专利名称：6-酮-前列腺素F1α酶联免疫测定试剂盒的制作方法
技术领域：
本发明属于酶联免疫测定试剂盒，具体的涉及一种6-酮-前列腺素联免疫测定试剂盒。
背景技术：
前列腺素是血管内皮细胞花生四烯酸代谢的主要产物，也可产生于呼吸系统、泌尿系统与消化系统等。前列腺素是机体最强的血小板聚集抑制剂与血管扩张物质。6-酮-前列腺素Fla (以下简称6-酮-PGFla )是前列环素的稳定的代谢产物。在动脉粥样硬化、急性心肌梗塞、心绞痛、脑血管病变、糖尿病、肿瘤转移、周围血管血栓形成及血栓性血小板减少性紫癜等疾病时血浆6-酮-PGFla含量往往降低。
发明内容
本发明的目的在于提供一种6-酮-前列腺素酶联免疫测定试剂盒。为实现上述技术目的，达到上述技术效果，本发明通过以下技术方案实现 本发明的6-酮-前列腺素^k酶联免疫测定试剂盒，包括
1)已包被6-酮-PGFla-牛血清白蛋白连接物酶标板，-20°C保存；
2)明胶；
3)6-酮-PGFla标准品，4°C保存；
4)抗体6-酮-PGFla-IgG，4°C保存；
5)羊抗兔IgG-辣根过氧化物酶结合物，-20°C保存；
6)邻苯二胺；
7)稀释液，用前用蒸馏水作1:20稀释；
8)底物液，用前用蒸馏水作1:5稀释。本发明的检测原理如下
抗原(6-酮-PGFla-BSA)包被固相载体，与游离抗原(标准品或待测样品)竞争性地与一定量得抗体结合，洗涤后加过量酶标抗体，再加底物显色。根据显色程度(0D值)即可从标准曲线上推算出待测样品6-酮-PGFla含量。与现有技术相比，本发明具有以下有益效果
1、本发明的6-酮-前列腺素Jpk酶联免疫测定试剂盒合具有良好的特异性，可有效测定人和动物的血浆、血细胞、体液或组织中的6-酮-PGFl的浓度；
2、本发明的6-酮-前列腺素酶联免疫测定试剂盒合在动脉粥样硬化、急性心肌梗塞、心绞痛、脑血管病变、糖尿病、肿瘤转移、周围血管血栓形成及血栓性血小板减少性紫癜等疾病中的鉴别诊断灵敏度高，可保证良好的线性关系；
3、本发明的6-酮-前列腺素J^k酶联免疫测定试剂盒合在_20°C条件下可可保存6个月。上述说明仅是本发明技术方案的概述，为了能够更清楚了解本发明的技术技术方案，并可依照说明书的内容予以实施，以下以本发明的较佳实施例。
具体实施例方式一种6-酮-前列腺素酶联免疫测定试剂盒，其包括
1)已包被6-酮-PGFla-牛血清白蛋白连接物酶标板，-20°c保存；
2)明胶，Ig/瓶；
3)6-酮-PGFla 标准品，1600pg/ml，4°C保存；
4)抗体6-酮-PGFla-IgG, lml，滴度为 1:8000，4°C保存；
5)羊抗兔IgG-辣根过氧化物酶结合物(GARIgG-HRP)，100ug/ml,_20°C保存；
6)邻苯二胺(0PD)，15mg/瓶;
7)稀释液(PBS)，0.2M，用前用蒸馏水作1:20稀释；
8)底物液化吐作『2)，0.1M，用前用蒸馏水作1:5稀释。利用本发明的6-酮-前列腺素联免疫测定试剂盒的检测步骤如下 1、一次反应
将6-酮-PGFla标准品用0. 1%明胶倍比稀释成8个浓度1. 25,2. 5、5、10、20、40、80和 160 pg/0. 1ml，用 0. 1% 明胶(PBS 配制)将抗 6-酮-PGF1 a-IgG 作 1:10 稀释。零标准(BO)孔加稀释液lOOul，标准(ST)孔加6_酮-PGFla标准品lOOul，样品 (SMP)孔加待测样品lOOul。各孔均加抗体6-酮-PGFla-IgGlOOul (TA孔除外)。37 0C 2hr 或室温下 4hr。tween-PBS稀释液洗板5次。2、二次反应
用0. 1%明胶(稀释液配制)12ml将GARIgG-HRP稀释，各孔均加200ul (ΤΑ孔除外)。 37 °C 2hr或室温下4hr。tween-PBS 洗板 5 次。3、反应测定
用底物液新鲜配制OPD-H2A基质(0PD浓度lmg/ml，每毫升底物液中加入0. 5微升30% H2O2),每孔注入200ul。37°C放置20min或至显色较好时，用3M硫酸50ul终止反应。置室温lOmin，在酶标检测仪上测定OD49tl,以TA孔调零。4、计算
权利要求
1.6-酮-前列腺素酶联免疫测定试剂盒，其特征在于，包括1)已包被6-酮-PGFla-牛血清白蛋白连接物酶标板；2)明胶；3)6-酮-PGFla标准品；4)抗体6-酮-PGFla-IgG ；5)羊抗兔IgG-辣根过氧化物酶结合物；6)邻苯二胺；7)稀释液;8)底物液。
2.根据权利要求1所述的6-酮-前列腺素酶联免疫测定试剂盒，其特征在于所述明胶为Ig/瓶。
3.根据权利要求1所述的6-酮-前列腺素酶联免疫测定试剂盒，其特征在于所述6-酮-PGF1标准品为1600pg/ml。
4.根据权利要求1所述的6-酮-前列腺素联免疫测定试剂盒，其特征在于所述抗体6-酮-PGFla-IgG为lml，滴度为1:8000。
5.根据权利要求1所述的6-酮-前列腺素联免疫测定试剂盒，其特征在于所述羊抗兔IgG-辣根过氧化物酶结合物为100ug/ml。
6.根据权利要求1所述的6-酮-前列腺素联免疫测定试剂盒，其特征在于所述邻苯二胺为15mg/瓶。
7.根据权利要求1所述的6-酮-前列腺素酶联免疫测定试剂盒，其特征在于稀释液为0. 2M。
8.根据权利要求1至7中任意一项所述的6-酮-前列腺素Pk酶联免疫测定试剂盒， 其特征在于底物液为0. 1M。
全文摘要
本发明公开了一种6-酮-前列腺素F1α酶联免疫测定试剂盒，其包括已包被6-酮-PGF1α-牛血清白蛋白连接物酶标；明胶；6-酮-PGF1α标准品；抗体6-酮-PGF1α-IgG；羊抗兔IgG-辣根过氧化物酶结合物；邻苯二胺；稀释液和底物液。本发明的6-酮-前列腺素F1α酶联免疫测定试剂盒合具有良好的特异性，可有效测定人和动物的血浆、血细胞、体液或组织中的6-酮-PGF1α的浓度。
文档编号G01N33/88GK102495218SQ201110420060
公开日2012年6月13日 申请日期2011年12月15日 优先权日2011年12月15日
发明者何杨, 王兆钺, 阮长耿, 陈德春 申请人:苏州博赛生物医药有限公司, 苏州大学, 苏州苏大赛尔免疫生物技术有限公司