一种富硒杏鲍菇的栽培及成份检测方法
【专利摘要】本发明公开了一种富硒杏鲍菇的裁培及成分检测方法，本发明的栽培方法包括培养基配制、装袋、灭菌、接种、发菌、催蕾、出菇、采收等步骤，通过对温度、湿度、光照、通风等主要栽培条件的控制，使杏鲍菇富硒达到周年生产、全年上市，提高产量，增加经济效益，且增加杏鲍菇的富硒能力，提高杏鲍菇的食疗价值。本发明成分检测包括硒元素、氨基酸、总糖三种成分的测定，富硒杏鲍菇每公斤含硒量为富硒能力最好达到了600ug/g，并未超过人体极限吸收范围800ug/d中毒界限。
【专利说明】一种富硒杏鲍菇的栽培及成份检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物领域，特别涉及一种富硒杏鲍菇的栽培及成份检测方法。
【背景技术】
[0002] 杏鲍菇，中文名：刺芹侧耳；商品名：杏鲍菇；别名：雪耷、雪莺干贝燕。杏鲍菇菌 肉肥厚，脆嫩、味道鲜美，具有淡淡的杏仁味，适合烹饪各种佳肴。与其他一般品种的平菇、 香菇、鸡腿菇等的区别是：组织紧密、富有弹性、采摘后保存的时间较一般菇要长。由此被 誉为"平菇之王"；杏鲍燕的营养十分丰富，高蛋白，低脂肪，含有18种氨基酸，其中8种是 人体必需氨基酸，且都是L-型，易被人体吸收利用，它可与肉类、禽蛋相匹美。中医认为，杏 鲍燕有益气、杀虫和美容作用，可促进人体对脂类物质的消化吸收和胆固醇的溶解，对肿瘤 也有一定的预防和抑制作用。它还含有利尿，健脾胃、助消化的酶类，具有强身、滋补、增强 免疫力的功能。100克干菇中粗蛋白的含量25%、脂肪1. 4%、粗纤维6. 9%、氨基酸总量占 16. 644%、维生素 E7. 6毫克及转、磷、铁等矿物元素。杏鲍菇还含有大量寡糖，是灰树花的 15倍、金针燕的3. 5倍、真姬菇的2倍，它与胃肠中的双岐杆菌起作用，具有很好的促进消 化、吸收功能，有整理肠胃及美容的效果，更是老年人和心血管疾病与肥胖症患者理想的营 养保健食品，因而极受人们的欢迎。
[0003] 硒是人体必需的14种微量元素之一，它具有抑制体内细胞氧化、增强机体免疫 力、抗衰老等作用。缺硒能诱发心血管疾病、肿瘤、克山病等。摄硒量过多，容易发生硒中 毒营养学家指出，除膳食纤维外，食用菌含有人体所需的全部营养物质，一个成年人每天吃 100克食用菌，能获得15?17g优质蛋白；能获得600mg|丐，相当于日需要量的80% ;可满 足人体每日热需要量的11%，但食用菌中硒的含量低于5吗/kg。食用菌的不同品种对硒元 素的吸收或富集能力是不同的。通过选择杏鲍菌菇品种及其培养料中加入无机硒，通过加 硒技术驯化杏鲍菌真菌吸收和富集能力，菌丝体转化所产生的食用菌，含硒量丰富，符合国 家食品中硒限量卫生标准（GB13105-91)，这称之为生物转化富硒食用菌，而不是在食用菌 中加入硒制剂的强化食品。生物转化富硒食用菌是补硒壮体一举多得的极好功能性食品， 具有良好的开发前景。
[0004] 杏鲍菌菇是近几年新引进开发的珍稀菇品种。但当前市售杏鲍燕以传统裁培技术 方式生产，一是硒含量低，通常仅为5/zg/kg，不能成为食疗保健产品，附加值低；二是不能 常年生产，仅在每年3到6月，10到12月利用自然温度出菇，而在夏冬二季只能仃产，无法 常年均衡上市。
【发明内容】
[0005] 针对现有技术中存在的不足之处，本发明提供一种富硒杏鲍菇的栽培及成份检测 方法。
[0006] 为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
[0007] -种富硒杏鲍菇的裁培方法，包括以下步骤：
[0008] (1)配制培养基：a、称取以下重量份的原料：玉米芯40-50、杂木屑25-35、麸皮 15-20、营养颗粒5-10、石灰1-2、白糖1-2、石膏粉0· 5-1、亚硒酸钠0· 0001-0. 0002 ;b、将 无霉变的玉米芯粉碎成黄豆粒大小，待用；c、取亚硒酸钠和白糖混合均匀，然后加入适量 的水中在拌和机中搅拌l_2min使之充分溶解，然后加入玉米芯、杂木屑、麸皮、营养颗粒、 石灰、石膏粉搅拌4-6min，使培养料充分吸收水份；d、将拌匀后的培养基在水泥地面摊放 24-36h，中间翻堆1-2次；
[0009] (2)装袋：将培养基装入17X33厘米聚丙烯袋，每袋装培养基1. 5-2. 0公斤，装袋 时压实，上好颈圈，塞上硅胶塞，并用打孔器在菌袋上打8-10厘米深的孔；
[0010] (3)灭菌：高压灭菌，压力为〇· 1-0. 2MPa，时间为2-3h，待压力表指针降到0时出 锅；
[0011] (4)接种：待到袋温冷却到45°C以下时接种，抽出袋中塑料棒，在孔洞中加入谷粒 菌种；
[0012] (5)发菌：发菌在培养室进行，温度23-25°C，湿度65-70%，时间25-27天；
[0013] (6)催蕾：将菌棒移入燕房出燕架上培养，用打孔器在菌袋上打若干个0. 4-0. 6cm 深的孔，温度23-25°C，湿度80-85%，培养三天；再在温度12-15°C，湿度85-90%，用光照强 度700-8001ux，培养7-10天现蕾；
[0014] (7)出菇：待菇蕾长到黄豆大小时，选留2-3个生长健壮菇蕾；二天后选留1-2个 菇朵形好的小菇留下培养；待菇长到如乒乓球大小时，提高湿度到90-95%，加大通风量， 每天3-4次，每次30_40min ;
[0015] (8)采收：待菌盖直径4-6cm，菌柄长10-12cm时，菌盖平展，边缘向内稍卷，菌褶初 步形成，但未弹射孢子，有7-8分成熟时，采收。
[0016] 所述营养颗粒的制备方法如下：a、称取以下重量份的原料：畜禽粪便20-30、蚯蚓 粪5-10、菜籽饼10-15、中药渣4-8、椰壳粉3-6、咖啡渣2. 5-4. 5、蹄角粉2-3、骨粉2-3、炉渣 灰1. 5-2. 5、沙漠砂8-12、紫砂岩10-15、浮石5-10、绿泥石4-8、烟草粉3-5、蓖麻叶粉2-4、 茶枯粉2. 5-4. 5、桉叶油1-3、竹醋液4-6、废糖蜜3-5、沼气废液2. 4-4. 5、营养液10-15 ;b、 取沙漠砂、紫砂岩、浮石、绿泥石混合均匀，粉碎，过50-100目筛，780-84(TC煅烧l_2h，自然 冷却至室温，待用；c、取畜禽粪便、蚯蚓粪、菜籽饼、中药渣、椰壳粉、咖啡渣、蹄角粉、骨粉、 炉渣灰混合均匀，再加入适量的水充分搅拌均匀，控制含水量为50-60%，在28-32°C下堆 肥发酵5-7天，然后加入竹醋液、废糖蜜和沼气废液，搅拌均匀，在25-30°C下继续发酵3-6 天，最后加入营养液，搅拌均匀，在24-28°C下继续发酵2-4天，发酵完成后将发酵料低温烘 干，粉碎，过50-100目筛，待用；d、将上述过筛的发酵料与步骤b制得的粉末混合均匀，再加 入余下原料，搅拌均匀，制粒，烘干即可。
[0017] 所述营养液是含有以下浓度成分的水溶液：磷酸二氢铵5-10g/L、过磷酸钙3-6g/ L、尿素2-4g/L、硫酸铜2-3mg/L、氯化猛4-8mg/L、硫酸亚铁30-50mg/L、钥酸钠2-3mg/L、硼 酸l-2mg/L、腐植酸钾l-2g/L、浒苔硒多糖10-15mg/L。
[0018] 本发明杏鲍菇的硒成分测定方法如下：
[0019] (1)杏鲍菇子实体吸光度测定
[0020] 将生长完整的子实体标记放好，作为样品，将样品先除杂蒸馏水冲洗三次，50°C烘 干，冷却粉碎研磨称量，因为本次试验中，所得样品烘干后质量较少，所以称取量也酌情减 少，精确称取0. 25样品细粉，加入加入体积比HN03 :HC103 = 2:1组成的混合酸液5ml，浸泡 溶解，水浴锅l〇〇°C水浴，直到其中粉末完全溶解，混酸液澄清，酸液稀释至50ml，取10ml稀 释液，放入锥形瓶中，加入5% EDTA-2Na5ml混合，然后以稀硝酸调节pH至2,加入1 %的邻 苯二胺溶液3ml摇晃震荡一分钟，放置2h后，甲苯10ml萃取震摇lmin，取甲苯层在335nm 处测吸光度；
[0021] (2)标准硒溶液吸光度测定
[0022] 亚硒酸钠以10% HN03100ml溶解，取10ml液体以250ml容量瓶10% ΗΝ03稀释到 250ml，得到4ug/ml的标准硒溶液；随后分别从标准硒溶液中，取0ml、4ml、8ml、12ml、16ml、 20ml、24ml硒标准液，以容量瓶和10% HN03稀释定容到50ml ;取10ml稀释液，放入锥形瓶 中，加入5% EDTA-2Na5ml混合，然后以稀硝酸调节pH至2,加入1 %的邻苯二胺溶液3ml摇 晃震荡一分钟，放置2h后，甲苯10ml萃取震摇lmin，取甲苯层在335nm处测吸光度，做出标 准线性曲线；
[0023] (3)硒含量的分析
[0024] 将子实体中测得的吸光度带入标准硒溶液吸光度的线性曲线方程中，可得到硒元 素的具体含量。
[0025] 本发明杏鲍菇的氨基酸成分测定方法如下：
[0026] (1)杏鲍菇样品前处理
[0027] 将杏鲍菇样品清洗干净，晾干，分离菌柄和菌盖，将菌柄和菌盖分别放入 DHG-9240A型电热恒温鼓风干燥箱中110°C干燥至恒重，冷却，置于研钵中研磨成细粉状， 过60目筛，贮于干燥器内备用；
[0028] (2)氨基酸含量测定
[0029] 将上述不同的实验材料碾碎，过80目筛，准确称取分析样品100mg，放入水解管， 向管内加6mol/L盐酸15-20ml，抽真空，充2000g/m 2的高纯度氮气，如此重复3次，在氮气 状态下将管口封住并置于ll〇°C水解22h后取出冷却，水解液过滤，用去离子水冲洗，再全 部转移到l〇〇mL容量瓶，定容，吸取滤液lml放到10mL小烧杯中，在ZK-82A型真空干燥箱 内，60°C、0. 08MPa下干燥，用lmLO. lmol/L盐酸溶解上机检测；
[0030] (3)游离氨基酸测定
[0031] 称取样品0. l〇〇g，投入试管内，用80%乙醇置于80°C水浴中提取，目的是蒸馏 去酒精，等样品呈现糊状，加乙醚5ml，马上塞试管塞，充分振荡，用50mL分液漏斗反复抽 提2次，收集，转到50mL容量瓶中，定容至刻度，摇匀；取5mL提取液，冷冻离心干燥，加进 0. 02mol/L HCllml，用日立835-50A型氨基酸自动分析仪测定其含量。
[0032] 本发明杏鲍菇的总糖成分测定方法如下：
[0033] (1)杏鲍菇样品预处理
[0034] 将供试杏鲍菇样品剪成长、宽约5cm小块，在105°C干燥箱中烘干至发脆，冷却后 立即用研磨器研磨，研磨后的样品过80目筛，未能过筛部分经钵内研磨后再次过筛，直至 全部样品过筛为止；
[0035] (2)杏鲍菇总糖的提取
[0036] 将经过研磨预处理的杏鲍菇样品0. 25g加入100mL蒸馏水中，再加入30ml浓盐 酸100°C水浴水解3h。水解后冷却用漏斗过滤，以蒸馏水定容至250ml备用；
[0037] (3)苯酚硫酸法标准曲线的制作
[0038] 标准储备液的配制：精密称取105°C干燥至恒重的D-无水葡萄糖0. 1000g置于 100ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度摇匀，即配得lmg/ml的的葡萄糖标准储备溶液备 用；
[0039] 标准曲线的制备：精密吸取葡萄糖标准储备液0. 5、1.0、1.5、2.0、2. 5、3.0和 3. 5ml，分别置于50ml容量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得10. 0、20. 0、30. 0、40. 0、50. 0、60. 0 和70. 0 μ g/ml的标准葡萄糖使用液。取20ml刻度试管8支，从0-7分别编号，各取2ml不 同浓度的葡萄糖标准溶液分别加入对应的试管中，然后按顺序向试管内加入1. 0ml6%苯酚 溶液，摇匀，再从管液正面以5-20s时间加入5. 0ml浓硫酸，摇匀冷却室温放置15-20分钟， 以2. 0ml蒸馏水取代标准葡萄糖使用液，根据标准曲线制备方法显色后作为空白，在485nm 波长下比色测定，以糖含量为横坐标，光密度为纵坐标，绘制标准曲线，求出标准直线方程。
[0040] 本发明的有益效果：
[0041] (1)通过使用本培养基栽培，增加杏鲍菇的富硒能力。
[0042] (2)通过本发明使无机硒转化以氨基酸螯合物形态存在，是优良的生物源硒，提升 具有富硒保健的杏鲍菇产品，既具有食疗作用又是日常佳肴而便于消费者接受。
[0043] (3)本发明的栽培方法，培养基配制一装袋一灭菌一接种一发菌一催蕾一出燕一 采收和对温度、湿度、光照、通风等主要栽培条件的控制，使杏鲍菇富硒达到周年生产、全年 上市，提高产量，增加经济效益。
[0044] (4)富硒杏鲍燕每公斤含硒量为富硒能力最好达到了 600ug/g，并未超过人体极 限吸收范围800ug/d中毒界限。符合国标GB13105-1991《食品中硒限量卫生标准》。同时 硒源品质和含量得到改善、提高，而成为优质补硒保健食品。
【专利附图】
【附图说明】
[0045] 图1为实施例2测定硒的标准曲线。
[0046] 图2为实施例4葡萄糖标准曲线。
【具体实施方式】
[0047] 以下通过实施例进一步对本发明进行描述。
[0048] 实施例1 :富硒杏鲍菇的裁培方法
[0049] (1)配制培养基：a、称取以下重量份的原料：玉米芯50、杂木屑30、麸皮17、营养 颗粒8、石灰1、白糖1、石膏粉1、亚硒酸钠0. 0001 ;b、将无霉变的玉米芯粉碎成黄豆粒大 小，待用；c、取亚硒酸钠和白糖混合均匀，然后加入适量的水中在拌和机中搅拌lmin使之 充分溶解，然后加入玉米芯、杂木屑、麸皮、营养颗粒、石灰、石膏粉搅拌5min，使培养料充分 吸收水份；d、将拌匀后的培养基在水泥地面摊放24h，中间翻堆2次；
[0050] (2)装袋：将培养基装入17X33厘米聚丙烯袋，每袋装培养基1. 5公斤，装袋时压 实，上好颈圈，塞上硅胶塞，并用打孔器在菌袋上打10厘米深的孔；
[0051] (3)灭菌：高压灭菌，压力为〇· IMPa，时间为3h，待压力表指针降到0时出锅；
[0052] (4)接种：待到袋温冷却到45°C以下时接种，抽出袋中塑料棒，在孔洞中加入谷粒 菌种；
[0053] (5)发菌：发菌在培养室进行，温度23-25°C，湿度65-70%，时间25-27天；
[0054] (6)催蕾：将菌棒移入燕房出燕架上培养，用打孔器在菌袋上打若干个0. 5cm深的 孔，温度23-25 °C，湿度80-85 %，培养三天；再在温度12-15°C，湿度85-90 %，用光照强度 700-8001ux，培养 7-10 天现蕾；
[0055] (7)出菇：待菇蕾长到黄豆大小时，选留2-3个生长健壮菇蕾；二天后选留1-2个 菇朵形好的小菇留下培养；待菇长到如乒乓球大小时，提高湿度到95%，加大通风量，每天 3-4 次，每次 30min ;
[0056] (8)采收：待菌盖直径4-6cm，菌柄长10cm时，菌盖平展，边缘向内稍卷，菌褶初步 形成，但未弹射孢子，有7-8分成熟时，采收。
[0057] 上述营养颗粒的制备方法如下：a、称取以下重量份的原料：畜禽粪便25、蚯蚓粪 8、菜籽饼12、中药渣6、椰壳粉4、咖啡渣3. 5、蹄角粉2. 5、骨粉2、炉渣灰2、沙漠砂10、紫砂 岩15、浮石8、绿泥石6、烟草粉4、蓖麻叶粉3、茶枯粉3. 5、桉叶油2、竹醋液5、废糖蜜4、沼 气废液3. 5、营养液12 ;b、取沙漠砂、紫砂岩、浮石、绿泥石混合均匀，粉碎，过80目筛，820°C 煅烧1. 5h，自然冷却至室温，待用；c、取畜禽粪便、蚯蚓粪、菜籽饼、中药渣、椰壳粉、咖啡 渣、蹄角粉、骨粉、炉渣灰混合均匀，再加入适量的水充分搅拌均匀，控制含水量为55%，在 30°C下堆肥发酵6天，然后加入竹醋液、废糖蜜和沼气废液，搅拌均匀，在28°C下继续发酵4 天，最后加入营养液，搅拌均匀，在26°C下继续发酵3天，发酵完成后将发酵料低温烘干，粉 碎，过100目筛，待用；d、将上述过筛的发酵料与步骤b制得的粉末混合均匀，再加入余下原 料，搅拌均匀，制粒，烘干即可。
[0058] 上述营养液是含有以下浓度成分的水溶液：磷酸二氢铵8g/L、过磷酸钙4g/L、尿 素3g/L、硫酸铜2. 5mg/L、氯化猛5mg/L、硫酸亚铁40mg/L、钥酸钠2mg/L、硼酸1. 5mg/L、腐 植酸钾2g/L、浒苔硒多糖10mg/L。
[0059] 实施例2 :杏鲍菇的硒成分测定方法 [0060] (1)杏鲍菇子实体含硒量的测定
[0061] 将生长完整的子实体标记放好，作为样品，将样品先除杂蒸馏水冲洗三次，50°C烘 干，冷却粉碎研磨称量，因为本次试验中，所得样品烘干后质量较少，所以称取量也酌情减 少，精确称取〇. 25样品细粉，加入加入体积比HN03 :HC103 = 2:1组成的混合酸液5ml，浸泡 溶解，水浴锅l〇〇°C水浴，直到其中粉末完全溶解，混酸液澄清，酸液稀释至50ml，取10ml稀 释液，放入锥形瓶中，加入5% EDTA-2Na5ml混合，然后以稀硝酸调节pH至2,加入1 %的邻 苯二胺溶液3ml摇晃震荡一分钟，放置2h后，甲苯10ml萃取震摇lmin，取甲苯层在335nm 处测吸光度；
[0062] (2)标准硒溶液吸光度测定
[0063] 亚硒酸钠以10% HN03100ml溶解，取10ml液体以250ml容量瓶10% ΗΝ03稀释到 250ml，得到4ug/ml的标准硒溶液；随后分别从标准硒溶液中，取0ml、4ml、8ml、12ml、16ml、 20ml、24ml、30ml硒标准液，以容量瓶和10% HN03稀释定容到50ml ;取10ml稀释液，放入锥 形瓶中，加入5% EDTA-2Na5ml混合，然后以稀硝酸调节pH至2,加入1%的邻苯二胺溶液 3ml摇晃震荡一分钟，放置2h后，甲苯10ml萃取震摇lmin，取甲苯层在335nm处测吸光度， 做出标准线性曲线（图1);取0, 0. 2, 0. 4, 0. 6, 0. 8, 1. 0,1. 2, 1. 4mL硒标准应用液于大试管 中，相当与分别含硒〇, 1，2, 3, 4, 5, 6, 7. 8,经样品消化和硒含量测定步骤后，得到其335nm 处的吸收值，以硒含量为横坐标，吸收值为纵坐标作图。以335nm处的吸收值Y对含量X进 行回归，得到回归方程为：Υ = 〇· 2027Χ-0. 1654, R = 0· 9127。
[0064] (3)硒含量的分析
[0065] 将子实体中测得的吸光度带入标准硒溶液吸光度的线性曲线方程中，可得到硒元 素含量达到了 600ug/g，并未超过人体极限吸收范围800ug/d中毒界限。
[0066] 实施例3 :杏鲍菇的氨基酸成分测定方法
[0067] (1)杏鲍菇样品前处理
[0068] 将杏鲍菇样品清洗干净，晾干，分离菌柄和菌盖，将菌柄和菌盖分别放入 DHG-9240A型电热恒温鼓风干燥箱中110°C干燥至恒重，冷却，置于研钵中研磨成细粉状， 过60目筛，贮于干燥器内备用；
[0069] (2)氨基酸含量测定
[0070] 将上述不同的实验材料碾碎，过80目筛，准确称取分析样品100mg，放入水解管， 向管内加6mol/L盐酸15-20ml，抽真空，充2000g/m 2的高纯度氮气，如此重复3次，在氮气 状态下将管口封住并置于ll〇°C水解22h后取出冷却，水解液过滤，用去离子水冲洗，再全 部转移到l〇〇mL容量瓶，定容，吸取滤液lml放到10mL小烧杯中，在ZK-82A型真空干燥箱 内，60°C、0. 08MPa下干燥，用lmLO. lmol/L盐酸溶解上机检测，见表1 ;
【权利要求】
1. 一种富硒杏鲍菇的裁培方法，其特征在于包括以下步骤： (1) 配制培养基：a、称取以下重量份的原料：玉米芯40-50、杂木屑25-35、麸皮15-20、 营养颗粒5-10、石灰1-2、白糖1-2、石膏粉0. 5-1、亚硒酸钠0. 0001-0. 0002 ;b、将无霉变的 玉米芯粉碎成黄豆粒大小，待用；c、取亚硒酸钠和白糖混合均匀，然后加入适量的水中在拌 和机中搅拌l_2min使之充分溶解，然后加入玉米芯、杂木屑、麸皮、营养颗粒、石灰、石膏粉 搅拌4-6min，使培养料充分吸收水份；d、将拌匀后的培养基在水泥地面摊放24-36h，中间 翻堆1-2次； (2) 装袋：将培养基装入17 X 33厘米聚丙烯袋，每袋装培养基1. 5-2. 0公斤，装袋时压 实，上好颈圈，塞上硅胶塞，并用打孔器在菌袋上打8-10厘米深的孔； ⑶灭菌：高压灭菌，压力为〇· 1-0. 2MPa，时间为2-3h，待压力表指针降到0时出锅； (4) 接种：待到袋温冷却到45°C以下时接种，抽出袋中塑料棒，在孔洞中加入谷粒菌 种； (5) 发菌：发菌在培养室进行，温度23-25°C，湿度65-70%，时间25-27天； (6) 催蕾：将菌棒移入燕房出燕架上培养，用打孔器在菌袋上打若干个0. 4-0. 6cm深的 孔，温度23-25°C，湿度80-85 %，培养三天；再在温度12-15°C，湿度85-90 %，用光照强度 700-8001ux，培养 7-10 天现蕾； (7) 出菇：待菇蕾长到黄豆大小时，选留2-3个生长健壮菇蕾；二天后选留1-2个菇朵 形好的小菇留下培养；待菇长到如乒乓球大小时，提高湿度到90-95%，加大通风量，每天 3- 4 次，每次 30_40min ; (8) 采收：待菌盖直径4-6cm，菌柄长10-12cm时，菌盖平展，边缘向内稍卷，菌褶初步形 成，但未弹射孢子，有7-8分成熟时，米收。
2. 根据权利要求1所述的富硒杏鲍菇的裁培方法，其特征在于，所述营养颗粒的制备 方法如下：a、称取以下重量份的原料：畜禽粪便20-30、蚯蚓粪5-10、菜籽饼10-15、中药渣 4- 8、椰壳粉3-6、咖啡渣2. 5-4. 5、蹄角粉2-3、骨粉2-3、炉渣灰1. 5-2. 5、沙漠砂8-12、紫砂 岩10-15、浮石5-10、绿泥石4-8、烟草粉3-5、蓖麻叶粉2-4、茶枯粉2. 5-4. 5、桉叶油1-3、竹 醋液4-6、废糖蜜3-5、沼气废液2. 4-4. 5、营养液10-15 ;b、取沙漠砂、紫砂岩、浮石、绿泥石 混合均匀，粉碎，过50-100目筛，780-840°C煅烧l_2h，自然冷却至室温，待用；c、取畜禽粪 便、蚯蚓粪、菜籽饼、中药渣、椰壳粉、咖啡渣、蹄角粉、骨粉、炉渣灰混合均匀，再加入适量的 水充分搅拌均匀，控制含水量为50-60%，在28-32°C下堆肥发酵5-7天，然后加入竹醋液、 废糖蜜和沼气废液，搅拌均匀，在25-30°C下继续发酵3-6天，最后加入营养液，搅拌均匀， 在24-28°C下继续发酵2-4天，发酵完成后将发酵料低温烘干，粉碎，过50-100目筛，待用； d、将上述过筛的发酵料与步骤b制得的粉末混合均匀，再加入余下原料，搅拌均匀，制粒， 烘干即可。
3. 根据权利要求2所述的富硒杏鲍菇的裁培方法，其特征在于，所述营养液是含有以 下浓度成分的水溶液：磷酸二氢铵5-10g/L、过磷酸興3-6g/L、尿素2-4g/L、硫酸铜2-3mg/ L、氯化猛4-8mg/L、硫酸亚铁30-50mg/L、钥酸钠2-3mg/L、硼酸l-2mg/L、腐植酸钾l-2g/L、 浒苔硒多糖l〇-15mg/L。
4. 如权利要求1所述的富硒杏鲍菇的成分检测方法。
5. 根据权利要求4所述的富硒杏鲍菇的成分检测方法，其特征在于，所述杏鲍菇的硒 成分测定方法如下： (1) 杏鲍菇子实体吸光度测定 将生长完整的子实体标记放好，作为样品，将样品先除杂蒸馏水冲洗三次，50°C烘干， 冷却粉碎研磨称量，因为本次试验中，所得样品烘干后质量较少，所以称取量也酌情减少， 精确称取〇. 25样品细粉，加入体积比HN03 :HC103 = 2:1组成的混合酸液5ml，浸泡溶解， 水浴锅l〇〇°C水浴，直到其中粉末完全溶解，混酸液澄清，酸液稀释至50ml，取10ml稀释液， 放入锥形瓶中，加入5% EDTA-2Na5ml混合，然后以稀硝酸调节pH至2,加入1 %的邻苯二胺 溶液3ml摇晃震荡一分钟，放置2h后，甲苯10ml萃取震摇lmin，取甲苯层在335nm处测吸 光度； (2) 标准硒溶液吸光度测定 亚硒酸钠以10 % HN03100ml溶解，取10ml液体以250ml容量瓶10 % HN03稀释到 250ml，得到4ug/ml的标准硒溶液；随后分别从标准硒溶液中，取0ml、4ml、8ml、12ml、16ml、 20ml、24ml硒标准液，以容量瓶和10% HN03稀释定容到50ml ;取10ml稀释液，放入锥形 瓶中，加入5% EDTA-2Na5ml混合，然后以稀硝酸调节pH至2,加入1 %的邻苯二胺溶液3ml 摇晃震荡一分钟，放置2h后，甲苯10ml萃取震摇lmin，取甲苯层在335nm处测吸光度，做出 标准线性曲线； (3) 硒含量的分析 将子实体中测得的吸光度带入标准硒溶液吸光度的线性曲线方程中，可得到硒元素的 具体含量。
6. 根据权利要求4所述的富硒杏鲍菇的成分检测方法，其特征在于，所述杏鲍菇的氨 基酸成分测定方法如下： (1) 杏鲍菇样品前处理 将杏鲍菇样品清洗干净，晾干，分离菌柄和菌盖，将菌柄和菌盖分别放入DHG-9240A型 电热恒温鼓风干燥箱中ll〇°C干燥至恒重，冷却，置于研钵中研磨成细粉状，过60目筛，贮 于干燥器内备用； (2) 氨基酸含量测定 将上述不同的实验材料碾碎，过80目筛，准确称取分析样品100mg，放入水解管，向管 内加6mol/L盐酸15-20ml，抽真空，充2000g/ m2的高纯度氮气，如此重复3次，在氮气状态 下将管口封住并置于ll〇°C水解22h后取出冷却，水解液过滤，用去离子水冲洗，再全部转 移到100mL容量瓶，定容，吸取滤液lml放到10mL小烧杯中，在ZK-82A型真空干燥箱内， 60°C、0. 08MPa下干燥，用lmLO. lmol/L盐酸溶解上机检测； (3) 游离氨基酸测定 称取样品〇. l〇〇g，投入试管内，用80%乙醇置于80°C水浴中提取，目的是蒸馏去酒精， 等样品呈现糊状，加乙醚5ml，马上塞试管塞，充分振荡，用50mL分液漏斗反复抽提2次，收 集，转到50mL容量瓶中，定容至刻度，摇匀；取5mL提取液，冷冻离心干燥，加进0. 02mol/L HCllml，用日立835-50A型氨基酸自动分析仪测定其含量。
7. 根据权利要求4所述的富硒杏鲍菇的成分检测方法，其特征在于，所述杏鲍菇的总 糖成分测定方法如下： (1)杏鲍菇样品预处理 将供试杏鲍菇样品剪成长、宽约5cm小块，在105°C干燥箱中烘干至发脆，冷却后立 即用研磨器研磨，研磨后的样品过80目筛，未能过筛部分经钵内研磨后再次过筛，直至全 部样品过筛为止； (2) 杏鲍菇总糖的提取 将经过研磨预处理的杏鲍菇样品0. 25g加入100mL蒸馏水中，再加入30ml浓盐酸 100°C水浴水解3h ;水解后冷却用漏斗过滤，以蒸馏水定容至250ml备用； (3) 苯酚硫酸法标准曲线的制作 标准储备液的配制：精密称取105°C干燥至恒重的D-无水葡萄糖0. 1000g置于100ml 容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度摇匀，即配得lmg/ml的的葡萄糖标准储备溶液备用； 标准曲线的制备：精密吸取葡萄糖标准储备液0. 5、1. 0、1. 5、2. 0、2. 5、3. 0和3. 5ml， 分别置于50ml容量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得10. 0、20. 0、30. 0、40. 0、50. 0、60. 0和 70. 0 μ g/ml的标准葡萄糖使用液；取20ml刻度试管8支，从0-7分别编号，各取2ml不同 浓度的葡萄糖标准溶液分别加入对应的试管中，然后按顺序向试管内加入1. 0ml6%苯酚溶 液，摇匀，再从管液正面以5-20s时间加入5. 0ml浓硫酸，摇匀冷却室温放置15-20分钟，以 2. 0ml蒸馏水取代标准葡萄糖使用液，根据标准曲线制备方法显色后作为空白，在485nm波 长下比色测定，以糖含量为横坐标，光密度为纵坐标，绘制标准曲线，求出标准直线方程。
【文档编号】G01N5/00GK104137733SQ201410166498
【公开日】2014年11月12日 申请日期:2014年4月23日 优先权日:2014年4月23日
【发明者】李能树, 何炎炘, 张志强 申请人:安徽大学, 阜南县健生源食用菌开发有限公司