一种琥珀酸曲格列汀及其对映异构体的分离检测方法与流程

本发明涉及药物分析化学领域，具体涉及一种琥珀酸曲格列汀及其对映异构体的分离检测方法。

背景技术：

Trelagliptin(曲格列汀)是一种每周一次的二肽基肽酶IV(DPP-4)抑制剂，通过选择性、持续性抑制DPP-4，控制血糖水平。DPP-4是一种酶，能够引发肠促胰岛素(胰高血糖素样肽-1(GLP-1)和葡萄糖依赖性促胰岛素多肽(GIP)的失活，而这2种肠降胰岛素在血糖调节中发挥着重要作用。抑制DPP-4，能够增加血糖水平依赖性胰岛素分泌，从而控制血糖水平。

曲格列汀化学结构式如下：

含有手性碳原子的对映异构体分离一直是手性药物合成和制剂过程中质量控制的难点。琥珀酸曲格列汀为手性药物，为了保证药物的安全性，在质量标准中需要检测药物中对映异构体杂质的含量。对映异构体在常规的高效液相色谱法中无法得到分离，必须使用合适的手性柱才能达到分离。

因此，目前未见文献报道能够准确灵敏地分离检测琥珀酸曲格列汀及其对映异构体的有效方法。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种琥珀酸曲格列汀及其对映异构体的高效液相色谱分离检测方法。

本发明提供的琥珀酸曲格列汀及其对映异构体的高效液相色谱分离检测方法，采用的色谱条件如下：

色谱柱：多糖涂敷型正相手性柱；

流动相：正己烷-低级醇溶液；

流速：0.5～1.5mL/min；

检测波长：230nm；

柱温：25～35℃；

进样量：20μL；

检测器:采用紫外检测器。

进一步，所述的多糖涂敷型正相手性柱为CHIRALCEL OJ-H，流速为1.0mL/min，柱温为30℃。

进一步，所述的流动相：正己烷-低级醇溶液中含有乙二胺、二乙胺、三乙胺中的任一种有机碱，浓度范围为0.05～0.15％。

进一步，所述的流动相：正己烷-低级醇溶液中含有二乙胺，浓度为0.1％。

进一步，所述的流动相正己烷-低级醇溶液中，正己烷与低级醇体积比为70:30～50:50；所述的低级醇溶液为无水乙醇或异丙醇。

进一步，所述的流动相正己烷-低级醇溶液中，正己烷与低级醇体积比为60:40；所述的低级醇溶液为无水乙醇。

本发明还提供一种琥珀酸曲格列汀及其对映异构体的高效液相色谱分离检测方法，通过以下步骤实现：

步骤(1)，溶液配制

空白溶液：纯度为99.9％的乙醇；

配制供试品溶液：称取琥珀酸曲格列汀50mg，置于50ml量瓶中，加入纯度为99.9％的乙醇溶解、稀释至刻度；

配制系统适用性溶液：称取琥珀酸曲格列汀对照品50mg和对映异构体5mg，置于50ml量瓶中，加入纯度为99.9％的乙醇溶解、稀释至刻度；

配制对照品溶液：称取琥珀酸曲格列汀对映异构体对照品5mg，置于10ml量瓶中，加入纯度为99.9％的乙醇使溶解并稀释至刻度，精密量取1ml，置100ml量瓶中，加入纯度为99.9％的乙醇稀释至刻度；

步骤(2)：测定

取系统空白溶液、供试品溶液、对照品溶液、系统适用性溶液，分别注入液相色谱仪，按照上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。

与现有技术相比，本发明的有益效果在于：

本发明提供的琥珀酸曲格列汀及其对映异构体的高效液相色谱分离检测方法,能够有效分离和测定琥珀酸曲格列汀对映异构体，专属性强，准确度高，可以用于有效控制琥珀酸曲格列汀原料药的质量。

附图说明

图1实施例1配制的空白溶液的高效液相色谱图；

图2实施例1配制的供试品溶液的高效液相色谱图；

图3实施例1配制的对照溶液的高效液相色谱图；

图4实施例1配制的系统适用性溶液的高效液相色谱图。

具体实时方式

下面结合实施例对本发明做进一步详细说明，但本发明并不仅仅局限于下述实施例。

实施例1

实验仪器和条件：

Waters 1525高效液相色谱仪，Waters 2487紫外检测器；

色谱柱：多糖涂敷型正相手性柱CHIRALCEL OJ-H；

流动相：正己烷-异丙醇溶液，正己烷-异丙醇溶液中含有0.05％的乙二胺，正己烷与异丙醇的体积比为70：30；

流速：0.5mL/min；

检测波长：230nm；

柱温：28℃；

进样量：20μL；

检测器:采用紫外检测器。

实验步骤：

步骤(1)，溶液配制

空白溶液：纯度为99.9％的乙醇；

配制供试品溶液：称取琥珀酸曲格列汀50mg，置于50ml量瓶中，加入纯度为99.9％的乙醇溶解、稀释至刻度；

配制系统适用性溶液：称取琥珀酸曲格列汀对照品50mg和对映异构体5mg，置于50ml量瓶中，加入纯度为99.9％乙醇的溶解、稀释至刻度；

配制对照品溶液：称取琥珀酸曲格列汀对映异构体对照品5mg，置于10ml量瓶中，加入纯度为99.9％的乙醇使溶解并稀释至刻度，精密量取1ml，置100ml量瓶中，加入纯度为99.9％的乙醇稀释至刻度；

步骤(2)：测定

取系统空白溶液、供试品溶液、对照品溶液、系统适用性溶液，分别注入液相色谱仪，按照上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。

空白溶液的液相色谱图如图1所示，由图1可知，空白溶液在保留时间为4-5min时出现微小波动；

供试品溶液的液相色谱图如图2所示，由图2可知，保留时间为13.795min的色谱峰为琥珀酸曲格列汀；

对照品溶液的液相色谱图如图3所示，由图3可知，保留时间为21.739min的色谱峰为琥珀酸曲格列汀对映异构体；

系统适用性溶液的液相色谱图如图4所示，由图4可知，保留时间为13.647min的色谱峰为琥珀酸曲格列汀，保留时间为21.33min的色谱峰为琥珀酸曲格列汀对映异构体(其中，保留时间为12.261min的色谱峰为杂质峰，峰面积所占比例小于0.1％)；由此可知，本发明提供的分离方法能够有效分离和测定琥珀酸曲格列汀对映异构体，专属性强，准确度高，可以用于有效控制琥珀酸曲格列汀原料药的质量。

实施例2

实验仪器和条件：

Waters 1525高效液相色谱仪，Waters 2487紫外检测器；

色谱柱：多糖涂敷型正相手性柱CHIRALCEL OJ-H；

流动相：正己烷-无水乙醇溶液，正己烷-无水乙醇溶液中含有0.01％的二乙胺，正己烷与异丙醇的体积比为60：40；

流速：1.5mL/min；

检测波长：230nm；

柱温：25℃；

进样量：20μL；

检测器:采用紫外检测器。

实验步骤：

步骤(1)，溶液配制

空白溶液：纯度为99.9％的乙醇；

配制供试品溶液：称取琥珀酸曲格列汀50mg，置于50ml量瓶中，加入纯度为99.9％的乙醇溶解、稀释至刻度；

配制系统适用性溶液：称取琥珀酸曲格列汀对照品50mg和对映异构体5mg，置于50ml量瓶中，加入纯度为99.9％的乙醇溶解、稀释至刻度；

配制对照品溶液：称取琥珀酸曲格列汀对映异构体对照品5mg，置于10ml量瓶中，加入纯度为99.9％的乙醇使溶解并稀释至刻度，精密量取1ml，置100ml量瓶中，加入纯度为99.9％的乙醇稀释至刻度；

步骤(2)：测定

取系统空白溶液、供试品溶液、对照品溶液、系统适用性溶液，分别注入液相色谱仪，按照上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图：空白溶液的液相色谱图中，保留时间为3-4min时出现微小波动；供试品溶液的液相色谱图中，保留时间为11.895min的色谱峰为琥珀酸曲格列汀；对照品溶液的液相色谱图中，保留时间为20.759min的色谱峰为琥珀酸曲格列汀对映异构体；系统适用性溶液的液相色谱图中，保留时间为11.637min的色谱峰为琥珀酸曲格列汀，保留时间为20.37min的色谱峰为琥珀酸曲格列汀对映异构体(其中，保留时间为12.01min的色谱峰为杂质峰，峰面积所占比例小于0.1％)。

实施例3

实验仪器和条件：

Waters 1525高效液相色谱仪，Waters 2487紫外检测器；

色谱柱：多糖涂敷型正相手性柱CHIRALCEL OJ-H；

流动相：正己烷-无水乙醇溶液，正己烷-无水乙醇溶液中含有0.01％的三乙胺，正己烷与异丙醇的体积比为60：40；

流速：1.0mL/min；

检测波长：230nm；

柱温：35℃；

进样量：20μL；

检测器:采用紫外检测器。

实验步骤：

步骤(1)，溶液配制

空白溶液：纯度为99.9％的乙醇；

配制供试品溶液：称取琥珀酸曲格列汀50mg，置于50ml量瓶中，加入纯度为99.9％的乙醇溶解、稀释至刻度；

配制系统适用性溶液：称取琥珀酸曲格列汀对照品50mg和对映异构体5mg，置于50ml量瓶中，加入纯度为99.9％的乙醇溶解、稀释至刻度；

配制对照品溶液：称取琥珀酸曲格列汀对映异构体对照品5mg，置于10ml量瓶中，加入纯度为99.9％的乙醇使溶解并稀释至刻度，精密量取1ml，置100ml量瓶中，加入纯度为99.9％的乙醇稀释至刻度；

步骤(2)：测定

取系统空白溶液、供试品溶液、对照品溶液、系统适用性溶液，分别注入液相色谱仪，按照上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图：空白溶液的液相色谱图中，保留时间为3-4min时出现微小波动；供试品溶液的液相色谱图中，保留时间为11.795min的色谱峰为琥珀酸曲格列汀；对照品溶液的液相色谱图中，保留时间为20.769min的色谱峰为琥珀酸曲格列汀对映异构体；系统适用性溶液的液相色谱图中，保留时间为11.647min的色谱峰为琥珀酸曲格列汀，保留时间为20.31min的色谱峰为琥珀酸曲格列汀对映异构体(其中，保留时间为12.04min的色谱峰为杂质峰，峰面积所占比例小于0.1％)。

实施例4

实验仪器和条件：

Waters 1525高效液相色谱仪，Waters 2487紫外检测器；

色谱柱：多糖涂敷型正相手性柱CHIRALCEL OJ-H；

流动相：正己烷-异丙醇溶液，正己烷-异丙醇溶液中含有0.15％的三乙胺，正己烷与异丙醇的体积比为50：50；

流速：1.5mL/min；

检测波长：230nm；

柱温：30℃；

进样量：20μL；

检测器:采用紫外检测器。

实验步骤：

步骤(1)，溶液配制

空白溶液：纯度为99.9％的乙醇；

配制供试品溶液：称取琥珀酸曲格列汀50mg，置于50ml量瓶中，加入纯度为99.9％的乙醇溶解、稀释至刻度；

配制系统适用性溶液：称取琥珀酸曲格列汀对照品50mg和对映异构体5mg，置于50ml量瓶中，加入纯度为99.9％的乙醇溶解、稀释至刻度；

配制对照品溶液：称取琥珀酸曲格列汀对映异构体对照品5mg，置于10ml量瓶中，加入纯度为99.9％的乙醇使溶解并稀释至刻度，精密量取1ml，置100ml量瓶中，加入纯度为99.9％的乙醇稀释至刻度；

步骤(2)：测定

取系统空白溶液、供试品溶液、对照品溶液、系统适用性溶液，分别注入液相色谱仪，按照上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图：空白溶液的液相色谱图中，保留时间为3-3.5min时出现微小波动；供试品溶液的液相色谱图中，保留时间为10.895min的色谱峰为琥珀酸曲格列汀；对照品溶液的液相色谱图中，保留时间为19.764min的色谱峰为琥珀酸曲格列汀对映异构体；系统适用性溶液的液相色谱图中，保留时间为10.737min的色谱峰为琥珀酸曲格列汀，保留时间为19.37min的色谱峰为琥珀酸曲格列汀对映异构体(其中，保留时间为11.01min的色谱峰为杂质峰，峰面积所占比例小于0.1％)。

实施例5

实验仪器和条件：

Waters 1525高效液相色谱仪，Waters 2487紫外检测器；

色谱柱：多糖涂敷型正相手性柱CHIRALCEL OJ-H；

流动相：正己烷-异丙醇溶液，正己烷-异丙醇溶液中含有0.15％的三乙胺，正己烷与异丙醇的体积比为60：40；

流速：1mL/min；

检测波长：230nm；

柱温：25℃；

进样量：20μL；

检测器:采用紫外检测器。

实验步骤：

步骤(1)，溶液配制

空白溶液：纯度为99.9％的乙醇；

配制供试品溶液：称取琥珀酸曲格列汀50mg，置于50ml量瓶中，加入纯度为99.9％的乙醇溶解、稀释至刻度；

配制系统适用性溶液：称取琥珀酸曲格列汀对照品50mg和对映异构体5mg，置于50ml量瓶中，加入纯度为99.9％的乙醇溶解、稀释至刻度；

配制对照品溶液：称取琥珀酸曲格列汀对映异构体对照品5mg，置于10ml量瓶中，加入纯度为99.9％的乙醇使溶解并稀释至刻度，精密量取1ml，置100ml量瓶中，加入纯度为99.9％的乙醇稀释至刻度；

步骤(2)：测定

取系统空白溶液、供试品溶液、对照品溶液、系统适用性溶液，分别注入液相色谱仪，按照上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图：空白溶液的液相色谱图中，保留时间为3-4min时出现微小波动；供试品溶液的液相色谱图中，保留时间为11.891min的色谱峰为琥珀酸曲格列汀；对照品溶液的液相色谱图中，保留时间为20.624min的色谱峰为琥珀酸曲格列汀对映异构体；系统适用性溶液的液相色谱图中，保留时间为11.623min的色谱峰为琥珀酸曲格列汀，保留时间为20.21min的色谱峰为琥珀酸曲格列汀对映异构体(其中，保留时间为11.96min的色谱峰为杂质峰，峰面积所占比例小于0.1％)。

实施例6

实验仪器和条件：

Waters 1525高效液相色谱仪，Waters 2487紫外检测器；

色谱柱：多糖涂敷型正相手性柱CHIRALCEL OJ-H；

流动相：正己烷-异丙醇溶液，正己烷-异丙醇溶液中含有0.05％的乙二胺，正己烷与异丙醇的体积比为50：50；

流速：0.5mL/min；

检测波长：230nm；

柱温：35℃；

进样量：20μL；

检测器:采用紫外检测器。

实验步骤：

步骤(1)，溶液配制

空白溶液：纯度为99.9％的乙醇；

配制供试品溶液：称取琥珀酸曲格列汀50mg，置于50ml量瓶中，加入纯度为99.9％的乙醇溶解、稀释至刻度；

配制系统适用性溶液：称取琥珀酸曲格列汀对照品50mg和对映异构体5mg，置于50ml量瓶中，加入纯度为99.9％的乙醇溶解、稀释至刻度；

配制对照品溶液：称取琥珀酸曲格列汀对映异构体对照品5mg，置于10ml量瓶中，加入纯度为99.9％的乙醇使溶解并稀释至刻度，精密量取1ml，置100ml量瓶中，加入纯度为99.9％的乙醇稀释至刻度；

步骤(2)：测定

取系统空白溶液、供试品溶液、对照品溶液、系统适用性溶液，分别注入液相色谱仪，按照上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图：空白溶液的液相色谱图中，保留时间为3-3.5min时出现微小波动；供试品溶液的液相色谱图中，保留时间为10.890min的色谱峰为琥珀酸曲格列汀；对照品溶液的液相色谱图中，保留时间为19.760min的色谱峰为琥珀酸曲格列汀对映异构体；系统适用性溶液的液相色谱图中，保留时间为10.731min的色谱峰为琥珀酸曲格列汀，保留时间为19.31min的色谱峰为琥珀酸曲格列汀对映异构体(其中，保留时间为11.02min的色谱峰为杂质峰，峰面积所占比例小于0.1％)。

以上较佳实施例仅用于说明本发明的内容，除此之外，本发明还有其他实施方式，但凡本领域技术人员因本发明所涉及之技术启示，而采用等同替代或等效变形方式形成的技术方案均落在本发明保护范围内。