一种治疗消渴病的药物制剂的检测方法
【专利摘要】本发明属于中药制剂质量检测领域，具体涉及一种治疗消渴病的药物制剂的检测方法，该药物制剂的原料药组成为：蚕沙6000-8000重量份以及甘草100-200重量份；该检测方法通过HPLC法测定1-脱氧野尻霉素的含量对所述药物制剂进行检测。本发明的检测方法快速、全面、针对性强，有利于对该药物的质量进行有效控制，有助于提高该药物使用的安全性和稳定性。
【专利说明】一种治疗消渴病的药物制剂的检测方法
【技术领域】
[0001]本发明属于中药制剂检测领域，具体涉及一种治疗消渴病的药物制剂的检测方法。
【背景技术】
[0002]目前，全球范围内，消渴病(糖尿病)的患者约为2亿多，其中85%的患者为老年糖尿病患者，并且发病率有日益增加的趋势；我国是世界上的糖尿病患者人数最多的国家之一，仅次于美国。糖尿病严重威胁着人类的健康甚至生命。
[0003]中国专利CN101496829A公开了一种治疗消渴病的药物组合物，该药物组合物的原料药主要由蚕沙和甘草组成，处方中的蚕沙具有祛风除湿，活血定痛的功效，该药物组合物具有较好的降血糖的作用，对治疗消渴症具有较好的疗效。该文献中还公开了通过TLC法检测β -谷留醇、HPLC法检测甘草酸单铵以及HPLC法检测派可林酸等方法对该药物组合物进行质量控制。
[0004]但是，随着对该药物的深入研究,临床试验结果显示,该药物组合物治疗糖尿病的有效物质主要是蚕沙中含有的生物碱，具有显著抑制a_葡萄糖苷酶活性的功效，并且所述生物碱的主要活性成分为1-脱氧野尻霉素。然而现有的质量控制标准及检测方法均是仅针对其中含有的派可林酸进行测定，不仅检测的指标较为单一，而且也不利于从整体上对该药物的质量进行有效控制。因此，建立一种可快速、全面、针对性强的上述药物组合物的质量检测及质量控制的方法具有重要的意义。
【发明内容】
[0005]为此，本发明所要解决的是现有的治疗消渴病的药物组合物的检测方法存在检测指标单一、不利于对该药物的质量进行有效控制的问题，从而提出一种可快速、全面、针对性的对所述治疗消渴症的药物组合物进行检测的方法。
[0006]为解决上述技术问题，本发明通过以下技术方案来实现:
[0007]本发明的一种治疗消渴病的药物制剂的检测方法，所述药物制剂的原料药组成为:蚕沙6000-8000重量份以及甘草100-200重量份；
[0008]该检测方法包括如下对1-脱氧野尻霉素的含量测定步骤:
[0009]精密称定1-脱氧野尻霉素对照品5-15mg,加水稀释制成每mL含0.1-0.5mg的对照品储备液；精密量取ImL所述对照品储备液，并精密加入质量浓度为1-3%的NaHCO3溶液l-4mL以及l-3mg/mL的芴甲氧羰酰氯乙腈溶液l_4mL，混匀并于30_60°C进行水浴反应20-40min，随后以30-60%的乙腈定容至20_30mL，作为对照品溶液；
[0010]取待测药物制剂研细，并精密称取0.5-2.0g，加入用浓盐酸调pH值为3-4的水30-60mL,搅拌均匀，超声处理20-30min，并离心取上清液；残渣加pH值为3_4的水适量洗涤，离心合并上清液，并浓缩至10-20mL ;将浓缩液置于阳离子交换树脂柱，先用水洗脱，收集并弃去水洗脱液，再用0.5M氨水洗脱，并收集氨水洗脱液，浓缩至近干，随后加水IOmL溶解，超声处理1-5分钟，并加水定容至20-30mL，得到供试品储备液；精密量取ImL所述供试品储备液，依次加入质量浓度为1-3 %的NaHCO3溶液lmL、以及l_3mg/mL的芴甲氧羰酰氯乙腈溶液4mL，混匀并于30°C进行水浴反应40min，随后以30-60%的乙腈定容至20_30mL，作为供试品溶液；
[0011]照高效液相色谱法，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙睛为流动相A、以0.2%的磷酸溶液为流动相B按照如下程序进行梯度洗脱:0-8min，A:B为25%:75% ；8-40min, A:B 为 25%:75%— 50%:50% ；40-45min, A:B 为 50%:50% ;45_46min，A:B 为50%:50%^ 25%:75% ；46-75min, A:B 为 25%:75% ;控制流速 1.0mL/min，柱温 25°C，检测波长263nm，理论板数按1-脱氧野尻霉素峰计算应不低于6000 ；
[0012]精密吸取所述对照品溶液和供试品溶液各20 μ L，注入液相色谱仪，测定。
[0013]本发明上述治疗消渴病的药物制剂的检测方法，所述对1-脱氧野尻霉素的含量进行测定步骤包括:
[0014]精密称定1-脱氧野尻霉素对照品IOmg,加水稀释制成每mL含0.2mg的对照品储备液；精密量取ImL所述对照品储备液，并精密加入质量浓度为2%的NaHCO3溶液2mL以及2mg/mL的芴甲氧羰酰氯乙腈溶液2mL，混匀并于50°C进行水浴反应40min，随后以30%的乙腈定容至25mL，作为对照品溶液；
[0015]取待测药物制剂研细，并精密称取lg，加入用浓盐酸调PH值为3-4的水50mL，搅拌均匀，超声处理30min，并离心取上清液；残渣加pH值为3_4的水适量洗涤，离心合并上清液，并浓缩至IOmL ;将浓缩液置于阳离子交换树脂柱，先用水洗脱，收集并弃去水洗脱液，再用0.5M氨水洗脱，并收集氨水洗脱液，浓缩至近干，随后加水IOmL溶解，超声处理I分钟，并加水定容至25mL，得到供试品储备液；精密量取ImL所述供试品储备液，依次加入质量浓度为2%的NaHCO3溶液lmL、以及lmg/mL的芴甲氧羰酰氯乙腈溶液4mL，混匀并于50°C进行水浴反应40min，随后以30%的乙腈定容至25mL，作为供试品溶液；
[0016]照高效液相色谱法，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙睛为流动相A、以0.2%的磷酸溶液为流动相B按照如下程序进行梯度洗脱:0-8min，A:B为25%:75% ；8-40min, A:B 为 25%:75%— 50%:50% ；40-45min, A:B 为 50%:50% ;45_46min，A:B 为50%:50%^ 25%:75% ；46-75min, A:B 为 25%:75% ;控制流速 1.0mL/min，柱温 25°C，检测波长263nm，理论板数按1-脱氧野尻霉素峰计算应不低于6000 ；
[0017]精密吸取所述对照品溶液和供试品溶液各20 μ L，注入液相色谱仪，测定。
[0018]本发明上述治疗消渴病的药物制剂的检测方法，上述1-脱氧野尻霉素的含量测定步骤中，上述阳离子交换树脂柱为DOOl-CC型阳离子交换树脂柱，树脂体积为50mL，径高比为1:8。
[0019]本发明上述治疗消渴病的药物制剂的检测方法，还包括将上述阳离子交换树脂进行前处理的步骤，前处理具体包括如下步骤:用等体积的2M盐酸浸泡DOOl-CC型离子交换树脂4小时以上；再用4倍树脂体积的2M盐酸冲洗树脂，水洗至中性；用5倍树脂体积的2M NaOH溶液冲洗树脂，水洗至中性；用5倍树脂体积的2M盐酸溶液冲洗树脂，水洗至中性；用5倍树脂体积的2M NaOH溶液冲洗树脂，水洗至中性；用3倍树脂体积的2M盐酸溶液冲洗树脂，水洗至中性，即可。
[0020] 本发明上述治疗消渴病的药物制剂的检测方法，上述1-脱氧野尻霉素的含量测定步骤中，上述超声处理的条件为:功率300W，频率50KHz。
[0021]本发明上述治疗消渴病的药物制剂的检测方法，该方法还包括如下鉴别和/或含量测定的步骤中的至少一种:
[0022]A、TLC 鉴别
[0023]取所述待测药物制剂0.4-0.8g，加无水乙醇3_8mL，于60_90°C水浴回流20_40分钟，静置取上清液，置水浴上蒸至0.5-2.0mL，作为供试品溶液；
[0024]另取β -谷甾醇对照品，加无水乙醇制成每ImL中含0.5-2.0mg的对照品溶液；
[0025]照薄层色谱法试验，精密吸取上述两种供试品溶液和对照品溶液各1-3 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为18-19.8:0.2-2.0的三氯甲烷:丙酮为展开剂，展开、取出、晾干，喷以5-15%磷钥酸溶液，于100-110°C显色进行鉴别；
[0026]B、HPLC法测定甘草酸单铵盐的含量
[0027]精密称定甘草酸单铵盐对照品5_15mg，以体积比为50-70:30-50:0.5-1.5的甲醇-0.2mol/L醋酸铵-冰醋酸混合溶液溶解并稀释至50mL，作为对照品溶液；
[0028]取待测药物制剂1-3克，加入体积比为50-70:30_50:0.5-1.5的甲醇-0.2mol/L醋酸铵-冰醋酸混合溶液，超声处理30分钟，放冷后继续加入所述混合溶液定容至25mL，离心取上清液，作为供试品溶液；
[0029]照高效液相色谱法试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比为50-70:30-50:0.5-1.5的甲醇-0.2mol/L醋酸铵-冰醋酸为流动相，检测波长为250nm ;理论板数按甘草酸铵峰计算应不低于2000 ；
[0030]分别精密吸取所述对照品溶液与供试品溶液各5-15 μ L，注入液相色谱仪，测定；
[0031]C、HPLC法测定派可林酸的含量
[0032]精密称定派可林酸对照品3-8mg，加水稀释定容至50mL ;精密量取0.5-2.0mL溶液，依次加水0.5-2.0mL、加质量浓度为0.8%的2，4- 二硝基氟苯乙腈溶液l_3mL以及0.5mol/L的碳酸氢钠溶液l_3mL，于60_90°C水浴反应0.5-2.0小时，放冷后用pH7.0、0.2mol/L的磷酸盐缓冲液定容至10mL，作为对照品溶液；
[0033]精密称定待测药物制剂0.3-0.8g，加水振摇后，于60_90°C水浴中加热20_40分钟，放冷后加水定容至10mL，摇匀并离心后，精密量取上清液l_3mL，并依次加入质量浓度为0.8%的2，4-二硝基氟苯乙腈溶液l-3mL和0.5mol/L的碳酸氢钠溶液l_3mL，于60_90°C水浴反应0.5-2.0小时，放冷后用pH7.0,0.2mol/L的磷酸盐缓冲液定容至10mL，作为供试品溶液；
[0034]照高效液相色谱法试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比为15-25:0.1-1:75-85的乙腈-二甲基甲酰胺-0.025mol/L醋酸钠溶液为流动相，检测波长为390nm ;理论板数按派可林酸峰计算应不低于2500 ；
[0035]分别精密吸取对照品溶液4-6 μ L与供试品溶液5-15 μ L，注入液相色谱仪，测定。
[0036]本发明上述治疗消渴病的药物制剂的检测方法，该方法还包括如下鉴别和/或含量测定的步骤中的至少一种:
[0037]A、TLC 鉴别
[0038]取所述待测药物制剂0.5g，加无水乙醇5mL，于60°C水浴回流30分钟，静置取上清液，置水浴上蒸至lmL，作为供试品溶液；[0039]另取β -谷甾醇对照品，加无水乙醇制成每ImL中含Img的对照品溶液；
[0040]照薄层色谱法试验，精密吸取上述两种供试品溶液和对照品溶液各2 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为19.5:0.5的三氯甲烷:丙酮为展开剂，展开、取出、晾干，喷以10%磷钥酸溶液，于105°C显色进行鉴别；
[0041]B、HPLC法测定甘草酸单铵盐的含量
[0042]精密称定甘草酸单铵盐对照品10mg，以体积比为60:40:1的甲醇-0.2mol/L醋酸铵-冰醋酸混合溶液溶解并稀释至50mL，作为对照品溶液；
[0043]取待测药物制剂2.0克，加入体积比为60:40:1的甲醇-0.2mol/L醋酸铵-冰醋酸混合溶液，超声处理30分钟，放冷后继续加入所述混合溶液定容至25mL，离心取上清液，作为供试品溶液；
[0044]照高效液相色谱法试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比为60:40:I的甲醇-0.2mol/L醋酸铵-冰醋酸为流动相，检测波长为250nm ;理论板数按甘草酸铵峰计算应不低于2000 ；
[0045]分别精密吸取所述对照品溶液与供试品溶液各10 μ L，注入液相色谱仪，测定；
[0046]C、HPLC法测定派可林酸的含量
[0047]精密称定派可林酸对照品5mg，加水稀释定容至50mL ;精密量取ImL溶液，依次加水lmL、加质量浓度为0.8%的2，4- 二硝基氟苯乙腈溶液2mL以及0.5mol/L的碳酸氢钠溶液2mL，于60°C水浴反应I小时，放冷后用pH7.0,0.2mol/L的磷酸盐缓冲液定容至10mL，作为对照品溶液；
[0048]精密称定待测药物制剂0.4g，加水振摇后，于60°C水浴中加热30分钟，放冷后加水定容至10mL，摇匀并离心后，精密量取上清液2mL，并依次加入质量浓度为0.8%的2，4- 二硝基氟苯乙腈溶液2mL和0.5mol/L的碳酸氢钠溶液2mL，于60°C水浴反应I小时，放冷后用PH7.0,0.2mol/L的磷酸盐缓冲液定容至10mL，作为供试品溶液；
[0049]照高效液相色谱法试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比为21:0.5:79的乙腈-二甲基甲酰胺-0.025mol/L醋酸钠溶液为流动相，检测波长为390nm ;理论板数按派可林酸峰计算应不低于2500 ；
[0050]分别精密吸取对照品溶液5 μ L与供试品溶液10 μ L，注入液相色谱仪，测定。
[0051]本发明所述治疗消渴病的药物制剂的相关处方及制备方法以及已经公开的检测方法详见中国专利CN101496829A所公开的内容。
[0052]本发明所述药物制剂的原料药组成为:蚕沙7150重量份以及甘草137.5重量份；或蚕沙6150重量份以及甘草187.5重量份；或蚕沙7850重量份以及甘草117.5重量份。
[0053]本发明上述治疗消渴病的药物制剂的检测方法，上述药物制剂由如下方法制备:取选定重量份的蚕沙加入2-6倍量50-70%乙醇，浸溃过夜，缓慢加热至沸，回流1-3次，每次0.5-1.5小时，滤过，合并滤液，回收乙醇，浓缩至相对密度为0.95-1.10，加入I倍量水继续加热至沸，冷却，放置过夜，取上清液，浓缩至相对密度为1.00-1.15的稠膏Α，备用；另取选定重量份的甘草加8-15倍量水煎煮1-3次，每次1-3小时，合并滤液，放置过夜使沉淀，取上清液浓缩至相对密度为1.00-1.15的稠膏B，备用；合并上述稠膏A和B，加入常规辅料、按照常规工艺制成临床可接受的剂型。
[0054]本发明上述治疗消渴病的药物制剂的检测方法，上述药物制剂由如下方法制备:取选定重量份的蚕沙加入4倍量60%乙醇，浸溃过夜，缓慢加热至沸，回流两次，每次I小时,滤过,合并滤液，回收乙醇,浓缩至相对密度为1.01-1.06，加入I倍量水继续加热至沸，冷却，放置过夜，取上清液，浓缩至相对密度为1.06-1.15的稠膏，备用；另取选定重量份的甘草加10倍量水煎煮2次，每次2小时，合并滤液，放置过夜使沉淀,取上清液浓缩至相对密度为1.04-1.15稠膏，备用；合并上述两稠膏，加入常规辅料、按照常规工艺制成临床可接受的剂型。
[0055]本发明上述治疗消渴病的药物制剂的检测方法，上述治疗消渴病的药物制剂为片齐?、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、蜜炼丸剂、缓释制剂、速释制剂、控释制剂、口服液体制剂或注射制剂。
[0056]本发明上述治疗消渴病的药物制剂的检测方法，通过HPLC法测定1-脱氧野尻霉素的含量。该检测方法快速、全面、针对性强，有利于对该药物的质量进行有效控制，有助于提高该药物使用的安全性和稳定性。
【专利附图】
【附图说明】
[0057]为了使本发明的内容更容易被清楚的理解，下面根据本发明的具体实施例并结合附图，对本发明作进一步详细的说明，其中
[0058]图1是本发明实施例2中的1-脱氧野尻霉对照品色谱图；
[0059]图2是本发明实施例2中的缺蚕沙阴性色谱图；
[0060]图3是本发明实施例2中的实施例1制备所得的胶囊样品色谱图；
[0061]图4是本发明实施例2中的试剂空白色谱图；
[0062]图5是本发明实施例2中的1-脱氧野尻霉素标准曲线图。
【具体实施方式】
[0063]实施例1胶囊剂的制备
[0064]【处方】香沙7.15kg和甘草137.5g。
[0065]【制法】以上2味，取蚕沙加入4倍量60%乙醇，浸溃过夜，缓慢加热至沸，回流两次，每次I小时，滤过，合并滤液，回收乙醇，浓缩至相对密度为1.01 - 1.06(55°C )，加入I倍量水继续加热至沸，冷却，放置过夜，取上清液，浓缩至相对密度为1.06-1.15(55°C测)的稠膏，备用。另取甘草用10倍量水煎煮2次，每次2小时，合并滤液，放置过夜使沉淀，取上清液浓缩至相对密度为1.04-1.15 (55°C测)稠膏，备用。合并两稠膏，按常规方法加入常规辅料制成1000粒，即得。
[0066]实施例2HPLC法测定1-脱氧野尻霉素的含量
[0067]I仪器与试药
[0068]Agilent-1200高效液相色谱仪包括:真空脱气机，四元梯度泵，自动进样器，二级管阵列检测器(DAD), Agilent-Chemistation数据处理系统(Agilent公司)；超纯水器(MilliQ-Gradient型);超声波发生器(昆山KQ-300E型)。
[0069]1-脱氧野尻霉素对照品(购于SIGMA公司)，芴甲氧羰酰氯(购于SIGMA公司)，乙腈为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。
[0070]2方法与结果[0071]2.1对照品溶液、供试品溶液与1-脱氧野尻霉素阴性样品溶液的制备
[0072]2.1.1对照品溶液的制备
[0073]取1-脱氧野尻霉素对照品约10mg，精密称定，置50mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，制成每HiL含0.2mg的对照品溶液。精密量取lmL，至25mL量瓶中，加入2% NaHCO3溶液2mL,振摇10秒,精密加入2mg/mL的荷甲氧羰酰氯乙腈溶液(FMOC-Cl) 2mL,振摇10秒，50°C水浴反应40min，用30%乙腈定容至25mL，即得。
[0074]2.1.2供试品溶液的制备
[0075]DOOl-CC型阳离子交换树脂的前处理:顺次用等体积的2M盐酸浸泡DOOl-CC型离子交换树脂4小时以上，再用4倍树脂体积的2M盐酸冲洗树脂，水洗至中性；用5倍树脂体积的2M NaOH溶液冲洗树脂，水洗至中性；用5倍树脂体积的2M盐酸溶液冲洗树脂，水洗至中性；用5倍树脂体积的2M NaOH溶液冲洗树脂，水洗至中性；再用3倍树脂体积的2M盐酸溶液冲洗树脂，水洗至中性，备用。
[0076]取实施例1制备所得的胶囊剂的内容物研细，取约lg，精密称定，置IOOmL烧杯中，加用浓盐酸调PH值为3-4的水50mL，搅拌均匀，超声处理(功率300W，频率50KHz) 30min,离心10min (4000转/min)，分取上清液，残渣加pH值为3_4的水适量洗涤，离心10min (4000转/min)，合并上清液，浓缩至约10mL。置已处理过的DOOl-CC型阳离子交换树脂柱(树脂体积50mL,径(2.5cm)高比:1:8，H+)，先用60mL水洗脱，弃去洗脱液，再用0.5M氨水600mL洗脱(洗脱速度为2.5mL/min)，收集氨水洗脱液，浓缩至近干，加水10mL，超声处理(功率300W，频率50KHz)l分钟，转移到25mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀。精密量取lmL，至25mL量瓶中，加入2% NaHCO3溶液lmL，振摇10秒，精密加入lmL/min的芴甲氧羰酰氯乙腈溶液(FMOC-Cl) 4mL，振摇10秒，50°C水浴反应40min，用30%乙腈定容至25mL，即得。
[0077]2.1.3阴性样品溶液的制备
[0078]按实施例1的处方取甘草药材，按2.1所列供试品溶液的制备方法制备不含蚕沙的阴性样品溶液。
[0079]2.1.4空白样品溶液制备
[0080]按照2.1所列供试品溶液的制备方法，制备不含所述供试品的空白样品溶液。
[0081]2.1.5空白试验
[0082]用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；选用Agilent Hypersil 0DS-C18色谱柱(4.0mmX 250mm，5 μ m)，二级管阵列检测器(检测波长263nm);流动相:乙睛-0.2%磷酸溶液；流速:1.0mL/min，进样量20 μ L，理论板数(按1_脱氧野尻霉素峰计算)应不低于6000。梯度洗脱如下:
[0083]
【权利要求】
1.一种治疗消渴病的药物制剂的检测方法，其特征在于，所述药物制剂的原料药组成为:蚕沙6000-8000重量份以及甘草100-200重量份； 该检测方法包括如下对1-脱氧野尻霉素的含量测定步骤: 精密称定1-脱氧野尻霉素对照品5-15mg,加水稀释制成每mL含.0.1-0.5mg的对照品储备液；精密量取ImL所述对照品储备液，并精密加入质量浓度为.1-3%的NaHCO3溶液l-4mL以及l-3mg/mL的芴甲氧羰酰氯乙腈溶液l_4mL，混匀并于.30_60°C进行水浴反应.20-40min，随后以30-60%的乙腈定容至20_30mL，作为对照品溶液； 取待测药物制剂研细，并精密称取0.5-2.0g，加入用浓盐酸调pH值为3-4的水.30-60mL,搅拌均匀，超声处理20-30min，并离心取上清液；残渣加pH值为3_4的水适量洗涤，离心合并上清液，并浓缩至10-20mL ;将浓缩液置于阳离子交换树脂柱，先用水洗脱，收集并弃去水洗脱液，再用0.5M氨水洗脱，并收集氨水洗脱液，浓缩至.近干，随后加水IOmL溶解，超声处理1-5分钟，并加水定容至20-30mL，得到供试品储备液；精密量取ImL所述供试品储备液，依次加入质量浓度为1-3%的NaHCO3溶液lmL、以及.l_3mg/mL的芴甲氧羰酰氯乙腈溶液4mL，混匀并于30°C进行水浴反应40min，随后以30-60%的乙腈定容至20_30mL，作为供试品溶液； 照高效液相色谱法，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙睛为流动相A、以0.2%的磷酸溶液为流动相B按照如下程序进行梯度洗脱:0-8min，A:B为.25%:75% ；8-40min,A:B 为 25 %:75 % — 50 %:50 % ；40-45min, A:B 为 50 %:50 % ;45_46min，A:B 为 50 %:.50%- 25%:75% ；46-75min, A:B 为 25%:75% ;控制流速 .1.0mL/min，柱温 25°C，检测波长263nm，理论板数按1-脱氧野尻霉素峰计算应不低于6000 ； 精密吸取所述对照品溶液和供试品溶液各20 μ L，注入液相色谱仪，测定。
2.根据权利要求1所述的治疗消渴病的药物制剂的检测方法，其特征在于，所述对.1-脱氧野尻霉素的含量进行测定的步骤包括: 精密称定1-脱氧野尻霉素对照品IOmg,加水稀释制成每mL含0.2mg的对照品储备液；精密量取ImL所述对照品储备液，并精密加入质量浓度为2%的NaHCO3溶液2mL以及2mg/mL的芴甲氧羰酰氯乙腈溶液2mL，混匀并于50°C进行水浴反应.40min，随后以30%的乙腈定容至25mL，作为对照品溶液； 取待测药物制剂研细，并精密称取lg，加入用浓盐酸调PH值为3-4的水50mL，搅拌均匀，超声处理30min，并离心取上清液；残渣加pH值为3_4的水适量洗涤，离心合并上清液，并浓缩至IOmL ;将浓缩液置于阳离子交换树脂柱，先用水洗脱，收集并弃去水洗脱液，再用.0.5M氨水洗脱，并收集氨水洗脱液，浓缩至近干，随后加水IOmL溶解，超声处理I分钟，并加水定容至25mL，得到供试品储备液；精密量取ImL所述供试品储备液，依次加入质量浓度为.2%的NaHCO3溶液lmL、以及lmg/mL的芴甲氧羰酰氯乙腈溶液4mL，混匀并于50°C进行水浴反应40min，随后以30%的乙腈定容至25mL，作为供试品溶液； 照高效液相色谱法，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙睛为流动相A、以0.2%的磷酸溶液为流动相B按照如下程序进行梯度洗脱:0-8min，A:B为.25%:75% ；8-40min,A:B 为 25 %:75 % — 50 %:50 % ；40-45min, A:B 为 50 %:50 % ;45_46min，A:B 为 50 %:.50%- 25%:75% ；46-75min, A:B 为 25%:75% ;控制流速 .1.0mL/min，柱温 25°C，检测波长263nm，理论板数按1-脱氧野尻霉素峰计算应不低于6000 ；精密吸取所述对照品溶液和供试品溶液各20 μ L，注入液相色谱仪，测定。
3.根据权利要求1或2所述的治疗消渴病的药物制剂的检测方法，其特征在于，所述1-脱氧野尻霉素的含量测定步骤中，所述阳离子交换树脂柱为D001-CC型阳离子交换树脂柱，树脂体积为50mL，径高比为1:8。
4.根据权利要求3所述的治疗消渴病的药物制剂的检测方法，其特征在于，还包括将所述阳离子交换树脂进行前处理的步骤，所述前处理具体包括如下步骤:用等体积的2M盐酸浸泡D001-CC型离子交换树脂4小时以上；再用4倍树脂体积的2M盐酸冲洗树脂，水洗至中性；用5倍树脂体积的2M NaOH溶液冲洗树脂，水洗至中性；用5倍树脂体积的2M盐酸溶液冲洗树脂，水洗至中性；用5倍树脂体积的2M NaOH溶液冲洗树脂，水洗至中性；用3倍树脂体积的2M盐酸溶液冲洗树脂，水洗至中性，即可。
5.根据权利要求1-4任一所述的治疗消渴病的药物制剂的检测方法，其特征在于，该方法还包括如下鉴别和/或含量测定的步骤中的至少一种: A、TLC鉴别 取所述待测药物制剂0.4-0.8g，加无水乙醇3-8mL，于60_90°C水浴回流20-40分钟，静置取上清液，置水浴上蒸至0.5-2.0mL,作为供试品溶液； 另取β -谷甾醇对照品，加无水乙醇制成每ImL中含0.5-2.0mg的对照品溶液； 照薄层色谱法试验，精密吸取上述两种供试品溶液和对照品溶液各1_3μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为18-19.8:0.2-2.0的三氯甲烷:丙酮为展开剂，展开、取出、晾干，喷以5-15%磷钥酸溶液，于100-110°C显色进行鉴别； B、HPLC法测定甘草酸单铵盐的含量 精密称定甘草酸单铵盐对照品5-15mg，以体积比为50-70:30-50:0.5-1.5的甲醇-0.2mol/L醋酸铵-冰醋酸混合溶液溶解并稀释至50mL，作为对照品溶液； 取待测药物制剂1-3克，加入体积比为50-70:30-50:0.5-1.5的甲醇-0.2mol/L醋酸铵-冰醋酸混合溶液，超声处理30分钟，放冷后继续加入所述混合溶液定容至25mL，离心取上清液，作为供试品溶液； 照高效液相色谱法试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比为50-70:30-50:0.5-1.5的甲醇-0.2mol/L醋酸铵-冰醋酸为流动相，检测波长为250nm ;理论板数按甘草酸铵峰计算应不低于2000 ； 分别精密吸取所述对照品溶液与供试品溶液各5-15 μ L，注入液相色谱仪，测定； C、HPLC法测定派可林酸的含量 精密称定派可林酸对照品3-8mg，加水稀释定容至50mL ;精密量取0.5-2.0mL溶液，依次加水0.5-2.0mL、加质量浓度为0.8%的2，4- 二硝基氟苯乙腈溶液l_3mL以及0.5mol/L的碳酸氢钠溶液l_3mL，于60-90°C水浴反应0.5-2.0小时，放冷后用pH7.0,0.2mol/L的磷酸盐缓冲液定容至10mL，作为对照品溶液； 精密称定待测药物制剂0.3-0.8g，加水振摇后，于60-90°C水浴中加热20-40分钟，放冷后加水定容至10mL，摇匀并离心后，精密量取上清液l_3mL，并依次加入质量浓度为.0.8%的2，4- 二硝基氟苯乙腈溶液l_3mL和0.5mol/L的碳酸氢钠溶液l_3mL，于60_90°C水浴反应0.5-2.0小时，放冷后用pH7.0,0.2mol/L的磷酸盐缓冲液定容至10mL，作为供试品溶液；照高效液相色谱法试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比为15-25:.0.1-1 =75-85的乙腈-二甲基甲酰胺-0.025mol/L醋酸钠溶液为流动相，检测波长为.390nm ;理论板数按派可林酸峰计算应不低于2500 ； 分别精密吸取对照品溶液4-6 μ L与供试品溶液5-15 μ L，注入液相色谱仪，测定。
6.根据权利要求5所述的治疗消渴病的药物制剂的检测方法，其特征在于，该方法还包括如下鉴别和/或含量测定的步骤中的至少一种: A、TLC鉴别 取所述待测药物制剂0.5g，加无水乙醇5mL，于60°C水浴回流30分钟，静置取上清液，置水浴上蒸至lmL，作为供试品溶液； 另取β -谷甾醇对照品，加无水乙醇制成每ImL中含Img的对照品溶液； 照薄层色谱法试验，精密吸取上述两种供试品溶液和对照品溶液各2 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为19.5:0.5的三氯甲烷:丙酮为展开剂，展开、取出、晾干，喷以10%磷钥酸溶液，于105°C显色进行鉴别； B、HPLC法 测定甘草酸单铵盐的含量 精密称定甘草酸单铵盐对照品10mg，以体积比为60:40:1的甲醇-0.2mol/L醋酸铵-冰醋酸混合溶液溶解并稀释至50mL，作为对照品溶液； 取待测药物制剂2.0克，加入体积比为60:40:1的甲醇-0.2mol/L醋酸铵-冰醋酸混合溶液，超声处理30分钟，放冷后继续加入所述混合溶液定容至25mL，离心取上清液，作为供试品溶液； 照高效液相色谱法试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比为60:40:1的甲醇-0.2mol/L醋酸铵-冰醋酸为流动相，检测波长为250nm ;理论板数按甘草酸铵峰计算应不低于2000 ； 分别精密吸取所述对照品溶液与供试品溶液各10 μ L，注入液相色谱仪，测定； C、HPLC法测定派可林酸的含量 精密称定派可林酸对照品5mg，加水稀释定容至50mL ;精密量取ImL溶液，依次加水.lmL、加质量浓度为0.8%的2，4- 二硝基氟苯乙腈溶液2mL以及0.5mol/L的碳酸氢钠溶液.2mL,于60°C水浴反应I小时，放冷后用pH7.0,0.2mol/L的磷酸盐缓冲液定容至10mL，作为对照品溶液； 精S称定待测药物制剂0.4g,加水振摇后，于60 C水浴中加热30分钟，放冷后加水定容至10mL，摇匀并离心后，精密量取上清液2mL，并依次加入质量浓度为0.8%的2，4- 二硝基氟苯乙腈溶液2mL和0.5mol/L的碳酸氢钠溶液2mL，于60°C水浴反应I小时，放冷后用pH7.0,0.2mol/L的磷酸盐缓冲液定容至10mL，作为供试品溶液； 照高效液相色谱法试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比为21:0.5:79的乙腈-二甲基甲酰胺-0.025mol/L醋酸钠溶液为流动相，检测波长为390nm ;理论板数按派可林酸峰计算应不低于2500 ； 分别精密吸取对照品溶液5 μ L与供试品溶液10 μ L，注入液相色谱仪，测定。
7.根据权利要求1-6任一所述的治疗消渴病的药物制剂的检测方法，其特征在于，所述药物制剂的原料药组成为:蚕沙7150重量份以及甘草137.5重量份；或蚕沙6150重量份以及甘草187.5重量份；或蚕沙7850重量份以及甘草117.5重量份。
8.根据权利要求7所述的治疗消渴病的药物制剂的检测方法，其特征在于，所述药物制剂由如下方法制备:取选定重量份的蚕沙加入2-6倍量50-70%乙醇，浸溃过夜，缓慢加热至沸，回流1-3次，每次0.5-1.5小时，滤过，合并滤液，回收乙醇,浓缩至相对密度为0.95-1.10，加入I倍量水继续加热至沸，冷却，放置过夜，取上清液，浓缩至相对密度为1.00-1.15的稠膏A，备用；另取选定重量份的甘草加8-15倍量水煎煮1_3次，每次1_3小时，合并滤液，放置过夜使沉淀，取上清液浓缩至相对密度为1.00-1.15的稠膏B，备用；合并上述稠膏A和B，加入常规辅料、按照常规工艺制成临床可接受的剂型。
9.根据权利要求8所述的治疗消渴病的药物制剂的检测方法，其特征在于，所述药物制剂由如下方法制备:取 选定重量份的蚕沙加入4倍量60%乙醇，浸溃过夜，缓慢加热至沸，回流两次，每次I小时，滤过，合并滤液，回收乙醇，浓缩至相对密度为1.01-1.06，加入I倍量水继续加热至沸，冷却，放置过夜，取上清液，浓缩至相对密度为1.06-1.15的稠膏，备用；另取选定重量份的甘草加10倍量水煎煮2次，每次2小时，合并滤液，放置过夜使沉淀，取上清液浓缩至相对密度为1.04-1.15稠膏，备用；合并上述两稠膏，加入常规辅料、按照常规工艺制成临床可接受的剂型。
10.根据权利要求7-9任一所述的治疗消渴病的药物制剂的检测方法，其特征在于，所述治疗消渴病的药物制剂为片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、蜜炼丸剂、缓释制剂、速释制剂、控释制剂、口服液体制剂或注射制剂。
【文档编号】G01N30/90GK104007205SQ201410264670
【公开日】2014年8月27日 申请日期:2014年6月13日 优先权日:2014年6月13日
【发明者】潘杰, 于娟, 吴丽璇, 陈啟兰 申请人:漳州片仔癀药业股份有限公司