专利名称：稳定的缺血修饰白蛋白测定试剂盒的制作方法
技术领域：
本发明涉及生物化学试剂领域，具体的，涉及一种稳定的缺血修饰白蛋白测定试剂盒。
背景技术：
缺血修饰白蛋白(Ischemia-modified albumin，简称IMA)是在机体发生缺血或再 灌注时，由于自由基等破坏了血清白蛋白的氨基酸序列，导致白蛋白与过渡金属的结合能 力改变，而产生的与过渡金属结合能力改变的白蛋白。1990 年，Bar. Or 等最早应用白蛋白钴结合试验(albumin cobalt binding test, ACB)来测定血浆IMA浓度。即样本与第一试剂中的氯化钴(CoCl2)溶液混合时，Co2+与结 合能力正常的白蛋白结合，加入第二试剂后，游离Co2+与二硫苏糖醇(DTT)结合产生红色反 应，在505nm处检测吸光度。而当机体缺血时，血浆中的白蛋白多处于修饰状态结合Co2+能 力降低，溶液中游离Co2+的浓度就相对较高，与DTT结合产生的显色反应更明显。故IMA 含量与颜色程度呈正比，通过与一定浓度的标准品比较，从而间接对IMA进行定量测定。目前国内外普遍采用检测IMA的试剂盒由液体双试剂组成。第一试剂中为钴离子 试剂，第二试剂为二硫苏糖醇试剂。但由于DTT本身是一种很强的还原剂，容易被空气氧 化，因此DTT的稳定性较差。目前国外销售的ACB Test试剂盒，因为DTT易氧化分解，有 效期只有14天。
发明内容
本发明的目的在于提供稳定的缺血修饰白蛋白测定试剂盒，该试剂盒稳定性好， 室温开瓶避光保存稳定30天，2-80C闭瓶保存稳定12个月，完全满足临床检验的需要。本发明的目的通过下述技术方案实现稳定的缺血修饰白蛋白测定试剂盒，包括 钴离子试剂和二硫苏糖醇试剂组成，
所述钴离子试剂，其组分成分(按重量百分数)是
六水合氯化钴0. 001%~0. 1%
叠氮钠0.01% 1%
三羟甲基氨基甲烷缓冲液 0. 5% ~10%
纯化水 88. 9%~99. 489%,
所述二硫苏糖醇试剂，其组成成分(按重量百分数)是
二硫苏糖醇 0. 05% ~1%
叠氮钠 0. 01% 1%
稳定剂 0. 01% 1%
咪唑缓冲溶液 0. 5% 10%
纯化水 87%~99. 43%,
并且，所述钴离子试剂和二硫苏糖醇试剂的体积的混合比例为1 1~4:1。
进一步的，所述钴离子试剂和二硫苏糖醇试剂的体积的混合比例为3:1。进一步的，所述稳定剂是曲拉通，聚氧化乙烯烷基酚醚和十二烷基苯磺酸钠中的一种。本发明与现有技术相比，具有如下的优点和有益效果
(1)、本发明通过在二硫苏糖醇试剂中加入少量非离子型表面活性剂，大大降低了试剂 中DTT与游离氧的结合，从而减缓DTT氧化的速度，显著提高试剂的稳定性。(2)、本发明通过增加DTT的浓度，在一定程度上也提高试剂盒的稳定性。(3)、本发明试剂盒稳定性好，室温开瓶避光保存稳定30天，2_8°C闭瓶保存稳定 12个月，完全满足临床检验的需要。
具体实施例方式下面结合实施例对本发明作进一步的详细说明，但本发明的实施方式不限于此。实施例1
本发明包括钴离子试剂和二硫苏糖醇试剂，其体积混合比例为钴离子试剂，50% ；二 硫苏糖醇试剂，50%。试剂1 钴离子试剂(按重量百分数)，其组分成分是
六水合氯化钴0. 001%
叠氮钠0.01%
三羟甲基氨基甲烷缓冲液0. 5%
纯化水99.489% 将上述成分混合后即钴离子试剂。
试剂2 二硫苏糖醇试剂(按重量百分数)，其组成成分是
二硫苏糖醇0. 05%
叠氮钠0.01%
曲拉通0.01%
咪唑缓冲溶液0. 5%
纯化水99.43% 将上述组分混合后即二硫苏糖醇试剂。将上述组成成分的试剂盒于2_8°C储存，6个月后测定纯化水，(此时吸光度最大 且稳定便于观察)。在37°C条件下，用分光光度计，在505nm的波长下连续测定反应溶液的 吸收情况，记录吸光度。以储存试剂中剩余DTT的浓度(相对百分数表示)。结果见表1。表1曲拉通对试剂盒稳定的影响
权利要求
1.稳定的缺血修饰白蛋白测定试剂盒，其特征在于包括钴离子试剂和二硫苏糖醇试剂，所述钴离子试剂，其组分成分(按重量百分数)是 六水合氯化钴0. 0019Γ0. 1%叠氮钠0.01% 1%三羟甲基氨基甲烷缓冲液0. 59TlO%纯化水88. 9% 99. 489%,所述二硫苏糖醇试剂，其组成成分(按重量百分数)是 二硫苏糖醇0. 05% 1%叠氮钠0.01% 1%稳定剂0.01% 1%咪唑缓冲溶液0. 5°/Γ Ο%纯化水87% 99. 43% ；并且，所述钴离子试剂和二硫苏糖醇试剂的体积的混合比例为1:广4:1。
2.根据权利要求1所述的稳定的缺血修饰白蛋白测定试剂盒，其特征在于，所述钴离 子试剂和二硫苏糖醇试剂的体积的混合比例为3:1。
3.根据权利要求1所述的稳定的缺血修饰白蛋白测定试剂盒，其特征在于，所述稳定 剂是曲拉通，聚氧化乙烯烷基酚醚和十二烷基苯磺酸钠中的一种。
全文摘要
本发明公开了一种稳定的缺血修饰白蛋白测定试剂盒，包括钴离子试剂和二硫苏糖醇试剂。本发明通过在二硫苏糖醇试剂中加入少量非离子型表面活性剂，大大降低了试剂中DTT与游离氧的结合，从而减缓DTT氧化的速度，显著提高试剂的稳定性。同时，通过增加DTT的浓度，在一定程度上也提高试剂盒的稳定性。本发明试剂盒室温开瓶避光保存稳定30天，2-8℃闭瓶保存稳定12个月，完全满足临床检验的需要。
文档编号G01N33/68GK102147416SQ20111002176
公开日2011年8月10日 申请日期2011年1月19日 优先权日2011年1月19日
发明者周帅, 谭韬, 陈卫, 高命 申请人:四川省新成生物科技有限责任公司