一种肿瘤蛋白的检测试剂盒的制作方法

文档序号:12113779阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种肿瘤蛋白的检测试剂盒,其特征在于:包括肿瘤蛋白P185单克隆抗体、酶标板、阳性对照品、阴性对照品、洗涤液、终止液、辣根过氧化物酶-链亲和素及其显色底物,所述的肿瘤蛋白P185单克隆抗体包括包被在酶标板上的肿瘤蛋白P185单克隆抗体和生物素标记的肿瘤蛋白P185单克隆抗体;

所述的包被在酶标板上的肿瘤蛋白P185单克隆抗体为肿瘤蛋白P185单克隆抗体2D11,所述的生物素标记的肿瘤蛋白P185单克隆抗体为肿瘤蛋白P185单克隆抗体3F9,肿瘤蛋白P185单克隆抗体2D11、3F9的制备步骤如下:

a)以NIH/3T3细胞i.p免疫第一批6~8周的Balb/C雌鼠,得到雌鼠的抗NIH/3T3血清;

b)收集长至汇合的T6-17细胞,用PBS缓冲液洗三次,将上述制备的抗NIH/3T3抗血清用PBS缓冲液以1:20~100稀释,然后取2ml加入T6-17细胞中,在4℃条件下温育过夜,期间晃动盛放T6-17细胞的试管8-10次,然后再用PBS缓冲液洗三次,得到悬浮于PBS缓冲液中的T6-17细胞;

c)用上述悬浮于PBS缓冲液中的T6-17细胞i.p免疫第二批6-8周的BaLb/C雌鼠,然后取雌鼠的脾细胞制成细胞悬液;

d)将步骤c得到的细胞悬液与骨髓瘤细胞SP2/0进行细胞融合;

e)用ELISA法从上述融合的细胞中筛选出分泌肿瘤蛋白P185单克隆抗体的杂交瘤细胞,采用有限稀释法对杂交瘤细胞进行克隆化,从而得到两株具有稳定分泌肿瘤蛋白P185单克隆抗体能力的杂交瘤细胞株,分别命名为杂交瘤细胞株2D11、杂交瘤细胞株3F9;

f)将杂交瘤细胞株2D11、3F9分别注入不同的雌鼠体内,收集腹水,将腹水中的抗体纯化,即得肿瘤蛋白P185单克隆抗体2D11、3F9。

2.根据权利要求1所述的一种肿瘤蛋白的检测试剂盒,其特征在于:所述洗涤液是由28.8g的Na2HPO4·12H2O、80g的NaCl、3.9g的NaH2PO4·2H2O 和50ml的Tween-20加入纯化水溶解定容至100000ml所得。

3.根据权利要求1所述的一种肿瘤蛋白的检测试剂盒,其特征在于:所述显色底物包括显色液A和显色液B,所述的显色液A是用柠檬酸缓冲液将30%过氧化氢稀释1000倍所得,所述的显色液B为用含20%二甲基亚砜的柠檬酸缓冲液将四甲基联苯胺配制成0.4mg/ml所得。

4.根据权利要求1所述的一种肿瘤蛋白的检测试剂盒,其特征在于:所述终止液是浓度为2mol/L的硫酸溶液,所述阳性对照品、阴性对照品分别为人体的P185阳性血清、P185阴性血清。

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