专利名称：磺胺对甲氧嘧啶快速检测试纸条的制作方法
技术领域：
本实用新型涉及兽药残留免疫分析技术领域的一种快速检测器具，特别是涉及 以微球金胶颗粒标记抗体的磺胺对甲氧嘧啶胶体金快速检测试纸条。
背景技术：
磺胺对甲氧嘧啶(Sulfamethoxydiazine， SMD):别名为2-磺胺-5-甲氧嘧啶、长效 磺胺D、磺胺-5-甲氧嘧啶，在兽医临床是一种主要用以预防或治疗细菌性传染病的 广谱抗菌素。在渔业、畜牧业的生产过程中，为了控制某些动物性疾病，促进动物 的生长发育及其转化效率，提高畜禽和渔产品的产量， 一些生产者除将磺胺对甲氧 嘧啶作为亚治疗的抗菌素外，还将其掺入词料中作为添加剂，通过在日粮或饮水中 长期违规、过量使用，当人们食入这些含有磺胺对甲氧嘧啶的动物源性食品后，不 仅能诱发癌症和肾功能衰竭等系列毒害，还可引起耐药菌株的增加，严重危害人们 的身体健康(聂芳红，徐晓彬，陈进军。食品动物兽药残留的研究进展。中国农学 通报，2006，22(9):71-75)，因此导致动物源性食品的药物残留检测问题受到监测部 门的高度重视。目前，测定磺胺对甲氧嘧啶的方法主要有高效液相色谱法(HPLC)、气/质联用分 析法(GC/MS)、气相色谱法、薄层色谱法等等。上述这些方法由于其试验操作烦琐、 时间长，需要经过专业培训、有丰富经验的操作人员，所需的仪器设备也比较昂贵、 检测成本高，受限于实验室内进行，难于在基层普及与推广，更不适于现场、野外 的大规模快速检测。酶联免疫吸附测定法(ELISA)也是一种常用检测技术，ELISA既 可检测多个样品，也可定性、定量检测，但目前市场上尚无商品化的此试剂盒出售。 而且，ELISA需要一定操作经验的专业人员，其操作过程比较复杂，检测时间比较 长，不同人员操作往往会出现不同的检测结果，且须配套的酶标板阅读仪器，很难 实施现场检测。本实用新型的实用新型磺胺对甲氧嘧啶快速检测试纸条，无须专业操作人员及 任何辅助类仪器，根据反应所显现的条带儿分钟内即可进行结果判定，不仅操作简
便、快速、结果直观准确、投资少、成本低，易于在中小型企业、基层普及应用， 且填补了目前市场上残留药物磺胺对甲氧嘧啶检测试剂盒的空白。发明内容本实用新型的目的是提供一种磺胺对甲氧嘧啶快速检测试纸条，其检测简便快 捷，操作简单，不需要特定仪器设备辅助，且成本低，易于在中小型企业、基层普 及与推广应用，同时适于现场快速检测。本实用新型所述的一种磺胺对甲氧嘧啶快速检测试纸条，包括支撑固定粘衬层、 载体反应溶物吸附层，所述的支撑固定粘衬层上粘贴所述的载体反应溶物吸附层， 所述的载体反应溶物吸附层从样品端起到手柄接触端依次为样品吸附纤维层、用于 吸附待测磺胺对甲氧嘧啶药物的金标抗体溶液(Wi)纤维层、微孔虹吸反应层、吸水 材料层；载体反应溶物各吸附层之间相互交叠0.1cm;所述的微孔虹吸反应层包括在 距前端lcm处用于偶联磺胺对甲氧嘧啶的载体蛋白溶液(Xi)印制检测印迹"一"或 "I "的微孔虹吸反应层；以及在距底端lcm处用于对照印迹溶液(Yi)印制对照印迹 "一"或"I "的微孔虹吸反应层。金标抗体溶液(Wi)可采用含有pH 8.2, 20 mM Tris-HCL缓冲保护溶液的微球金胶 颗粒标记磺胺对甲氧嘧啶单克隆抗体或多克隆抗体复合物。偶联磺胺对甲氧嘧啶的 载体蛋白溶液(Xi)可采用含有pH7.2， 10mMPBS缓冲印迹溶液的载体蛋白与磺胺 对甲氧嘧啶结合的复合物，载体蛋白为牛血清白蛋白(BSA)、或为鸡卵清白蛋白 (OVA)，或为铁蛋白(FE)，或为血蓝蛋白(KLH)等。对照印迹溶液(Yi)可采用 含有pH 7.2， lOmMPBS山羊抗小鼠IgG或山羊抗兔IgG的缓冲印迹溶液。优选的是，所述的支撑固定粘衬层为硬质的不吸水塑胶片条或者硬质的不吸水 纸片条。优选的是，所述的样品吸附纤维层为玻璃棉或厚滤纸。优选的是，所述的微孔虹吸反应层为硝酸纤维素反应膜或者聚偏氟乙烯反应膜。 优选的是，所述的吸水材料层为强吸水纸。优选的是，所述的金标抗体溶液(Wi)纤维层为吸附有微球金胶颗粒标记磺胺对 甲氧嘧啶抗体复合溶液的玻璃棉，在样品吸附纤维层与金标抗体溶液(Wi)纤维层及 吸水材料层上覆盖有PVC保护膜，在样品吸附纤维层与金标抗体溶液(Wi)纤维层交 界处对应的PVC保护膜偏向玻璃棉一侧0.5cm处印制出标记线，如"Max"及"
标记线。优选的是,所述的微孔虹吸反应层上用载体蛋白溶液(Xi)印制检测印迹和用对照 印迹溶液(Yi)印制对照印迹组合为以下排列"+ ，，、 "11"、 " + "、 "丁"、"卜"、"丄" 或者""l "。本实用新型所述的磺胺对甲氧嘧啶快速检测试纸条具有以下优点 (l)特异性强，敏感性高。本实用新型所述的磺胺对甲氧嘧啶快速检测试纸条 是以微球金胶颗粒标记高亲和力的单克隆抗体或多克隆抗体为基础制备而成，金标 抗体中金颗粒与抗体通过异性电荷间的范德华力相结合，胶体金标记单克隆抗体或 多克隆抗体的特异性和亲和力影响很小，且具有较高的标记率。因此，快速检测试 纸条具有较高的特异性和敏感性。本实用新型制备的磺胺对甲氧嘧啶快速检测试纸 条产品可检测到IO ppb，且对磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺间 甲氧嘧啶、磺胺吡啶、克伦特罗、链霉素、氯霉素等药物检测无交叉反应性。(2) 操作简便、快速。使用快速检测试纸条时无需其它任何试剂，只要将其插入待检测样品中15秒左右取出，在3分钟内即可检测出结果。 '(3) 显示检测结果形象、直观准确。快速检测试纸条以显示红色或"II" 及"一"或"|"印迹作为检测的阴性和阳性标记，即在微孔虹吸反应层上显示两 条红色"="或"II"印迹表示被检测样品溶液中磺胺对甲氧嘧啶含量少于10ppb， 一条红色"—"或"I "印迹表示在被检测样品中磺胺对甲氧嘧啶的含量在IO ppb 以上，结果判定直观、准确、不易出现假阴性和假阳性误判。(4) 成本低、投资少。使用快速诊断试纸条，不需另配仪器设备，节约大量投 资，成本低，具有广阔的市场前景和较大的经济、社会效益。(5) 易于大范围推广应用。快速检测试纸操作简单，无须专业培训，按说明书 即可完成操作，易于普及，广泛适用于食品专业检验、海关检疫、卫生防疫、兽医 站、质量监测、畜产品加工、集约化养殖到个体养殖等各层次的需求。
图l:为磺胺对甲氧嘧啶快速检测试纸条结构示意图。图中，l为支撑固定粘衬 层；2为微孔虹吸反应层；3为金标抗体溶液(Wi)纤维层；4为样品吸附纤维层；5为 吸水材料层；81、 82均为PVC保护膜。图2:为磺胺对甲氧嘧啶快速检测试纸条俯视结构示意图。图中，6为检测印迹； 7为对照印迹；9为标记线。图3:为磺胺对甲氧嘧啶快速检测试纸条结果判定示意图。图中，A检测结果 判定为阴性；B检测结果判定为阳性；C、 D检测结果判定为试纸条无效。
具体实施方式
要制成磺胺对甲氧嘧啶快速检测试纸条，首先需制备偶联磺胺对甲氧嘧啶的载 体蛋白溶液(Xi)，用于印制检测印迹，进而制备磺胺对甲氧嘧啶的金标抗体，用于 金标抗体溶液(Wi)纤维层，其次需制备山羊抗小鼠IgG抗体或山羊抗兔IgG抗体的对 照印迹溶液(Yi)，用于印制对照印迹。下面结合具体实施例，进一步阐述本实用新 型。应理解，这些实施例仅用于说明本实用新型而不用于限制本实用新型的范围， 下列实施例中未提及的具体实验方法。通常按照常规实验方法进行，如现代免疫 学技术(湖北科学技术出版社)、蛋白实验技术指南、分子克隆等，或者按照制造厂 商所建议的条件或操作方法进行。 实施例材料(A) 磺胺对甲氧嘧啶，亚硝酸钠，叠氮钠，蔗糖，氯化钠，磷酸氢二钠，磷酸二 氢钾，三羟甲基氨基甲烷，十二垸基硫酸钠，盐酸，牛血清白蛋白(BSA)， 鸡卵清蛋白(OVA),铁蛋白(FE)，血蓝蛋白(KLH)， PEG，弗氏完全佐剂，弗 氏不完全佐剂均为SIGMA产品，HAT(次黄嘌呤、氨甲蝶呤和胸腺嘧啶核苷 T，简称为HAT培养基)及HT均为GIBCO产品。(B) SPF级实验动物雌性BALB/C小鼠，6-8周龄，购自广州中医药大学；山羊， 12周龄，雌性新西兰大白兔，购置广东省医学实验动物中心。(C) 硝酸纤维素反应膜美国密理博(Millipore)公司生产，型号Hi-FlowPlus HF1賺405(D) 玻璃棉上海金标生物技术有限公司，型号SB06(E) 吸水纸美国密理博(Millipore)公司生产，规格AP22(F) 纸片条上海金标生物技术有限公司实施例一(制备实施例)1.偶联磺胺对甲氧嘧啶的载体蛋白溶液(Xi)的制备(1)采用重氮偶合反应，以500 nL 0.25 mol/L的H2S(V溶解10 mg磺胺对甲氧嘧啶，
取200 (aL 2% NaN02溶液缓慢滴入上述溶液，4'C反应10 min。(2) 磁力撹拌条件下，将所得的混合液滴入2mL事先分别加入牛血清白蛋白(BSA)、鸡卵清蛋白(OVA)、铁蛋白(FE)、血蓝蛋白(KLH)溶液中，用l mol/LNaOH调pH值到9.5, 4'C缓慢搅拌过夜，形成以偶氮键相联的四种连接产物。(3) 得到的四种连接产物分别装入透析袋，用10mMpH7.4的磷酸缓冲液透析三天， 每天换2次，以去除游离未结合的磺胺对甲氧嘧啶小分子后，置于冷冻干燥仪中 抽干，分装后于-8(TC保存备用。(4) 另将步骤(3)抽干的四种连接产物分别称取1.5mg，用含有pH7.2， lOmMPBS 缓冲印迹溶液(含0.P/。SDS， 0.1%NaN3， 0.1% Tween 20)充分溶解，即为磺 胺对甲氧嘧啶与载体蛋白偶联复合溶液(Xi)，分别为SMD-BSA、 SMD-OVA、 SMD-FE、 SMD-KLH的偶联复合溶液，-2(TC保存以备用于微孔虹吸反应层上的 印制检测印迹。2. 磺胺对甲氧嘧啶多克隆抗体的制备采用新西兰大白兔作为免疫动物，以上述合成的磺胺对甲氧嘧啶与载体蛋白 偶联复合物为免疫原，免疫剂量为0.5mg/只。首免时将免疫原与等量的弗氏完全 佐剂混合制成乳化剂，颈背部皮下多点注射，间隔3周取相同剂量免疫原加等量 弗氏不完全佐剂混合乳化加强免疫.总共免疫6次，免疫期间监测血清抗体效价 及特异性。最后一次免疫不加佐剂，于免疫后7 10天后颈动脉放血，收集兔血 清，37。C放置2h，再置于4 °C 2h后4000rmp离心收获上清，通过间接ELISA 方法检测其效价，结果表明，抗体血清效价为5xl06，与其他抗生素交叉反应率 均小于0.01%。3. 磺胺对甲氧嘧啶单克隆抗体的制备(1)动物免疫免疫5只雌性Balb/C小鼠，另取5只做阴性对照。每次免疫以50吗/只磺胺 对甲氧嘧使与载体蛋白偶联复合物的剂量免疫小鼠。免疫程序采用两次基础免疫及三次加强免疫，将免疫抗原用生理盐水稀释， 第一次免疫用弗氏完全佐剂乳化的抗原注射于小鼠的颈背部皮下(多点)或腹腔 内，第二次免疫取用弗氏不完全佐剂乳化好的抗原注射于小鼠的颈背部皮下(多 点)或腹腔内，以后几次加强免疫同上述第二次免疫，最后一次加强免疫时取不 加佐剂抗原尾静脉或腹腔内注射。每次加强免疫后第8 d尾部采血，分离血清，
用间接ELISA实验来检测抗血清的效价，选择高效价血清的Balb/C小鼠，取其 脾细胞进行细胞融合。(2)杂交瘤细胞系的建立细胞融合步骤提前制备小鼠饲养细胞层，步骤为颈椎脱臼法将Balb/C小鼠 处死，用眼科剪刀剪开腹部皮肤，利用一次性注射器将不完全1640培养液注入小 鼠腹腔内，反复抽吸几次，最后将注入的液体全部吸出，放入50 ml离心管中， 3000 rmp离心10 min，用HAT培养液悬浮沉淀，混匀后以100 ^L/孔铺入细胞培 养板中。融合的具体方法将SP2/0骨髓瘤细胞与前述免疫小鼠脾细胞以1 : 5的 细胞个数，在50mL离心管中混匀，1000 r/min，离心10 min，弃上清(可用灭 菌的滤纸吸干)；将装有细胞混合物的离心管放于37"C水浴中。然后在1 min内慢 慢滴入预温至37'C的50% PEG 1 mL，边加边轻轻用吸管尖搅拌；继续搅拌30 sec 后，静置lmin;然后慢慢加入37'C预温的RPMI-1640基础培养液10mL。具体 方法第1 min逐滴滴人1 mL。第2min力QlmL，第3~4 min力B 3 mL，第5 min 加其余的5 mL，每次加时需缓慢加入，并不断轻轻搅拌。最后缓慢加入30 mL 1640 基础培养液，1000rmp离心7min，去上清，于37。C放置5min;用HAT完全培 养基悬浮，同时也用HAT培养基悬浮饲养脾细胞，与融合后的细胞混合，根据需 要补加适量的HAT，接种于96孔培养板中，约200 ^L/孔，然后置于37 °C ， 5% C02 培养箱中培养。杂交瘤细胞系的建立提前制备饲养细胞(方法同上)，再将杂交瘤细胞从培 养孔内轻轻地吹下，用血细胞计数板对活细胞进行计数；将细胞用1640完全培养 基分别稀释到5、 10、 50个细胞/毫升，将上述三个浓度的细胞悬液分别加入已制 备好饲养细胞的96孔培养板中，100 pL/孔，使相应的孔平均分别含有0.5、 l和 5个细胞；培养第4天可换液一次，从第5 6天仔细观察各孔内细胞的生长情况， 并记录；在克隆后第7 9d，细胞克隆长满培养孔l/3 l/2时，即可用间接竞争法 去进行抗体特异性的检测，如检出特异性抗体阳性孔，可选择抗体效价高、呈单 个克隆生长、生长状况良好的细胞，继续进行再克隆。将阳性孔的细胞可移至24 孔培养板，并在相对应的原孔中补加新鲜培养基，以防二者同时污染或细胞死亡， 待24孔板中的细胞生长良好时，可转至lOOmL细胞培养瓶中培养，并及时冻存。动物体内诱生腹水的方法制备腹水，在接种杂交瘤细胞前1 2周，先给 Balb/C小鼠腹腔注射0.5 mL液体石蜡或弗氏不完全佐剂；将克隆成功的杂交瘤细
胞1000rmp离心，弃上清，细胞用1640基础培养液悬浮，并将细胞数调至lx106 个/mL，每只小鼠腹腔注射0.5mL杂交瘤细胞悬液；接种杂交瘤细胞后约10 d， 可见小鼠腹部明显膨大，此时用碘酒、酒精棉球对小鼠腹部皮肤消毒后，用5ml 注射器抽取腹水；将腹水于4'C 1000rmp离心10min，取上清，分装后置-20。C保 存。(3)单抗的纯化腹水的纯化取上述制备的腹水3ml，加入0.06 mol/LpH 4.8的醋酸缓冲液 6 ml，混匀后在室温下边搅拌边加入99 pL辛酸，持续搅拌30 min，然后置于4 °C 静止2 h以上。将溶液4 'CIOOO rpm离心30 min，取上清，用2 mol/L的NaOH 调节pH值至7.4，向上清溶液中边搅拌边加入等体积的饱和硫酸铵溶液，30min 后，4。C静止2h以上。10000 rpm离心30 min，取沉淀溶于5 mLPBS (10 mM/L， pH7.4)中，混匀后置入0.01 mol/L的PBS中透析，4 。C透析两曰，其中8 h换一 次液，两日后取出透析袋中的溶液，收集的液体，经紫外分光光度计测定其蛋白 含量后，按5 mg/mL分装冻存于-8(TC保存。4. 山羊抗小鼠IgG或山羊抗兔IgG对照印迹溶液(Yi)的制备 以饱和硫酸铵盐析法分别提取纯化小鼠和健康家兔的血清IgG，后用pH7.2 10mM PBS缓冲液置于4"C冰箱内过夜透析两天，每天换液2次，以紫外分光光度计 测定其蛋白浓度，取小鼠血清IgG和兔血清IgG以50 ug - 100 ug/kg计算经皮下和 肌肉注射免疫健康山羊3-4次，末次免疫7-IO天后静脉采血，以ELISA酶联免 疫法测定其血清抗体效价在1:5000以上，颈动脉放血收集血清。以饱和硫酸铵盐析 法纯化山羊抗小鼠IgG和山羊抗兔IgG抗体，后置于冷冻干燥仪抽干，分装冻存于 -20°(:备用。5. 金标抗体溶液(Wi)及金标抗体溶液(Wi)玻璃棉的制备微球金胶颗粒采用柠檬酸三钠化学还原法进行合成，&卩0.01%氯金酸水溶液250 ml在磁力加热搅拌器中加热沸腾后，迅速一次性加入iy。柠檬酸三钠溶液4ml，溶液 颜色即变黑且渐向紫红色转变，直至颜色保持不变l min后，即制得颗粒大小为35-40 nm左右的微球金胶溶液。与抗体标记前以0.5 mol/L K2C03调金胶溶液pH值至8.2左 右，采用经典NaCl滴定法确定金胶溶液与磺胺对甲氧嘧啶抗体的最佳标记量为lO pg/ml，抗体可为磺胺对甲氧嘧啶单克隆抗体,或为磺胺对甲氧嘧咬多克隆抗体。然 后按最佳抗体标记量进行标记，10 min后，加10% BSA至终浓度1 %，充分混匀静置10min， 4°C 12000 rpm离心25 min，弃上清以除去未结合的微球金胶颗粒，沉淀用 pH 8.2， 20 mM Tris-HCL缓冲保护溶液(配制Tris 3.0285 g， HCL 0.35 ml， BSA 10 g， 蔗糖50 g， NaN32g， PEG2000 2 g,去离子水900 ml，用lMNaOH调pH至8.2后 加补去离子水至1000mL)进行重悬，即获得金标抗体溶液(Wi)。将金标抗体溶液(Wi) 平铺于纤维玻璃棉上，用涂布棒来回均匀分布，制得磺胺对甲氧嘧啶金标抗体溶液 (Wi)纤维玻璃棉，真空低温冷冻干燥，铝铂封装备用。6. 纤维层玻璃棉的处理将玻璃棉浸泡于0.01M pH7.4磷酸缓冲液(含P/。BSA， 0.1% PVP K-30， 0.2% NaN3)中30min后，置于37。C烘干备用。7. 微孔虹吸反应层的包被分别称取山羊抗小鼠IgG和山羊抗兔IgG抗体1.5mg，用pH7.2， 10mMPBS 缓冲印迹溶液(配制SDSlg， Tween20 1ml， NaN3 1 g，磷酸氢二钠2.9g，磷酸 二氢钾0.2 g，氯化钠8 g，氯化钾0.2 g，去离子水900 ml，用1 M NaOH调pH至 7.2后加补去离子水至1000 mL)充分溶解，在距底端1 cm处的微孔虹吸反应层上 印制0.05 cm宽的对照印迹，在距底端1.5 cm处的微孔虹吸反应层上用偶联磺胺对 甲氧嘧啶的载体蛋白溶液(Xi)印制0.05 cm宽的检测印迹，两印迹之间的距离为5 mm，于冷冻干燥仪抽干，铝铂袋封装备用。8. 试纸条的组装将支撑固定粘衬层l、微孔虹吸反应层2、金标抗体溶液(Wi)纤维层3、样品吸附 纤维层4、吸水材料层5、 PVC保护层81和82按图l所示的顺序相互交叠0.1cm依次粘 贴在支撑固定粘衬层片条上，切成3mm宽的小条，真空铝铂袋封装，4-3(TC保存， 有效期10个月。 实施例二 (应用实施例)1.检测样品液的制备1) 蜂蜜检测样品溶液的预处理称取2g待检蜂蜜于离心管中；若检测蜂王浆，则需再加入1 ml蒸馏水振荡溶 解样品，于离心管中加入2ml乙酸乙酯；剧烈振荡5 8min后，移取上清0.9 ml 于试管中，在55t:下氮气吹干或用电吹风吹干。加入0.3ml 10mMPBS，振荡溶解管底残留，待检。2) 组织(水产品、畜产品)检测样品溶液的预处理取切碎的组织样本，于均质机中均质nOOOOrpm/min) 1 min，称取5 g均质物
置于50 ml离心管中，加入大约5 ml蒸馏水和10 ml乙酸乙酯；充分振荡大约10 min 后，移取上清4ml于试管中，55"C下氮气吹千，用1 mOmMPBS溶解残留物， 加入正己烷lml，振荡lmin，静置分层，吸取至少100 pL下层溶液待检。3)牛奶检测样品溶液的预处理牛奶样品经3500 rpm离心10 min后，吸取中层牛奶3 ml加入6 ml乙酸乙酯上下 振荡IO min，室温2000 g离心10 min，取2 ml上层液体用氮气吹干，用1 m110 mM PBS 缓冲液溶解残留物，待检。2.检测及结果判定如图2、图3所示将磺胺对甲氧嘧啶检测试纸条样品端插入以上预处理的各待检测样品溶液中，插入深度不超过标记线9，待检溶液经玻璃棉7吸附滤过金标抗体 溶液(Wi)纤维玻璃棉3，与微球金胶颗粒标记的磺胺对甲氧嘧啶抗体结合形成复合 物，通过虹吸作用一起向微孔虹吸反应层2移动，若待检样品溶液中磺胺对甲氧嘧啶 含量在IO ppb以上，则阻止金标抗体与微孔虹吸反应层上偶联磺胺对甲氧嘧啶的载 体蛋白溶液(Xi)的检测印迹6结合，在检测印迹6处不能显示红色条带，而对照印迹7 含山羊抗小鼠IgG抗体或山羊抗兔IgG抗体则可与金标抗体结合，形成红色对照条带 印迹7" I "，结果判定为阳性(B);反之样品溶液中磺胺对甲氧嘧啶含量低于10ppb， 则不能阻止金标抗体与微孔虹吸反应层上偶联磺胺对甲氧嘧啶的载体蛋白溶液(Xi) 的检测印迹6结合，显示红色检测印迹"l"，同样山羊抗小鼠IgG抗体或为山羊抗 兔IgG抗体可与金标抗体结合，显示红色对照条带印迹"I "，形成两条红色印迹"ll"， 结果判定为阴性(A);若质控线印迹上没有红色条带出现，则该检测试纸条(C、 D) 无效。实施例三(应用实施例)1. 特异性试验按实施例二所述的方法进行试验，将磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺二甲氧瞎 啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺吡啶、克伦特罗、链霉素、氯霉素等药物浓度稀释为500 ppb，用本实用新型试纸条进行样品检测，微孔虹吸反应层上检测印迹6及对照印迹 7呈"II" (A)排列，结果为阴性，即为磺胺对甲氧嘧啶检测试纸条与磺胺啼啶、磺 胺二甲嘧啶、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺吡啶、克伦特罗、链霉素、 氯霉素等药物无交叉性反应。2. 敏感性试验
用实施例二所述的方法，用本实用新型检测试纸条分别检测0 ppb、 5ppb、 8 ppb、 10ppb、 20ppb、 40ppb的磺胺对甲氧嘧啶标准品，重复10次，其中10ppb、 20ppb、 40ppb标准品检测的微孔虹吸反应层对照印迹7上出现一条出现红色"I " (B)，即为阳性；Oppb、 5ppb、 8ppb的磺胺对甲氧嘧啶标准品检测的微孔虹吸反 应层2上的检测印迹6与对照印迹7呈红色"II" (A)排列，即为阴性。因此本实 用新型检测试纸条的灵敏度为10ppb。3.均一性试验用本实用新型检测试纸条按实施例二所述的方法，对0ppb， 10ppb磺胺对甲氧 嘧啶分别进行10次平行检测，反应时间3 min时观察结果，0 ppb检测印迹条带和 对照印迹红色条带均显现，10ppb则显示单一对照印迹红色条带，检测显色深度均 一，反应结果一致。4.稳定性实验将铝铂袋真空包装完好的试纸条置于37T:进行破坏性实验，时间为30天，各 项指标均符合以上l-3项指标，即检测其它药物无交叉性反应，灵敏度达10ppb， 检测显色深度均一，反应结果一致。
权利要求1、一种磺胺对甲氧嘧啶快速检测试纸条，包括支撑固定粘衬层、载体反应溶物吸附层，所述的支撑固定粘衬层上粘贴所述的载体反应溶物吸附层，其特征在于所述的载体反应溶物吸附层从样品端起到手柄接触端依次为样品吸附纤维层、用于吸附待测磺胺对甲氧嘧啶药物的金标抗体溶液纤维层、微孔虹吸反应层、吸水材料层；载体反应溶物各吸附层之间相互交叠0.1cm；所述的微孔虹吸反应层包括在距前端1cm处用于偶联磺胺对甲氧嘧啶的载体蛋白溶液印制检测印迹“-”或“｜”的微孔虹吸反应层；以及在距底端1cm处用于对照印迹溶液印制对照印迹“-”或“｜”的微孔虹吸反应层。
2、 根据权利要求l所述的检测试纸条，其特征在于所述的支撑固定粘衬层为硬质的不吸水塑胶片条或者硬质的不吸水纸片条。
3、 根据权利要求l所述的检测试纸条，其特征在于所述的样品吸附纤维层为玻璃棉或厚滤纸。
4、 根据权利要求l所述的检测试纸条，其特征在于所述的微孔虹吸反应层为硝酸纤维素反应膜或者聚偏氟乙烯反应膜。
5、 根据权利要求l所述的检测试纸条，其特征在于所述的吸水材料层为强吸 水纸。
6、 根据权利要求l所述的检测试纸条，其特征在于所述的金标抗体溶液纤维 层为吸附微球金胶颗粒标记磺胺对甲氧嘧啶单克隆抗体或多克隆抗体复合溶液的玻 璃棉，在样品吸附纤维层与金标抗体溶液纤维层及吸水材料层上覆盖有PVC保护膜，在样品吸附纤维层与金标抗体溶液纤维层交界处对应的PVC保护膜偏向玻璃棉一侧 0.5cm处印制出标记线。
7、 根据权利要求l所述的检测试纸条，其特征在于所述的微孔虹吸反应层上 用载体蛋白溶液印制检测印迹和用对照印迹溶液印制对照印迹组合为以F排列"+ "、 "ir'、 " + "、 "t"、"卜"、"丄"或者"。
专利摘要本实用新型属于兽药残留免疫分析技术领域，涉及以微球金胶颗粒标记抗体的磺胺对甲氧嘧啶胶体金快速检测试纸条。所述的试纸条包括支撑固定粘衬层、载体反应溶物吸附层，所述的支撑固定粘衬层上粘贴所述的载体反应溶物吸附层，所述的载体反应溶物吸附层从样品端起到手柄接触端依次为样品吸附纤维层、用于吸附待测磺胺对甲氧嘧啶药物的金标抗体溶液纤维层、微孔虹吸反应层、吸水材料层；载体反应溶物各吸附层之间相互交叠0.1cm；所述的微孔虹吸反应层包括在距前端1cm处用于偶联磺胺对甲氧嘧啶的载体蛋白溶液印制检测印迹“—”或“丨”的微孔虹吸反应层；以及在距底端1cm处用于对照印迹溶液印制对照印迹“—”或“丨”的微孔虹吸反应层。
文档编号G01N33/558GK201016977SQ200720048998
公开日2008年2月6日 申请日期2007年3月2日 优先权日2007年3月2日
发明者何文智, 张惠勇, 曾令文, 想 李, 宇 程, 陈巧林, 静 雷, 高爱中 申请人:中国科学院广州生物医药与健康研究院