一种水产品中恩诺沙星残留的免疫层析毛细管快速检测方法与流程

文档序号:12453933阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种水产品中恩诺沙星残留的免疫层析毛细管快速检测方法,其特征在于,包括如下步骤:

一、待测样品处理:取1.0g样品与2mL 2%磺基水杨酸溶液匀浆1~2min后,离心,取上清液用2M NaOH调pH为8.0~8.5,并过0.45μm滤膜制成待测样品溶液;

二、样品检测:检测时将金标一抗与待测样品溶液按1:3的体积比均匀混合得混合液,取3~15μL混合液用移液枪注入免疫层析毛细管的检测区端,静置8~15min,然后用移液枪推动混合液至免疫层析毛细管另一端的质控区,静置8~15min,将多余的混合液排出免疫层析毛细管,将免疫层析毛细管在PBST缓冲液中抽洗3次,最后以裸眼定性或以扫描仪半定量读取检测结果。

2.根据权利要求1所述的免疫层析毛细管快速检测方法,其特征在于,所述免疫层析毛细管的组装方法包括如下步骤:

(1)毛细管的处理:将玻璃毛细管浸没于热的piranha溶液中,超声清洗15~20min,超纯水清洗至pH=7,干燥、冷却后,将毛细管依次浸入KOH溶液、超纯水、HCl溶液、超纯水及丙酮中分别超声清洗10-15min,105℃高温烘干后,冷却备用;

(2)毛细管的修饰:将清洗干净的毛细管浸没于修饰液中,37℃干燥环境中反应过夜,置于大平皿中,先用无水甲苯振荡清洗3次,每次5min,再用丙酮振荡清洗3次,每次5min,氮气气氛下干燥;

(3)免疫层析毛细管的组装:将作为检测区的抗原和作为质控区的二抗分别注入步骤(2)处理得到的毛细管的两端,37℃下固定40min,用PBST缓冲液抽洗3次,每次用PBST缓冲液5mL;再将毛细管全部浸入2wt%BSA溶液中,37℃封闭2h,用PBST缓冲液洗净并室温吹干,4℃保存备用,获得免疫层析毛细管。

3.根据权利要求2所述的免疫层析毛细管快速检测方法,其特征在于,步骤(2)中,修饰液按体积百分比计组成为:10%GPTMS、1%三乙胺及89%无水甲苯。

4.根据权利要求2所述的免疫层析毛细管快速检测方法,其特征在于,步骤(1)中的KOH溶液浓度为0.8-1.2mol/L,HCl溶液浓度为0.8-1.2mol/L。

5.根据权利要求2所述的免疫层析毛细管快速检测方法,其特征在于,步骤(1)中所述piranha溶液的制备方法如下:浓度为95wt%以上的浓硫酸与双氧水以3:1体积比混合,冰浴条件混合,混合时将双氧水溶液缓慢加入浓硫酸中,不断搅拌使混合液温度保持在80℃以下。

6.根据权利要求2所述的免疫层析毛细管快速检测方法,其特征在于,步骤(3)中,所述抗原为恩诺沙星与BSA偶联的抗原,二抗为羊抗鼠二抗。

7.根据权利要求6所述的免疫层析毛细管快速检测方法,其特征在于,恩诺沙星与BSA偶联的抗原与PBS缓冲液配制成浓度0.075mg/mL的抗原溶液后注入毛细管,羊抗鼠二抗与PBS缓冲液配制成浓度0.69mg/mL的羊抗鼠二抗溶液后注入毛细管。

8.根据权利要求7所述的免疫层析毛细管快速检测方法,其特征在于,抗原溶液注入毛细管的用量为2μL,羊抗鼠二抗溶液注入毛细管的用量为2μL。

9.根据权利要求1或2所述的免疫层析毛细管快速检测方法,其特征在于,一抗为鼠抗恩诺沙星。

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