氟氯氰菊酯胶体金检测卡的制作方法

属于食品安全检测领域，具体涉及食品中有害残留物的检测方法，特别是氟氯氰菊酯试纸检测方法。

背景技术：

氟氯氰菊酯（英文名：Cyfluthrin）有百树得，百树菊酯等别名。纯品为粘稠的、部分结晶的琥珀色油状物，有效成分≥90%，无特殊气味，不挥发。难溶于水，微溶于酒精，易溶于醚、酮、甲苯等有机溶剂，对碱不稳定，对酸稳定。

氟氯氰菊酯杀虫高效，对多种鳞目幼虫有很好效果，亦可有效的防治某些地下害虫。以触杀和胃毒作用为主，无内吸及熏蒸作用。杀虫谱广，作用迅速，持效期长。具用一些杀卵活性，并对某些成虫有拒避作用。

我国已制定的一些农副产品中的农药最高残留限量表中氟氯氰菊酯的限量为棉籽油不得超过0.02mg/kg，梨果类水果、柑橘类水果、叶菜类蔬菜中不得超过0.2mg/kg，苹果中不得超过0.5mg/kg。

技术实现要素：

本发明目的在于提供快速检测出食品中氟氯氰菊酯的残留。

本发明的技术方案是氟氯氰菊酯的检测卡及其检测样品的处理方法。氟氯氰菊酯的检测卡是在长条扁平薄壳状的检测卡外壳内设置检测条，检测卡外壳表面有检测窗孔和加样孔，其特征在于测试条是由支承背板上粘贴四种原件组成：支承背板中部粘贴硝酸纤维素膜，支承背板一端上粘贴吸水纸，另一端粘贴样品垫，吸水纸内端与硝酸纤维素膜搭接，样品垫与硝酸纤维素膜之间则有一段金标垫，由金标垫将样品垫与硝酸纤维素膜连接在一起。金标垫中是含有第二种属蛋白和氟氯氰菊酯抗体的混合物，硝酸纤维素膜上横向有2条间隔开的显色印记带，一条是含氟氯氰菊酯蛋白质偶联物的检测带，另一条是第二种属动物蛋白的IgG（常用的为抗兔抗体或抗鼠抗体）；测试条置入检测卡外壳内，样品垫正对加样孔，硝酸纤维素膜正对检测窗孔。

样品处理方法是：称取试样2±0.05 g于50 mL的离心管中，加入10 mL超纯水，在1800 r/min条件下用高速组织粉碎机打碎（约1 min），取粘稠液加50%三氯乙酸2 mL和二氯甲烷10 mL，在回旋式振荡器上高速振摇30 min。然后在4℃ 5000 rpm条件下离心30 min，取上清10 mL，加二氯甲烷2 mL，在回旋加速器上振荡混合20 min，再在4℃ 12000 rpm条件下离心30 min，上清液即为药物的抽提液。

本发明的优点是能快速检测出样品中含有的氟氯氰菊酯，且节省检测成本，使用方便，检测快速，灵敏度高，结果准确。

附图说明

图1是氟氯氰菊酯检测卡外壳及检测试纸条在外壳内的安置图。

图2是氟氯氰菊酯检测卡检测试纸条结构示意图。

图3是检测试纸条硝酸纤维素膜上显示印迹带示意图。

具体实施方式

1. 标记胶体金的制备

胶体金溶液的制备：先将1 g氯金酸（HAuCl₄）粉末溶于100 mL超纯水配置成1%的氯金酸溶液；再取1 L超纯水于特质电炉上加热，至沸腾后加入10 mL 1%的柠檬酸三钠水溶液，沸腾后继续加热，5分钟后加10 mL 1%的氯金酸溶液，再次加热至沸腾，等待颜色变为酒红色后开始计时，10分钟后停止加热，取下后自然冷却、定容至1 L，即为胶体金溶液。

抗体标记：确定抗体所需的0.1 mol/l K₂CO₃的比例，取100 mL胶体金溶液，加入此比例0.1 mol/L的K₂CO₃，混匀（约5 min），再将氟氯氰菊酯和第二种属动物蛋白分别用PBS（0.01 mo1/L，pH7.4）溶解稀释至2 mg/mL，加入2 mL 2 mg/mL的氟氯氰菊酯抗体（或2 mL 2 mg/mL第二种属动物蛋白），混匀（5 min），最后加入10% BSA 2 mL，混匀（5 min）。离心三次留沉淀，此三次收集的沉淀即为金标氟氯氰菊酯抗体。

胶体金标记部分处理：将氟氯氰菊酯抗体稀释后，按一定比例将载体（如玻璃纤维、聚酯膜等）浸透，铺均匀，取出放于37 ℃恒温烘箱烘制8-12 h，干燥后即作为胶体金标记部分。

2. 免疫层析专用高分子复合膜制备

首先用一种硝酸纤维素膜制成透明背衬膜，在背衬膜上覆盖一层对蛋白质结合力强，浸润性能好的具有一定孔径的层析膜。背衬膜的作用是阻止粘合剂中的有机溶剂对层析膜上蛋白质的破坏。

3. 层析膜的点样方法

将一定浓度的甜蜜抗原（氟氯氰菊酯与载体物质形成的偶合物）精确定量；以一定间距（5 mm）呈横条状点定于层析膜上，供检测用。

氟氯氰菊酯检测卡是在检测卡外壳1中设置检测试纸条2，检测卡外壳1的结构及检测试纸条2的设置见附图1，检测卡外壳1为长条扁平薄壳状外壳，长70 mm，宽20 mm，厚5 mm，薄壳壁厚1 mm，由工程塑料制成，检测卡外壳1由上盖和下盖两半联接而成，在检测卡外壳1上盖上有检测窗孔3和加样孔4。检测试纸条2放置在检测卡外壳1的下盖内。

检测试纸条2是多层结构的窄条薄片，片长60 mm，片宽约4 mm，厚度小于2.5 mm。检测试纸条2是多层结构：底层是支承背板5，为聚乙烯薄片，厚度约0.5 mm，长60 mm，宽4 mm；支承背板5中部粘贴硝酸纤维素膜6，硝酸纤维素膜厚0.5 mm，长20 mm，宽4 mm。硝酸纤维素膜6上有两条间隔开的横向显示印迹带，参见附图3，两条显示印迹中，一条是检测线10，含氟氯氰菊酯偶联物，另一条是参照线11，含第二种属动物蛋白的IgG。支承背板5一端上粘贴吸水纸9，另一端粘贴样品垫8，吸水纸9内端与硝酸纤维素膜6搭接，样品垫8与硝酸纤维素膜6之间则有一段金标垫7，由金标垫7将样品垫8与硝酸纤维素膜6连接在一起，搭接宽度在1-2 mm 。样品垫8材料为吸水玻璃纤维或聚酯膜。

使用氟氯氰菊酯胶体金检测卡时，先将待检测的样品液（药物的抽提液稀释后，直接用于检测）从加样孔4中滴入氟氯氰菊酯检测试纸条2的样品垫8，由于虹作用原理，带动待检测的样品液及胶体金膜7所含的抗氟氯氰菊酯单克隆抗体胶体金标记物一起向硝酸纤维素膜6扩散，5-10分钟内观察结果。

检测卡的主要反应是免疫学的抗原和抗体反应，在硝酸纤维素膜上迁移的胶体金标记的抗体，在测试线上与含有氟氯氰菊酯蛋白质偶联物，以及参照线含第二种属动物蛋白的IgG反应，形成棕红色条带。若样品中相应的待测氟氯氰菊酯高于允许值，样品加入后先与金标垫中的抗体反应，而不会与检测带所带有的氟氯氰菊酯蛋白质偶联物反应，从而不显色。主要有以下3种检测结果：

1.检测线10和参照线11同时显现棕红色印迹，表示检测结果为阴性，说明被测样品中不含氟氯氰菊酯或含量低于允许值；

2. 检测线10不显色，参照线11显现棕红色印迹，表示检测结果为阳性，说明被测样品中氟氯氰菊酯含量高于允许值；

3. 检测线10显现棕红色印迹，参照线11不显色，或检测线10和参照线11均不显色，表示检测试纸条失效。