一种紫花苜蓿总皂甙提取纯化及快速测定方法与流程

文档序号:12357774阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种紫花苜蓿总皂甙提取纯化及快速测定方法,其特征在于:包括如下步骤:

(1)提取材料的培养及处理:

取紫花苜蓿组织并磨成粉末,然后加入溶剂提取、离心,去除上层溶剂后,旋转蒸发去除残余溶剂,取出脱脂残渣,干燥,过筛,得到紫花苜蓿组织粉末;

(2)总皂苷的提取纯化:

称取适量紫花苜蓿组织粉末,加入溶剂,涡旋震荡,然后提取离心,取上清液,旋转蒸发去除溶剂,用纯水重悬后注入已预处理的SPE柱,用超纯水和甲醇溶液冲洗后,再用100%甲醇洗脱;合并洗脱液,置于试管中,水浴蒸干,冷却后加入香草醛-冰醋酸溶液;待充分溶解后加入高氯酸,水浴后立即冰浴,冷却后加入冰醋酸,静置;

(3)总皂苷的含量测定:

以空白平行样作对照,用分光光度计在一定波长处测定溶液的吸光度,并根据吸光度标准曲线计算总皂苷的含量。

2.根据权利要求1所述的一种紫花苜蓿总皂甙提取纯化及快速测定方法,其特征在于:步骤(1)中所述的紫花苜蓿组织包括紫花苜蓿种子或者光照培养后的紫花苜蓿植株的根、茎、叶、全株;

所述的溶剂为石油醚;

所述的加入溶剂提取、离心的具体方法为加入15倍量(V/m)的石油醚提取、离心,去除上层石油醚后,再次加入同等倍量的石油醚,重复提取1次,再次离心;

所述的提取的方式为超声提取,提取时间为30min;

所述的离心的转速为5000rpm,离心时间为10min;

所述的脱脂残渣的干燥处理方式为冻干或者烘干;其中冻干设备选用低温真空冻干机,冻干条件为-60℃冻干70h;其中烘干设备选用烘箱,烘干条件为60℃烘干70h;

所述的筛子为60目筛;

所述的紫花苜蓿粉末可置于干燥器中长期保存。

3.根据权利要求2所述的一种紫花苜蓿总皂甙提取纯化及快速测定方法,其特征在于:步骤(1)中所述的光照培养紫花苜蓿植株的方法为:紫花苜蓿种子萌发后,转移至光照培养箱培养,16h昼/8h夜,白天24℃,夜晚20℃,相对湿度40%;

紫花苜蓿植株的培养期为8周。

4.根据权利要求3所述的一种紫花苜蓿总皂甙提取纯化及快速测定方法,其特征在于:步骤(1)中所述的脱脂残渣的干燥处理方式优选为冻干。

5.根据权利要求3所述的一种紫花苜蓿总皂甙提取纯化及快速测定方法,其特征在于:步骤(2)中所述的紫花苜蓿粉末用量为30mg;

所述的溶剂为甲醇溶液或乙醇溶液,有效浓度为30%~100%,用量为1mL;

所述的涡旋震荡的转速为13000r/min,涡旋震荡的时间为3min;

所述的提取离心的具体方法为室温下超声提取30min,在4℃下放置过夜后,再次超声提取30min,然后离心;

所述的离心条件为10000g,离心时间为30min;

所述的上清液的用量为100μL;

所述的超纯水的用量为5mL;甲醇溶液的有效浓度为30%,用量为5mL;

所述的100%甲醇洗脱次数为1~5次,洗脱速率为1mL/min;

所述的试管规格为10mL具塞试管;

所述的香草醛-冰醋酸溶液的浓度为5%,用量为0.2mL;

所述的高氯酸的用量为0.8mL;

所述的加入高氯酸后水浴的条件为70℃水浴15min;

所述的冰醋酸的用量为5mL;

所述的加入冰醋酸后的静置时间为0~60min。

6.根据权利要求5所述的一种紫花苜蓿总皂甙提取纯化及快速测定方法,其特征在于:步骤(2)中所述的溶剂优选为70%乙醇溶液;

所述的100%甲醇洗脱次数优选为4次;

所述的加入冰醋酸后的静置时间优选为20min。

7.根据权利要求5所述的一种紫花苜蓿总皂甙提取纯化及快速测定方法,其特征在于:步骤(3)中测定吸光度选用的波长为545nm。

8.根据权利要求7所述的一种紫花苜蓿总皂甙提取纯化及快速测定方法,其特征在于:步骤(3)中吸光度标准曲线的绘制方法为:称取齐墩果酸对照品,配置成浓度为2mg/mL的对照品储备液,分别吸取0﹑10﹑15﹑20﹑25﹑30﹑35﹑40μL储备液置于10mL具塞试管中进行显色反应,静置20min,使用分光光度计于545nm处测定各个浓度标准品的吸光度,然后绘制吸光度标准曲线。

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