华支睾吸虫和广州管圆线虫双重实时荧光pcr检测试剂、试剂盒及其检测方法
【专利摘要】本发明公开了一种华支睾吸虫和广州管圆线虫双重实时荧光PCR检测试剂、试剂盒及其检测方法，所述检测试剂是针对以华支睾吸虫ITS1基因和广州管圆线虫ITS2基因的保守片段为靶目标的两组组分，两组组分各自包括一对特异性引物、一条特异性探针和一条内标探针。试剂盒包括PCR混合液、Taq?DNA聚合酶、DEPC-H2O、阳性质控品、阴性质控品和假病毒内标溶液；PCR混合液中含有检测试剂。检测方法包括：总DNA提取、反应组分配制、扩增、结果判定。本发明的试剂和试剂盒特异性强、灵敏度高、无污染、高通量、可对食品中肉眼不可见的寄生虫幼虫进行准确检测，检测方法快速、特异、敏感、可同时检测大量样品。
【专利说明】华支睾吸虫和广州管圆线虫双重实时荧光PCR检测试剂、试剂盒及其检测方法
【技术领域】
[0001]本发明属于生物【技术领域】，涉及一种PCR检测试剂、试剂盒及其检测方法，尤其涉及一种华支睾吸虫和广州管圆线虫双重实时荧光PCR检测试剂、试剂盒及其检测方法。
【背景技术】
[0002]华支睾吸虫(Clonorchis sinensis),又称肝吸虫,成虫寄生于肝的胆管内，可引起华支睾吸虫病(clonorchiasis)，又称肝吸虫病。曾在中国、日本、韩国、菲律宾、新加坡和马来西亚、俄罗斯等国有华支睾吸虫感染的报道。近年来，由于食物的多样化和国外饮食习惯的引入，本病在我国的感染率逐步增高，人群感染率从I~30%不等。根据全国首次寄生虫病调查表明，全国感染率平均为0.356%，以此推算，全国大约有470万感染者。其主要原因是食生鱼的习惯所致。据1988年的调查资料表明在黑龙江佳木斯地区的麦穗鱼感染率也为100%;在台湾省日月潭地区，上述两种小鱼华支睾吸虫囊蝴的感染率甚至高达100%。华支睾吸虫囊蝴主要分布在鱼体的各部分，如肌肉、皮、头、鳃、鳍及鳞等，一般以鱼肌肉最多，尤其在鱼体中部的背部和尾部较多。也可因鱼的种属不同，囊蝴的分布亦不同。除淡水鱼外，淡水虾如细足米虾、巨掌沼虾等也可有囊蝴寄生，因此，水产品、特别是淡水鱼中囊蝴的检测已经成为食品安全的首要问题。
[0003]广州管圆线虫病是一种新发食源性人畜共患传染病。人们由于误食带疫福寿螺、田螺、环棱螺等贝类，导致了本病的频繁暴发。到目前为止仍没有从中间宿主中检测广州管圆线虫的报道。
[0004]传统的华支睾吸虫和广州管圆线虫检测仍停留在人工分离、显微镜检查、专家鉴定等阶段，但检测周期长、且灵敏度极低等缺点不能被广泛应用。
【发明内容】
[0005]本发明要解决的技术问题在于，针对现有技术的缺陷，提供一种特异性强、灵敏度高、无污染、高通量、可对低含量华支睾吸虫感染宿主和广州管圆线虫感染宿主进行准确检测的华支睾吸虫和广州管圆线虫双重实时荧光PCR检测试剂、华支睾吸虫和广州管圆线虫双重实时荧光PCR检测试剂盒。
[0006]本发明进一步要解决的问题在于，提供一种快速、特异、敏感、可同时检测大量样品的华支睾吸虫和广州管圆线虫双重实时荧光PCR检测检测方法。
[0007]本发明解决其技术问题所采用的技术方案是:
[0008]一种华支睾吸虫和广州管圆线虫双重实时荧光PCR检测试剂，所述检测试剂包括华支睾吸虫检测组分、广州管圆线虫检测组分和内标序列检测组分；
[0009]其中，华支睾吸虫检测组分是针对以华支睾吸虫ITSl基因的保守片
[0010]段为靶目标的，包括:
[0011]引物:CS-PF:5 ' -CGATTCTAGTTCCGTCATCTGTC-3 ' CS-PR:5' -CAGCATGCATGCGGAACATA-3'
[0012]探针:CS-Pb229:5' -CTGCCTAGGGCGGAGCGATCCTAG-3'；
[0013]所述华支睾吸虫ITSl基因的保守片段的扩增目标核苷酸序列为:
[0014]CGATTCTAGTTCCGTCATCTGTCTTGCAGCATTGTCTGCCTAGGGCGGAGCGATCCTAGTTCCGTCATGTTCTACATGTATGTTCCGCATGCATGCTG ；
[0015]所述广州管圆线虫检测组分包括:
[0016]广州管圆线虫检测组分是针对以广州管圆线虫ITS2基因的保守片段为靶目标的，包括:
[0017]引物:Can-PF: 5' -CGCATGATATTAAAAGACGTTGCT-3'
[0018]Can-PR: 5' -GTAAACGCACAAAACGCACG-3'
[0019]探针:Can-Pbj'-CCGCGGCGCATTCGACCAT-3'；
[0020]所述广州管圆线虫ITS2基因的保守片段的扩增目标核苷酸序列为:
[0021]CGCATGATATTAAAAGACGTTGCTGCCGCGGCGCATTCGACCATGGCTTGTCGTCGGCTGTCGAATGGTGGCGTGCGTTTTGTGCGTTTAC ；
[0022]所述内标序列 检测组分包括:
[0023]IC-PF: 5' -CGATTCTAGTTCCGTCATCTGTC-3'
[0024]IC-PR:5/ -CAGCATGCATGCGGAACATA-3'；
[0025]IC-PB:5/ -CTCTCTCGCTCGCAACGATCGTCG-3'
[0026]用于制作假病毒内标的扩增目标核苷酸序列为:
[0027]CGATTCTAGTTCCGTCATCTGTCTTGCAGCATTGTCTCTCTCGCTCGCAACGATCGTCGTTCCGTCATGTTCTACATGTATGTTCCGCATGCATGCTG ；
[0028]所述华支睾吸虫检测组分的探针和广州管圆线虫检测组分的探针以及内标探针的5'端有用荧光染料标记的荧光报告基团，所述华支睾吸虫检测组分的探针和广州管圆线虫检测组分的探针以及内标探针的3'端有用淬灭荧光染料标记的荧光淬灭基团。
[0029]所述的华支睾吸虫和广州管圆线虫双重实时荧光PCR检测试剂，所述华支睾吸虫检测组分的探针5'端标记的荧光报告基团是FAM、3'端标记的荧光淬灭基团为BHQl ;所述广州管圆线虫检测组分的探针5'端标记的荧光报告基团是HEX、3'端标记的荧光淬灭基团为BHQl ;所述内标探针的5'端标记的突光报告基团是R0X、3'端标记的突光淬灭基团为BHQ2。
[0030]一种华支睾吸虫和广州管圆线虫双重实时荧光PCR检测试剂盒，包括PCR混合液、Taq DNA聚合酶、DEPC_H20、阳性质控品、阴性质控品和假病毒内标溶液；其中，所述PCR混合液中包含华支睾吸虫检测组分、广州管圆线虫检测组分和内标序列检测组分:
[0031]其中，华支睾吸虫检测组分是针对以华支睾吸虫ITSl基因的保守片
[0032]段为靶目标的，包括:
[0033]引物:CS-PF: 5' -CGATTCTAGTTCCGTCATCTGTC-3'
[0034]CS-PR: 5' -CAGCATGCATGCGGAACATA-3'
[0035]探针:CS-Pb229:5' -CTGCCTAGGGCGGAGCGATCCTAG-3'；
[0036]所述华支睾吸虫ITSl基因的保守片段的扩增目标核苷酸序列为:
[0037]CGATTCTAGTTCCGTCATCTGTCTTGCAGCATTGTCTGCCTAGGGCGGAGCGATCCTAGTTCCGTCATGTTCTACATGTATGTTCCGCATGCATGCTG ；
[0038]所述广州管圆线虫检测组分包括:
[0039]广州管圆线虫检测组分是针对以广州管圆线虫ITS2基因的保守片段为靶目标的，包括:
[0040]引物:Can-PF: 5' -CGCATGATATTAAAAGACGTTGCT-3'
[0041 ]Can-PR: 5' -GTAAACGCACAAAACGCACG-3'
[0042]探针:Can-Pbj'-CCGCGGCGCATTCGACCAT-3'；
[0043]所述广州管圆线虫ITS2基因的保守片段的扩增目标核苷酸序列为:
[0044]CGCATGATATTAAAAGACGTTGCTGCCGCGGCGCATTCGACCATGGCTTGTCGTCGGCTGTCGAATGGTGGCGTGCGTTTTGTGCGTTTAC ；
[0045]所述的内标序列检测组分包括:
[0046]内标引物:IC-PF:5' -CGATTCTAGTTCCGTCATCTGTC-3;
[0047]IC-PR: 5' -CAGCATGCATGCGGAACATA-3'
[0048]内标探针:5'-CTCTCTCGCTCGCAACGATCGTCG-3'；
[0049]所述假病毒内标溶液中含有:内标核苷酸序列制作的假病毒；
[0050]用于制作假病毒的内标扩增核苷酸序列为:
[0051]CGATTCTAGTTCCGTCATCTGTCTTGCAGCATTGTCTCTCTCGCTCGCAACGATCGTCGTTCCGTCATGTTCTACATGTATGTTCCGCATGCATGCTG ；
[0052]所述华支睾吸虫检测组分的探针和广州管圆线虫检测组分的探针以及内标探针的5'端有用荧光染料标记的荧光报告基团，所述华支睾吸虫检测组分的探针和广州管圆线虫检测组分的探针以及内标探针的3'端有用淬灭荧光染料标记的荧光淬灭基团。
[0053]所述的华支睾吸虫和广州管圆线虫双重实时荧光PCR检测试剂盒中，所述华支睾吸虫检测组分的探针5'端标记的荧光报告基团是FAM、3'端标记的荧光淬灭基团为BHQl ;所述广州管圆线虫检测组分的探针5'端标记的荧光报告基团是HEX、3'端标记的荧光淬灭基团为BHQl ;所述内标探针的5'端标记的荧光报告基团是R0X、3'端标记的荧光淬灭基团为BHQ2。
[0054]所述的华支睾吸虫和广州管圆线虫双重实时荧光PCR检测试剂盒中各种试剂的含量优选为:
[0055]
PCR混合液400μL
[0056]Taq DNA 聚合酶(5U4tL)25μΙ.DEPC-H2OImL
阳性质控品1.2mL
阴性质控品1.2mL
假病毒内标溶液50(^L。
[0057]一种华支睾吸虫和广州管圆线虫双重实时荧光PCR检测方法，采用上述试剂和试剂盒，检测方法包括以下步骤:
[0058](I)、总DNA提取:在待测样品中加入假病毒内标溶液后，提取待测样品的DNA，得到模板DNA溶液；
[0059](2)、反应组分配制:分别配制检测物、阳性对照物和阴性对照物，其中，加入PCR混合液、Taq DNA聚合酶、模板DNA溶液和DEPC-H2O制成检测物；加入PCR混合液、Taq DNA聚合酶、阳性质控品和DEPC-H2O制成阳性对照物；加入PCR混合液、Taq DNA聚合酶、阴性质控品和DEPC-H2O制成阴性对照物；
[0060](3)、扩增:分别将检测物、阳性对照物和阴性对照物放入荧光PCR仪进行扩增，首先95V预变性3min，95V下变性IOsec，在60°C下退火延伸45sec，采集荧光信号，进行40个PCR循环；
[0061](4)结果判定:根据荧光信号到达设定域值所经历的循环数Ct值判定结果。
[0062]所述的华支睾吸虫和广州管圆线虫双重实时荧光PCR检测方法，所述步骤(4)中，判定结果的标准为:
[0063]Ct值> 40.0或无扩增曲线，表示样品中无华支睾吸虫和广州管圆线虫；
[0064]FAM信号Ct值< 35.0，且出现典型的扩增曲线，表示样品中存在华支睾吸虫；
[0065]HEX信号Ct值≤35.0，且出现典型的扩增曲线，表示样品中存在广州管圆线虫；
[0066]Ct值在35.0-40.0之间的重做检测，重做结果Ct值大于40.0或无扩增曲线者为阴性，否则为阳性。
[0067]本发明的检测试剂选用了针对华支睾吸虫ITSl基因和广州管圆线虫ITS2基因各自的保守片段的引物和探针，与常规的PCR相比较，采用这种引物和探针的检测试剂具有快速、特异、敏感、无污染、高通量、且可同时检测大量样品的特性。本发明的试剂尤其可对样品中低含量的华支睾吸虫和广州管圆线虫感染宿主进行准确检测，是一种用于检测华支睾吸虫和广州管圆线虫感染的良好试剂，本试剂可对分泌物、血液、组织等多种样品中的华支睾吸虫和广州管圆线虫进行快速检测，样品适用范围广，没有生物安全隐患，使用安全的优点。
[0068]本发明的试剂盒将进行荧光定量PCR检测的各种试剂置放在一个试剂盒中，其中试剂盒中的试剂PCR混合液含有针对华支睾吸虫ITSl基因和广州管圆线虫ITS2基因的保守片段进行 检测的特殊引物和探针，含有该引物和探针的PCR混合液与其他试剂配合，可在收到样品后2小时内做出定性检测结果，快速、便捷。该荧光定量PCR试剂盒是一种检测临床样品中华支睾吸虫和广州管圆线虫的敏感和可靠的试剂盒。[0069]本发明的试剂和试剂盒将靶基因DNA序列包裹在假病毒内代替常规的质粒作为阳性质控品(假病毒内标)，解决了质粒质控品容易降解和污染的问题。而且本发明使用了假病毒内标溶液作为内标质控品对提取和检测过程进行监控，可以有效避免样本中抑制物或操作不当等原因引起的假阴性结果，大大提高了检测结果的可靠性。本发明在检疫、诊断、分子流行病学研究具有重要的实际应用价值。
[0070]本发明的检测方法采用具有特性的检测试剂和试剂盒，该方法可以减少DNA或PCR产物污染的风险，比常规PCR快速，无需扩增后的电泳分析。克服了常规PCR和巢式产生的产物须电泳检测、费时、不敏感的缺点。与常规PCR相比，本发明的荧光定量PCR可以作出客观的估计，对检测样品能进行出阳性、阴性和可疑的准确判定。其中Ct值为40.00可确定为阳性和阴性的临界值(CUt-Of f)。
【专利附图】
【附图说明】
[0071]下面将结合附图及实施例对本发明作进一步说明，附图中:
[0072]图1是本发明实施例的扩增曲线。
【具体实施方式】
[0073]为了对本发明的技术特征、目的和效果有更加清楚的理解，现对照附图详细说明本发明的【具体实施方式】。
[0074]一种华支睾吸虫和广州管圆线虫双重实时荧光PCR检测试剂，所述检测试剂包括华支睾吸虫检测组分和广州管圆线虫检测组分；
[0075]其中，华支睾吸虫检测组分是针对以华支睾吸虫ITSl基因的保守片
[0076]段为靶目标的，包括:
[0077]引物:序列ICS-PF:5' -CGATTCTAGTTCCGTCATCTGTC-3'
[0078]序列 2CS-PR:5' -CAGCATGCATGCGGAACATA-3'
[0079]探针:序列3CS-Pb229:5' -CTGCCTAGGGCGGAGCGATCCTAG-3'；
[0080]所述华支睾吸虫ITSl基因的保守片段的扩增目标核苷酸序列(序列4)为=CGATTCTAGTTCCGTCATCTGTCTTGCAGCATTGTCTGCCTAGGGCGGAGCGATCCTAGTTCCGTCATGTTCTACATGTATGTTCCGCATGCATGCTG ；
[0081]所述广州管圆线虫检测组分包括:
[0082]广州管圆线虫检测组分是针对以广州管圆线虫ITS2基因的保守片段为靶目标的，包括:
[0083]引物:序列5Can-PF:5/ -CGCATGATATTAAAAGACGTTGCT-3'
[0084]序列 eCan-PRj' -GTAAACGCACAAAACGCACG-3'
[0085]探针:序列7Can-Pb:5' -CCGCGGCGCATTCGACCAT-3'；
[0086]所述广州管圆线虫ITS2基因的保守片段的扩增目标核苷酸序列(序列8)为:CGCATGATATTAAAAGACGTTGCTGCCGCGGCGCATTCGACCATGGCTTGTCGTCGGCTGTCGAATGGTGGCGTGCGTTTTGTGCGTTTAC ；
[0087]所述内标序列检测组分包括:
[0088]内标引物:序列9IC-PF:5' -CGATTCTAGTTCCGTCATCTGTC-3'[0089]序列 10IC-PR:5' -CAGCATGCATGCGGAACATA-3;；
[0090]内标探针:序列IlIC-PB:5' -CTCTCTCGCTCGCAACGATCGTCG-3'
[0091]用于制作假病毒的内标扩增核苷酸序列(序列12)为:
[0092]CGATTCTAGTTCCGTCATCTGTCTTGCAGCATTGTCTCTCTCGCTCGCAACGATCGTCGTTCCGTCATGTTCTACATGTATGTTCCGCATGCATGCTG ；
[0093]所述华支睾吸虫检测组分的探针和广州管圆线虫检测组分的探针以及内标探针的5'端有用荧光染料标记的荧光报告基团，所述华支睾吸虫检测组分的探针和广州管圆线虫检测组分的探针以及内标探针的3'端有用淬灭荧光染料标记的荧光淬灭基团。
[0094]所述的华支睾吸虫和广州管圆线虫双重实时荧光PCR检测试剂，所述华支睾吸虫检测组分的探针5'端标记的荧光报告基团是FAM、3'端标记的荧光淬灭基团为BHQl ;所述广州管圆线虫检测组分的探针5'端标记的荧光报告基团是HEX、3'端标记的荧光淬灭基团为BHQl ;所述内标探针的5'端标记的荧光报告基团是ROXdi端标记的荧光淬灭基团为BHQ2。
[0095]一种华支睾吸虫和广州管圆线虫双重实时荧光PCR检测试剂盒，包括PCR混合液、Taq DNA聚合酶、DEPC-H20、阳性质控品、阴性质控品和假病毒内标溶液；
[0096]其中所述PCR混合液中包含华支睾吸虫检测组分和广州管圆线虫检测组分:
[0097]其中，华支睾吸虫检测组分是针对以华支睾吸虫ITSl基因的保守片
[0098]段为靶目标的，包括:
[0099]引物:序列ICS-PF:5' -CGATTCTAGTTCCGTCATCTGTC-3;
[0100]序列 2CS-PR: 5' -CAGCATGCATGCGGAACATA-3'
[0101]探针:序列3CS-Pb229:5' -CTGCCTAGGGCGGAGCGATCCTAG-3'；
[0102]所述华支睾吸虫ITSl基因的保守片段的扩增目标核苷酸序列(序列4)为=CGATTCTAGTTCCGTCATCTGTCTTGCAGCATTGTCTGCCTAGGGCGGAGCGATCCTAGTTCCGTCATGTTCTACATGTATGTTCCGCATGCATGCTG ；
[0103]所述广州管圆线虫检测组分包括:
[0104]广州管圆线虫检测组分是针对以广州管圆线虫ITS2基因的保守片段为靶目标的，包括:
[0105]引物:序列5Can-PF: 5' -CGCATGATATTAAAAGACGTTGCT-3'
[0106]序列 6Can-PR: 5' -GTAAACGCACAAAACGCACG-3'
[0107]探针:序列7Can-Pb:5' -CCGCGGCGCATTCGACCAT-3'；
[0108]所述广州管圆线虫ITS2基因的保守片段的扩增目标核苷酸序列(序列8)为:CGCATGATATTAAAAGACGTTGCTGCCGCGGCGCATTCGACCATGGCTTGTCGTCGGCTGTCGAATGGTGGCGTGCGTTTTGTGCGTTTAC ；
[0109]所述内标序列检测组分包括:
[0110]内标引物:序列9IC-PF:5' -CGATTCTAGTTCCGTCATCTGTC-3'
[0111]序列 IOIC-PRj' -CAGCATGCATGCGGAACATA-3'；
[0112]内标探针:序列IlIC-PB:5' -CTCTCTCGCTCGCAACGATCGTCG-3'
[0113]所述假病毒内标溶液中含有:内标核苷酸序列制作的假病毒；
[0114]用于制作假病毒的内标扩增核苷酸序列(序列12)为:[0115]CGATTCTAGTTCCGTCATCTGTCTTGCAGCATTGTCTCTCTCGCTCGCAACGATCGTCGTTCCGTCATGTTCTACATGTATGTTCCGCATGCATGCTG ；
[0116]所述华支睾吸虫检测组分和广州管圆线虫检测组分的探针以及内标探针的5'端有用荧光染料标记的荧光报告基团，所述华支睾吸虫检测组分和广州管圆线虫检测组分的探针以及内标探针的3'端有用淬灭荧光染料标记的荧光淬灭基团。
[0117]所述的华支睾吸虫和广州管圆线虫双重实时荧光PCR检测试剂盒，所述华支睾吸虫检测组分的探针5'端标记的荧光报告基团是FAM、3'端标记的荧光淬灭基团为BHQl ;所述广州管圆线虫检测组分的探针5'端标记的荧光报告基团是HEX、3'端标记的荧光淬灭基团为BHQl ;所述内标探针的5'端标记的突光报告基团是R0X、3'端标记的突光淬灭基团为BHQ2。
[0118]所述检测试剂盒中各种试剂的含量为:
[0119]
【权利要求】
1.一种华支睾吸虫和广州管圆线虫双重实时荧光PCR检测试剂，其特征在于，所述检测试剂包括华支睾吸虫检测组分、广州管圆线虫检测组分和内标序列检测组分； 其中，华支睾吸虫检测组分是针对以华支睾吸虫ITSI基因的保守片段为靶目标的，包括:
2.根据权利要求1所述的华支睾吸虫和广州管圆线虫双重实时荧光PCR检测试剂，其特征在于，所述华支睾吸虫检测组分的探针5'端标记的荧光报告基团是FAM、3'端标记的荧光淬灭基团为BHQl ;所述广州管圆线虫检测组分的探针5'端标记的荧光报告基团是HEX、3'端标记的荧光淬灭基团为BHQl ;所述内标探针的5'端标记的荧光报告基团是ROX^i端标记的荧光淬灭基团为BHQ2。
3.一种华支睾吸虫和广州管圆线虫双重实时荧光PCR检测试剂盒，其特征在于，包括PCR混合液、Taq DNA聚合酶、DEPC-H2O,阳性质控品、阴性质控品和假病毒内标溶液； 其中，所述PCR混合液中包含华支睾吸虫检测组分、广州管圆线虫检测组分和内标序列检测组分: 其中，华支睾吸虫检测组分是针对以华支睾吸虫ITSl基因的保守片段为靶目标的，包括:
4.根据权利要求3所述的华支睾吸虫和广州管圆线虫双重实时荧光PCR检测试剂盒，其特征在于，所述华支睾吸虫检测组分的探针5'端标记的荧光报告基团是FAM、3'端标记的荧光淬灭基团为BHQl ;所述广州管圆线虫检测组分的探针5'端标记的荧光报告基团是HEX、3'端标记的荧光淬灭基团为BHQl ;所述内标探针的5'端标记的荧光报告基团是ROX^i端标记的荧光淬灭基团为BHQ2。
5.根据权利要求4所述的华支睾吸虫和广州管圆线虫双重实时荧光PCR检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒中各种试剂的含量为:
6.一种华支睾吸虫和广州管圆线虫双重实时荧光PCR检测方法，其特征在于，采用权利要求3的试剂盒，检测方法包括以下步骤: (1)、总DNA提取:在待测样品中加入假病毒内标溶液后，提取待测样品的DNA，得到模板DNA溶液； (2)、反应组分配制:分别配制检测物、阳性对照物和阴性对照物，其中，加入PCR混合液、Taq DNA聚合酶、模板DNA溶液和DEPC-H2O制成检测物；加入PCR混合液、Taq DNA聚合酶、阳性质控品和DEPC-H2O制成阳性对照物；加入PCR混合液、Taq DNA聚合酶、阴性质控品和DEPC-H2O制成阴性对照物； (3)、扩增:分别将检测物、阳性对照物和阴性对照物放入PCR仪进行扩增，首先95°C预变性3min，95°C下变性lOsec，在60°C下退火延伸45sec，采集荧光信号，进行40个PCR循环； (4)结果判定:根据荧光信号到达设定域值所经历的循环数Ct值判定结果。
7.根据权利要求6所述的华支睾吸虫和广州管圆线虫双重实时荧光PCR检测方法，其特征在于，所述步骤(4)中，判定结果的标准为: Ct值> 40.0或无扩增曲线，表示样品中无华支睾吸虫和广州管圆线虫； FAM信号Ct值< 35.0，且出现典型的扩增曲线，表示样品中存在华支睾吸虫； HEX信号Ct值< 35.0，且出现典型的扩增曲线，表示样品中存在广州管圆线虫； Ct值在35.0-40.0之间的 重做检测，重做结果Ct值大于40.0或无扩增曲线者为阴性，否则为阳性。
【文档编号】G01N21/64GK103773861SQ201410014778
【公开日】2014年5月7日 申请日期:2014年1月13日 优先权日:2014年1月13日
【发明者】翟建新, 花群义, 朱志杰, 张利 申请人:深圳澳东检验检测科技有限公司