专利名称：盐酸多塞平含量的检测方法
技术领域：
本发明属于检测技术领域，具体涉及一种盐酸多塞平含量的检测方法。
背景技术：
盐酸多塞平(dox印in hydrochloride)为H1J2受体拮抗剂，是顺(Z_)、反(E_)异构体混合物，属3环类抗抑郁药，具有抗焦虑、抗抑郁、抗抽搐及镇静眠作用，用于治疗焦虑性抑郁症或神经症性抑郁症。盐酸多塞平口服吸收好，生物利用度为13 45%，主要在肝脏代谢，活性代谢产物为去甲基化物，代谢物质由肾脏排泄。在临床应用和司法实践中，误服或自服超量致中毒事件时有发生，快速准确的检测对于中毒者的抢救及中毒案件的侦破具有重要意义。张晨华等在《反相高效液相色谱法测定盐酸多塞平片的含量》一文O007) 披露了测定盐酸多塞平含量的方法，但是该方法中盐酸多塞平的浓度在10 40μ g/ml的范围内呈良好的线性关系，测量的灵敏度较低，难以满足临床应用，尤其难以满足司法实现中的检测要求。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术中盐酸多塞平含量的检测方法灵敏度过低，难以满足临床及司法实践要求的技术问题。本发明的盐酸多塞平含量的检测方法包括如下步骤步骤一，将样品预处理，加入内标，调节pH值为碱性，之后加入有机溶剂萃取，震荡后离心，得溶液；步骤二，将溶液水浴浓缩至干，得残渣，无水乙醇溶解，得进样液体；步骤三，利用气相色谱-质谱联用仪检测进样液体，采用提取离子法检测，内标法定量，根据标准曲线得出盐酸多塞平的含量。优选地，步骤一中，所述有机溶剂选自乙酸乙酯、氯仿、苯、氯仿及乙醚的混合液或乙醚。优选地，所述有机溶剂为乙酸乙酯。优选地，步骤一中，所述内标为盐酸丙基解痉素。优选地，步骤一中，所述PH值为12。优选地，步骤二中，所述水浴为80°C下水浴。优选地，步骤三中，所述检测进样液体的条件为柱流量1. Oml/min，柱温初始温度为100°C，以20°C /min升温至200V，保持2min，再以10°C /min升温至260°C ；又以20°C / min升温至280°C，保持Imin ；载气高纯氦气；进样口温度280°C;进样方式不分流进样， 进样量为1 μ 1 ；GC/MS接口温度为280°C ；EI源为70eV，EM电压为153V。优选地，步骤三中，得到所述标准曲线包括如下步骤取盐酸多塞平标准溶液，用无水乙醇配制成0、2. 5、5、10、20、50、100μβ/πι1浓度的工作液，每样中均含盐酸丙基解痉素30 μ g/ml，然后利用气相色谱-质谱联用仪以SIM方式进样进行分析，提取离子为盐酸丙基解痉素_86、99、558、44，盐酸多塞平为_58、59、165、178 ；采用内标定法定量，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线。优选地，所述盐酸多塞平标准溶液为将盐酸多塞平纯品溶于无水乙醇中而得，浓度为 lmg/ml0本发明具有如下的有益效果(1)本发明的方法检测灵敏度搞，最小检测量低于ng级；(2)本发明的方法仅使用少量的检材即可实现检测，在司法检测具有非常强的实用性；(3)本发明的方法在处理样品时加入了有机溶剂，能够有效防止乳化现象，最大限度地避免了检测中盐酸多塞平的丢失；(4)本发明的方法杂质干扰较小，不需要净化的步骤，排出了吸附剂对盐酸多塞平的吸附作用，由于减少了溶剂使用量，降低了检测成本，缩短了检测时间。
具体实施例方式以下结合具体实施例，对本发明作进一步说明。应理解，以下实施例仅用于说明本发明而非用于限定本发明的范围。以下实施例中涉及的气相色谱-质谱联用仪购于安捷伦科技公司，型号为5973N ；盐酸多塞平纯品购于中国药品生物制品检定所，批号为10069-200602 ；盐酸多塞平片购于上海信谊九福药业有限公司；盐酸丙基解痉素(SKF525a)购于公安部第二研究所；其他试剂均为分析纯。实施例1实施例1尿液中盐酸多塞平含量的检测1、制备样品的乙酸乙酯溶液取健康家兔10只，体重均为2. 6Kg左右，灌服盐酸多塞平50mg，5h后将家兔处死， 各取尿液Iml，重复4次，分别置于IOml离心管中，每个样品中加入内标(SKF525a) 3 μ g，之后加入氢氧化钠调节样品溶液的PH值为12，之后加入乙酸乙酯^il，震荡5min后，再4000rpm 离心5min，重复操作3次，得样品的乙酸乙酯溶液。2、制备进样液体将样品的乙酸乙酯溶液于80°C下水浴浓缩至干，得残渣，最后用IOOml的无水乙醇溶解残渣，得进样液体。3、测定样品中盐酸多塞平的含量标准曲线包括如下步骤取盐酸多塞平标准溶液，用无水乙醇配制成0、2.5、5、 10、20、50、100 μ g/ml浓度的工作液，每样中均含盐酸丙基解痉素30 μ g/ml，然后利用气相色谱-质谱联用仪以SIM方式进样进行分析，提取离子为盐酸丙基解痉素_86、99、558、 44，盐酸多塞平为-58、59、165、178 ；盐酸丙基解痉素的保留时间为13. 189分钟，盐酸多塞平顺式异构体的保留时间为12. 267分钟，反式异构体的保留时间为12. 519分钟；采用内标定法定量，以峰面积A为纵坐标，浓度C为横坐标绘制标准曲线，其回归方程盐酸多塞平顺式异构体为 A = 1. 67e-001XC+3. 76e_003，r2 = 1. 000 (η = 7)，反式异构体为 A =6. 58e-001XC+7. 13e_003，r2 = 1. 000 (η = 7)，盐酸多塞平在 2. 5 IOOng 范围内线性关
系良好。利用气相色谱-质谱联用仪检测进样液体，进样的条件为柱流量1. Oml/min,柱温初始温度为100°c，以20°C /min升温至200°C，保持2min，再以10°C /min升温至260°C ； 又以20°C /min升温至280°C，保持Imin ；载气高纯氦气；进样口温度280°C ；进样方式 不分流进样，进样量为1 μ 1 ；GC/MS接口温度为280°C ；EI源为70eV，EM电压为153V。根据色谱分析的结果，根据标准工作曲线计算，得尿中的平均含量为1. 42μ g/ml。实施例2肝脏组织盐酸多塞平含量的检测本实施例的步骤同实施例1，所不同之处在于步骤1，本实施例为制备样品的氯仿溶液，包括如下步骤取健康家兔10只，体重均为2. 5Kg左右，灌服盐酸多塞平50mg， 证后将家兔处死，各取肝脏组织lg，勻浆，分别置于IOml离心管中，每个样品中加入内标 (SKF525a) 3 μ g，之后加入氢氧化钠调节样品溶液的pH值为10，之后加入氯仿細1，震荡5min 后，再4000rpm离心5min，重复操作3次，得样品的乙酸乙酯溶液。根据色谱分析的结果，根据标准工作曲线计算，得尿中的平均含量为6. 39 μ g/ml。实施例3胃壁中盐酸多塞平含量的检测本实施例的步骤同实施例1，所不同之处在于步骤1，本实施例为制备样品的苯溶液，包括如下步骤取健康家兔10只，体重均为2. 5Kg左右，灌服盐酸多塞平50mg，5h后将家兔处死，各取胃壁lg，剪碎，分别置于IOml离心管中，每个样品中加入内标(SKF525a) 3 μ g， 之后加入氢氧化钠调节样品溶液的PH值为9，之后加入苯細1，震荡5min后，再4000rpm离心5min，重复操作3次，得样品的苯溶液。根据色谱分析的结果，根据标准工作曲线计算，得尿中的平均含量为5. 50 μ g/ml。综上所述，本发明的方法检测灵敏度搞，最小检测量低于ng级，仅使用少量的检材即可实现检测，同时本发明的方法检测成本低，检测时间短。
权利要求
1.一种盐酸多塞平含量的检测方法，其特征在于，包括如下步骤步骤一，将样品预处理，加入内标，调节PH值为碱性，之后加入有机溶剂萃取，震荡后离心，得溶液；步骤二，将溶液水浴浓缩至干，得残渣，无水乙醇溶解，得进样液体；步骤三，利用气相色谱-质谱联用仪检测进样液体，采用提取离子法检测，内标法定量，根据标准曲线得出盐酸多塞平的含量。
2.如权利要求1所述的盐酸多塞平含量的检测方法，其特征在于，步骤一中，所述有机溶剂选自乙酸乙酯、氯仿、苯、氯仿及乙醚的混合液或乙醚。
3.如权利要求2所述的盐酸多塞平含量的检测方法，其特征在于，所述有机溶剂为乙酸乙酯。
4.如权利要求1所述的盐酸多塞平含量的检测方法，其特征在于，步骤一中，所述内标为盐酸丙基解痉素。
5.如权利要求1所述的盐酸多塞平含量的检测方法，其特征在于，步骤一中，所述PH值为12。
6.如权利要求1所述的盐酸多塞平含量的检测方法，其特征在于，步骤二中，所述水浴为80°C下水浴。
7.如权利要求1所述的盐酸多塞平含量的检测方法，其特征在于，步骤三中，所述检测进样液体的条件为柱流量1. Oml/min,柱温初始温度为100°C，以20°C /min升温至 200°C，保持 2min，再以 10°C /min 升温至 260°C ；又以 20°C /min 升温至 280°C，保持 Imin ； 载气高纯氦气；进样口温度280°C ；进样方式不分流进样，进样量为Iy 1 ；GC/MS接口温度为280°C ；EI源为70eV，EM电压为153V。
8.如权利要求1所述的盐酸多塞平含量的检测方法，其特征在于，步骤三中，得到所述标准曲线包括如下步骤取盐酸多塞平标准溶液，用无水乙醇配制成0、2.5、5、10、20、50、 100 μ g/ml浓度的工作液，每样中均含盐酸丙基解痉素30 μ g/ml，然后利用气相色谱一质谱联用仪以SIM方式进样进行分析，提取离子为盐酸丙基解痉素_86、99、558、44，盐酸多塞平为_58、59、165、178 ；采用内标定法定量，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线。
9.如权利要求8所述的盐酸多塞平含量的检测方法，其特征在于，所述盐酸多塞平标准溶液为将盐酸多塞平纯品溶于无水乙醇中而得，浓度为lmg/ml。
全文摘要
本发明涉及一种检测技术领域的盐酸多塞平含量的检测方法，包括如下步骤步骤一，将样品预处理，加入内标，调节pH值为碱性，之后加入有机溶剂萃取，震荡后离心，得溶液；步骤二，将溶液水浴浓缩至干，得残渣，无水乙醇溶解，得进样液体；步骤三，利用气相色谱-质谱联用仪检测进样液体，采用提取离子法检测，内标法定量，根据标准曲线得出盐酸多塞平的含量。本发明的方法检测灵敏度搞，最小检测量低于ng级，仅使用少量的检材即可实现检测，同时本发明的方法检测成本低，检测时间短。
文档编号G01N1/28GK102338788SQ20101023793
公开日2012年2月1日 申请日期2010年7月27日 优先权日2010年7月27日
发明者丁国才, 沙飞翔, 郭景鹏 申请人:上海海帝园艺有限公司