1.一种玻璃化冷冻观察装置,其特征在于,包括:
立式显微镜,所述立式显微镜连接拍摄装置,用于观察和拍摄;
设有中空部的隔离盒,置于所述立式显微镜的置物台上,所述中空部呈圆柱形,包括上下相通的第一中空部和第二中空部,且第一中空部的直径扩大形成第二中空部,使得第二中空部与第一中空部交界处形成环形平台,用于承载观察材料和通过所述立式显微镜置物台下方光线;
培养皿,置于所述隔离盒的第二中空部,用于放置观察材料。
2.根据权利要求1所述的玻璃化冷冻观察装置,其特征在于,所述隔离盒呈长方体形,长、宽、高分别为15厘米、15厘米和5厘米。
3.根据权利要求2所述的玻璃化冷冻观察装置,其特征在于,所述第一中空部在距离所述隔离盒表面1厘米处直径扩大形成所述第二中空部。
4.根据权利要求3所述的玻璃化冷冻观察装置,其特征在于,所述第一中空部的直径为9厘米,所述第二中空部的直径为10.5厘米。
5.根据权利要求1~4任一项所述的玻璃化冷冻观察装置,其特征在于,所述隔离盒由具有耐超低温和保温性能的材料制成。
6.权利要求5所述的玻璃化冷冻观察装置在玻璃液筛选中的应用,其特征在于,包括以下步骤:
(1)玻璃液快速冷冻观察
A.在所述培养皿中倒入液氮,调节所述立式显微镜的焦距;
B.用内径0.5微米的单精子卵胞浆显微注射用注射针吸取一定体积待检测玻璃液,置于所述培养皿中标记好的对焦位置;
C.拍摄并记录所述玻璃液的变化,观察指标包括快速冷冻过程中晶体、碎片的形成;
(2)玻璃液复融观察
A.在所述培养皿中倒入37℃水,调节所述立式显微镜的焦距;
B.取出所述液氮中冷冻后的单精子卵胞浆显微注射用注射针置于所述培养皿中标记好的对焦位置;
C.拍摄并记录玻璃液变化情况,观察指标包括复融过程中冰晶、去玻璃和再结晶形成情况。
7.权利要求5所述的玻璃化冷冻观察装置在组织平衡时间优化中的应用,其特征在于,包括以下步骤:
(1)在所述培养皿中加入一定量的玻璃液;
(2)将组织置于所述玻璃液中,渗透平衡一定时间;
(3)调整焦距,拍摄记录组织表面积变化。
8.根据权利要求7所述的应用,其特征在于,在所述步骤(2)之前还包括将所述组织置于等渗磷酸盐缓冲液中的步骤。
9.根据权利要求8所述的应用,其特征在于,包括以下步骤:
(1)在所述培养皿中加入一定量的玻璃液;
(2)将组织置于等渗磷酸盐缓冲液中;
(3)再将组织移入所述玻璃液中,渗透平衡一定时间;
(4)调整焦距,每间隔一分钟镜下拍照一次,拍摄记录组织表面积变化;
(5)以组织在所述等渗磷酸盐缓冲液中的表面积为百分之百等渗表面积,计算置于所述玻璃液内的组织表面积占等渗表面积的百分比,比较不同时间点组织表面积与等渗表面积的比值,最小比值出现的时间点为所述玻璃液最佳渗透脱水时间。
10.根据权利要求9所述的应用,其特征在于,所述组织为卵巢组织。