙胺为流动相，各溶剂间的体积比为80～95∶5～20∶0.01～0.1∶0.01～0.1；理论板数按齐墩果酸计算不低于2000。该方法操作简单，能够准确测出威灵仙药材中齐墩果酸、常春藤皂苷元的含量。文档编号G01N30/00GK101216462SQ20071003302公开日2008年7月9日申请日期2007年12月29日优先权日2007年12月29日发明者李卫民申请人:广州中医药大学科技产业园有限公司