本发明涉及质量控制领域，具体涉及一种小叶榕干浸膏指纹图谱质量控制方法。
背景技术：
：小叶榕是桑科植物细叶榕FicusmicrocarpaL.f.的干燥叶，主要产于广东和广西。小叶榕干浸膏系细叶榕干燥叶的提取物，为咳特灵的主成分收载在2015版中国药典一部的质量标准中，用于治疗咳喘和慢性支气管炎。目前的Chp2015版药典标准，对小叶榕干浸膏采用HPLC测定牡荆素和异牡荆素的含量，未对小叶榕干浸膏中黄酮类等主要成分进行分析。中药指纹图谱具有整体性、宏观性和模糊性，能够综合、全面地反映出中药产品的内在质量，可有效地对中药及其制剂进行整体质量控制。中药及其制剂以指纹图谱作为质量控制方法，广泛应用在中药质量控制的各研究领域液质联用(LC-MS)技术已广泛应用于中药化学成分分析、中药代谢研究、中药质量控制及中药药代动力学研究中。采用液质联用技术建立中药材及其制剂的高效液相色谱图并对其特征峰进行指认，对于中药材及其制剂的全面质量控制具有指导意义。目前已有小叶榕的HPLC指纹图谱研究报道，可从图谱的形状来反映药材的归属，但HPLC指纹图中仍有较多的成分是未知的，给小叶榕质量评价及其制剂质量控制带来困难。《小叶榕干浸膏及咳特灵胶囊的HPLC指纹图谱研究及LC-Q-TOF-MS成分分析》(中国实验方剂学杂志第22卷第3期2016年2月)建立了小叶榕干浸膏及咳特灵胶囊的HPLC指纹图谱，确定了14个共有峰，经液质鉴别出表儿茶素、对香豆酸、阿福豆素、牡荆素-7-葡萄糖苷、荭草苷、异荭草苷、牡荆苷、牡荆素葡萄糖苷、异牡荆素吡喃葡萄糖苷、异牡荆苷峰。为了弄清小叶榕HPLC图谱各色谱峰的成分，研究小叶榕的有效成分组成，本发明建立了小叶榕干浸膏的LC-MS指纹图谱，确定了18个共有峰，将异牡荆素峰设为参照峰，并经对照品对照定性和HPLC/MS鉴定，确认没食子酸、原儿茶酸、5-二咖啡酰奎宁酸、儿茶素、咖啡酸、绿原酸、表儿茶酸、荭草素、牡荆素、异荭草素和芦丁峰。图谱重复性，精密度良好，专属性强，为进一步研究和制订小叶榕叶及其提取物的质量控制提供科学依据，为深入研究小叶榕的药效物质基础提供实验参考。技术实现要素：本发明的目的在于，提供一种小叶榕干浸膏指纹图谱质量控制方法。所述指纹图谱为建立的小叶榕干浸膏LC-MS指纹图谱，用对照品鉴定出大部分共有峰，尤其是一些含量较高黄酮类成分，具体包括色谱条件选择、质谱条件的选择，供试品溶液制备、对照品溶液制备、标准指纹图谱建立、鉴别及检测等步骤。该方法为进一步研究和制订小叶榕叶及其提取物的质量控制提供科学依据，为深入研究小叶榕的药效物质基础提供实验参考。本发明是这样构成的：一种小叶榕干浸膏指纹图谱质量控制方法，包括高效液相色谱仪进行梯度洗脱，然后通过质谱进行测定；所述的高效液相色谱条件为：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填料；检测波长：280nm；流动相：流动相A为0.1％甲酸溶液，流动相B为甲醇，采用梯度洗脱，流动相比例均为体积百分比体积，洗脱程序如下：0-6min，流动相A为95％→90％，流动相B为5％→10％；6-10min，流动相A为90％→86％，流动相B为10％→14％；10-18min，流动相A为86％→70％，流动相B为14％→30％；18-25min，流动相A为70％→50％，流动相B为30％→50％；25-29min，流动相A为50％→0％，流动相B为50％→100％；29-32min，流动相A为0％，流动相B为100％。所述的质谱测定条件包括采用UPLC-QQQMS，接有电喷雾离子源，负离子化模式；喷雾电压45psi；干燥气体氮气；干燥气流量11L/min；干燥气体温度350℃；毛细管电压：负离子3.5kV；扫描范围：m/z50-1000。优选的，采用选择离子监控模式优化待测化合物电压，子离子扫描模式：优化子离子、定性离子及二者碰撞能量，多反应监测模式优化各组分分离洗脱条件，最后采用动态多反应监测模式高选择性地分析测定各组分，具体质谱条件优化为：小叶榕干浸膏指纹图谱质量控制方法，还包括供试品溶液的制备，所述的供试品溶液的制备方法包括以下步骤：取小叶榕干浸膏提取物，加入10％乙腈，超声提取，摇匀，微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液。优选的，所述超声功率为250W，频率为30-50kHz，超声时间为30-60min。还包括对照品溶液的制备，所述的对照品溶液制备方法包括以下步骤：分别精密称取没食子酸、原儿茶酸、5-二咖啡酰奎宁酸、儿茶素、咖啡酸、绿原酸、表儿茶酸、荭草素、牡荆素、异荭草素、芦丁对照品，置于量瓶中，用70％甲醇定容，配成混标溶液，备用。还包括标准指纹图谱的建立方法，包括以下步骤：取10批小叶榕干浸膏，配置成供试品溶液，将这10批供试品溶液经过HPLC-MS测定，获得10批样品的MRM图，将其中异牡荆素峰设为参照峰，计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积，以此获得以18个共有峰峰形成的指纹图谱，经过与对照品及文献的质谱数据比较，鉴定出18个峰分别对应奎尼酸、柠檬酸、没食子酸、原儿茶酸、5-二咖啡酰奎宁酸、儿茶素、咖啡酸、绿原酸、4-二咖啡酰奎宁酸、阿福豆素、表儿茶酸、表阿夫儿茶精、荭草素、牡荆素、异荭草素、异牡荆素、芦丁、α-亚麻酸、棕榈酸。其中，所述18个共有峰的峰面积之和占所有峰面积之和大于90％。优选的，高效液相梯度洗脱时，流速为0.3-0.6ml/min，柱温为20-30℃。所述的小叶榕干浸膏指纹图谱质量控制方法，包括以下内容：(1)供试品溶液的制备：取小叶榕干浸膏提取物，加入10％乙腈，超声提取，摇匀，微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液；(2)对照品溶液制备：分别精密称取没食子酸、原儿茶酸、5-二咖啡酰奎宁酸、儿茶素、咖啡酸、绿原酸、表儿茶酸、荭草素、牡荆素、异荭草素、芦丁对照品，置于1000ml量瓶中，用70％甲醇定容，配成混标溶液，备用。(3)色谱条件：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填料；检测波长：280nm；流动相：流动相A为0.1％甲酸溶液，流动相B为甲醇，采用梯度洗脱，流动相比例均为体积百分比体积，洗脱程序如下：0-6min，流动相A为95％→90％，流动相B为5％→10％；6-10min，流动相A为90％→86％，流动相B为10％→14％；10-18min，流动相A为86％→70％，流动相B为14％→30％；18-25min，流动相A为70％→50％，流动相B为30％→50％；25-29min，流动相A为50％→0％，流动相B为50％→100％；29-32min，流动相A为0％，流动相B为100％；(4)质谱条件：采用UPLC-QQQMS，接有电喷雾离子源，负离子化模式；喷雾电压45psi；干燥气体氮气；干燥气流量11L/min；干燥气体温度350℃；毛细管电压：负离子3.5kV；扫描范围：m/z50-1000；(5)标准指纹图谱的建立：以上述方法作为建立小叶榕干浸膏的指纹图谱的测试手段，取10批小叶榕干浸膏，配置成供试品溶液，将这10批供试品溶液经过HPLC-MS测定，获得10批样品的MRM图，将其中异牡荆素峰设为参照峰，计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积，以此获得以18个共有峰峰形成的指纹图谱；所述18个共有峰的峰面积之和占所有峰面积之和大于90％；(6)以(1)-(4)所述方法作为待测小叶榕干浸膏的指纹图谱的测试手段，制备待测样品的指纹图谱；(7)将待测小叶榕干浸膏的指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，相似度大于0.9。本发明的有益效果：(1)完善小叶榕的质量检测方法，由于中药材中有效成分复杂，如果只用其中一、两种成分来说明其内在质量，具有一定的片面性，更无法判断其药效的指标成分，因此在定性、定量检测基础上，增加小叶榕的指纹图谱检测方法来全面控制药材及其产品的质量更为有效。(2)目前已有小叶榕的HPLC指纹图谱研究报道，可从图谱的形状来反映药材的归属，但HPLC指纹图中仍有较多的成分是未知的，给小叶榕质量评价及其制剂质量控制带来困难。本发明建立了小叶榕干浸膏的LC-MS指纹图谱，确定了18个共有峰，将异牡荆素峰设为参照峰，并经对照品对照定性和HPLC-MS鉴定，确认没食子酸、原儿茶酸、5-二咖啡酰奎宁酸、儿茶素、咖啡酸、绿原酸、表儿茶酸、荭草素、牡荆素、异荭草素和芦丁峰。进一步明确了小叶榕HPLC图谱各色谱峰的成分，为小叶榕的有效成分组成研究带来了突破性的进展。(3)选择合适的供试品制备方法、适宜的参数进行梯度洗脱，获得专属、准确、稳定、可操作性强的理想的检测方法，更能对小叶榕药材及其产品进行控制。通过实验证明，本发明指纹图谱重复性，精密度良好，专属性强，为进一步研究和制订小叶榕叶及其提取物的质量控制提供科学依据，为深入研究小叶榕的药效物质基础提供实验参考。以下通过实验研究进一步说明本发明的技术效果：试验例：小叶榕干浸膏LC-MS指纹图谱研究一、仪器安捷伦1290高效液相色谱一高分辨串联6430四级杆质谱联用仪(UPLC-QQQMS)，配有电喷雾电离源(ESI)。超声波清洗仪(洁康超声波设备有限公司)；高速离心机(安徽中科中佳科学仪器有限公司)；电子天平(丹佛仪器(北京)有限公司)。二、方法(一)色谱条件HPLC条件：安捷伦ZORBAXHSST3色谱柱(2.1mm×100mm，1.8μm)；柱温：30℃；流速：0.4mL/min；进样量2μL；流动相：A为0.1％甲酸溶液，B为甲醇。流动相A、B的梯度洗脱程序如表1所示。表1梯度洗脱条件时间/min流速/(mL/min)A相体积分/％B相体积分/％00.495560.49010100.48614180.47030250.45050290.40100320.40100(二)质谱条件UPLC-QQQMS接有电喷雾离子源，采用负离子化模式；喷雾电压45psi；干燥气体氮气；干燥气流量11L/min；干燥气体温度350℃；毛细管电压：负离子3.5kV；扫描范围：m/z50-1000。采用选择离子监控模式优化待测化合物电压，子离子扫描模式：优化子离子、定性离子及二者碰撞能量，多反应监测模式优化各组分分离洗脱条件，最后采用动态多反应监测模式高选择性地分析测定各组分。12种分析物质谱条件见表2。表2质谱条件优化(三)在优化的色谱和质谱条件下，经过与对照品及文献的质谱数据比较，鉴定出18个峰，主要的化合物结构式见附图1，鉴定的18种化合物的分子离子峰见表3。表3鉴定的18种化合物的分子离子峰compoundMWtR1quinicacid(奎尼酸)1920.412citricacid(柠檬酸)1920.593gallicacid(没食子酸)1701.0784protocatechuicacid(原儿茶酸)1542.10055-CQA(5-二咖啡酰奎宁酸)3543.5066catechin(儿茶素)2905.9797caffeicacid(咖啡酸)1806.6798chlorogenicacid(绿原酸)3547.31394-CQA(4-二咖啡酰奎宁酸)3548.73210afzelechin(阿福豆素)2749.479epicatechin(表儿茶酸)29011.34411epiafzelechin(表阿夫儿茶精)27414.05812orientin(荭草素)44816.59613vitexin(牡荆素)43217.15714isoorientin(异荭草素)44817.16515isovitexin(异牡荆素)43219.11816rutin(芦丁)61019.66717α-linolenic(α-亚麻酸)27827.9518palmitic(棕榈酸)25629.30(四)采用UPLC/MS法，在选定的色谱质谱条件下，对12种化合物进行鉴定，结果见表4。表4鉴定的12种化合物的分子离子峰(五)溶液的制备对照品溶液的制备：分别精密称取没食子酸、原儿茶酸、5-二咖啡酰奎宁酸、儿茶素、咖啡酸、绿原酸、表儿茶酸、荭草素、牡荆素、异荭草素、芦丁适量，置于100ml量瓶中，用70％甲醇定容，将其稀释一定倍数后，配成质量浓度分别为0.001694，0.005081，0.015242，0.045725，0.137174，0.411523，1.234568，3.703704，11.11111，33.33，100μg/ml的混标溶液，备用。供试品溶液的制备：小叶榕干浸膏提取物约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入10％乙腈40ml，密塞，称定重量，超声提取45分钟，功率为250W，频率为40kHz，放冷，再称定重量，用10％乙腈补足减失的重量，摇匀，0.22um的微孔滤膜过滤，取续滤液，即得。(六)小叶榕干浸膏成分分析取混标溶液及小叶榕干浸膏供试品溶液，按建立的LC-MS条件进样分析，得到以下谱图：混标溶液(A)和供试品溶液(B)MRM图，见附图2；10批供试品溶液的MRM图，见附图3；10批供试品溶液的HPLC-UV图，见附图4；混标溶液的HPLC-UV图，见附图5。通过各色谱峰紫外光谱图、分子离子峰及主要碎片峰的解析，文献对比，由对照品比对确定，共鉴定了小叶榕干浸膏中18个成分，对照品比对确定的色谱峰结果见附图2-5。(七)指纹图谱方法学考察1.精密度试验取第1批供试品溶液，标记为S1，批号160901，按色谱条件重复进样6次，记录指纹图谱。以异牡荆素的峰面积和保留时间计算各共有峰相对峰面积和相对保留时间。结果表明，各共有峰相对保留时间的RSD≤0.6％，相对峰面积的RSD≤3.0％，表明该方法精密度良好，符合指纹图谱的技术要求。2.重复性试验取S1小叶榕干浸膏6份，每份约25g，精密称定，制备供试品溶液，按色谱条件分别进样，记录指纹图谱。结果各共有峰相对保留时间的RSD≤0.5％，相对峰面积的RSD≤3.0％，表明该方法的重复性良好，符合指纹图谱的技术要求。3.稳定性试验取S1供试品溶液，在选定的色谱条件，分别在0，2，4，6，12，24h进样分析，测得各共有峰相对保留时间的RSD≤0.5％，相对峰面积的RSD≤3.0％，说明供试品溶液在24h内稳定。(八)指纹图谱的建立1.共有峰的确认：取10批白云山制药厂的小叶榕干浸膏，批号：160901-160910)，按供试品溶液制备方法制备各供试液，在选定的色谱条件进样分析，记录色谱图，见附图3。将异牡荆素峰设为参照峰S，计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积。各共有峰相对保留时间的RSD均低于1.0％，但相对峰面积的RSD都较大。小叶榕干浸膏HPLC色谱图中18个共有峰见附图6，共有峰的峰面积之和＞90％。通过对照品比对，确认没食子酸、原儿茶酸、5-二咖啡酰奎宁酸、儿茶素、咖啡酸、绿原酸、表儿茶酸、荭草素、牡荆素、异荭草素和芦丁峰。2.指纹图谱相似度计算：采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版，依据10批小叶榕干浸膏的色谱指纹图谱建立共有模式，计算样品与共有模式之间的相似度，相似度计算结果见表5，10批小叶榕干浸膏指纹图谱相似度均＞0.994。表510批小叶榕干浸膏指纹图谱相似度计算No.相似度No.相似度S10.998S60.998S20.996S70.995S30.997S80.994S40.996S90.996S50.994S100.996(九)小叶榕干浸膏中12种成分的含量测定1.标准曲线的建立表6小叶榕干浸膏中12种成分的标准曲线化合物标准曲线没食子酸Y＝198.672705X+443.875743，R2＝0999原儿茶酸Y＝233.176064X+295.618584，R2＝09995-二咖啡酰奎宁酸Y＝329.206802X+2015.488719，R2＝0999儿茶素Y＝92.049699X+369.093686，R2＝0998咖啡酸Y＝344.889708X+409.252699，R2＝0998绿原酸Y＝379.194431X+1989.944369，R2＝0999表儿茶酸Y＝981.952717X+89.313464，R2＝0999荭草素Y＝759.128620X+761.734254，R2＝0999牡荆素Y＝1173.225803X+801.239609，R2＝0999异荭草素Y＝506.773026X+720.520948，R2＝0996异牡荆素Y＝7914.865340X+304.243867，R2＝0999芦丁Y＝635.348317X+1101.165511，R2＝09992.含量测定10批小叶榕干浸膏中12种成分含量的测定结果见表7。表710批小叶榕干浸膏中12种成分含量的测定结果(n＝3)附图说明附图118个化合物的结构式图附图2混标溶液(A)和供试品溶液(B)MRM图附图310批供试品溶液的MRM图附图410批供试品溶液的HPLC-UV图附图5混标溶液的HPLC-UV图附图610批小叶榕干浸膏HPLC色谱图。具体实施方式下面通过实施例进一步说明本发明。应该理解的是，本发明的实施例是用于说明本发明而不是对本发明的限制。实施例1一种小叶榕干浸膏指纹图谱质量控制方法，包括以下内容：(1)供试品溶液的制备：小叶榕干浸膏提取物0.2g，加入10％乙腈40ml，精密称定，超声提取，超声功率为250W，频率为30kHz，超声时间为60min，摇匀，放冷，用10％乙腈补重，摇匀，0.22um微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液。(2)对照品溶液制备：分别精密称取没食子酸、原儿茶酸、5-二咖啡酰奎宁酸、儿茶素、咖啡酸、绿原酸、表儿茶酸、荭草素、牡荆素、异荭草素、芦丁适量，置于100ml量瓶中，用70％甲醇定容，将其稀释一定倍数后，配成质量浓度分别为0.001694，0.005081，0.015242，0.045725，0.137174，0.411523，1.234568，3.703704，11.11111，33.33，100μg/ml的混标溶液，备用。(3)色谱条件：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填料；检测波长：280nm流动相：流动相A为0.1％甲酸溶液，流动相B为甲醇，采用梯度洗脱，流动相比例均为体积百分比体积，洗脱程序如下：0-6min，流动相A为95％→90％，流动相B为5％→10％；6-10min，流动相A为90％→86％，流动相B为10％→14％；10-18min，流动相A为86％→70％，流动相B为14％→30％；18-25min，流动相A为70％→50％，流动相B为30％→50％；25-29min，流动相A为50％→0％，流动相B为50％→100％；29-32min，流动相A为0％，流动相B为100％；流速为0.3/min，柱温为30℃；(4)质谱条件：采用UPLC-QQQMS，接有电喷雾离子源，负离子化模式；喷雾电压45psi；干燥气体氮气；干燥气流量11L/min；干燥气体温度350℃；毛细管电压：负离子3.5kV；扫描范围：m/z50-1000；(5)标准指纹图谱的建立：以上述方法作为建立小叶榕干浸膏的指纹图谱的测试手段，取10批小叶榕干浸膏，配置成供试品溶液，将这10批供试品溶液经过HPLC-MS测定，获得10批样品的MRM图，将其中异牡荆素峰设为参照峰，计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积，以此获得以18个共有峰峰形成的指纹图谱；所述18个共有峰的峰面积之和占所有峰面积之和大于90％；(6)以(1)-(4)所述方法作为待测小叶榕干浸膏的指纹图谱的测试手段，制备待测样品的指纹图谱；(7)将待测小叶榕干浸膏的指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，相似度大于0.9。实施例2一种小叶榕干浸膏指纹图谱质量控制方法，包括以下内容：(1)供试品溶液的制备：小叶榕干浸膏提取物0.2g，加入10％乙腈40ml，精密称定，超声提取，超声功率为250W，领率为50kHz，超声时间为30min，摇匀，放冷，用10％乙腈补重，摇匀，0.22um微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液。(2)对照品溶液制备：分别精密称取没食子酸、原儿茶酸、5-二咖啡酰奎宁酸、儿茶素、咖啡酸、绿原酸、表儿茶酸、荭草素、牡荆素、异荭草素、芦丁适量，置于100ml量瓶中，用70％甲醇定容，将其稀释一定倍数后，配成质量浓度分别为0.001694，0.005081，0.015242，0.045725，0.137174，0.411523，1.234568，3.703704，11.11111，33.33，100μg/ml的混标溶液，备用。(3)色谱条件：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填料；检测波长：280nm流动相：流动相A为0.1％甲酸溶液，流动相B为甲醇，采用梯度洗脱，流动相比例均为体积百分比体积，洗脱程序如下：0-6min，流动相A为95％→90％，流动相B为5％→10％；6-10min，流动相A为90％→86％，流动相B为10％→14％；10-18min，流动相A为86％→70％，流动相B为14％→30％；18-25min，流动相A为70％→50％，流动相B为30％→50％；25-29min，流动相A为50％→0％，流动相B为50％→100％；29-32min，流动相A为0％，流动相B为100％；流速为0.6/min，柱温为25℃；(4)质谱条件：采用UPLC-QQQMS，接有电喷雾离子源，负离子化模式；喷雾电压45psi；干燥气体氮气；干燥气流量11L/min；干燥气体温度350℃；毛细管电压：负离子3.5kV；扫描范围：m/z50-1000；(5)标准指纹图谱的建立：以上述方法作为建立小叶榕干浸膏的指纹图谱的测试手段，取10批小叶榕干浸膏，配置成供试品溶液，将这10批供试品溶液经过HPLC-MS测定，获得10批样品的MRM图，将其中异牡荆素峰设为参照峰，计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积，以此获得以18个共有峰峰形成的指纹图谱；所述18个共有峰的峰面积之和占所有峰面积之和大于90％；(6)以(1)-(4)所述方法作为待测小叶榕干浸膏的指纹图谱的测试手段，制备待测样品的指纹图谱；(7)将待测小叶榕干浸膏的指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，相似度大于0.9。实施例3一种小叶榕干浸膏指纹图谱质量控制方法，包括以下内容：(1)供试品溶液的制备：小叶榕干浸膏提取物0.2g，加入10％乙腈40ml，精密称定，超声提取，超声功率为250W，频率为40kHz，超声时间为45min，摇匀，放冷，用10％乙腈补重，摇匀，0.22um微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液。(2)对照品溶液制备：分别精密称取没食子酸、原儿茶酸、5-二咖啡酰奎宁酸、儿茶素、咖啡酸、绿原酸、表儿茶酸、荭草素、牡荆素、异荭草素、芦丁适量，置于100ml量瓶中，用70％甲醇定容，将其稀释一定倍数后，配成质量浓度分别为0.001694，0.005081，0.015242，0.045725，0.137174，0.411523，1.234568，3.703704，11.11111，33.33，100μg/ml的混标溶液，备用。(3)色谱条件：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填料；检测波长：280nm流动相：流动相A为0.1％甲酸溶液，流动相B为甲醇，采用梯度洗脱，流动相比例均为体积百分比体积，洗脱程序如下：0-6min，流动相A为95％→90％，流动相B为5％→10％；6-10min，流动相A为90％→86％，流动相B为10％→14％；10-18min，流动相A为86％→70％，流动相B为14％→30％；18-25min，流动相A为70％→50％，流动相B为30％→50％；25-29min，流动相A为50％→0％，流动相B为50％→100％；29-32min，流动相A为0％，流动相B为100％；流速为0.4/min，柱温为30℃；(4)质谱条件：采用UPLC-QQQMS，接有电喷雾离子源，负离子化模式；喷雾电压45psi；干燥气体氮气；干燥气流量11L/min；干燥气体温度350℃；毛细管电压：负离子3.5kV；扫描范围：m/z50-1000；采用选择离子监控模式优化待测化合物电压，子离子扫描模式：优化子离子、定性离子及二者碰撞能量，多反应监测模式优化各组分分离洗脱条件，最后采用动态多反应监测模式高选择性地分析测定各组分，具体质谱条件优化为：(5)标准指纹图谱的建立：以上述方法作为建立小叶榕干浸膏的指纹图谱的测试手段，取10批小叶榕干浸膏，配置成供试品溶液，将这10批供试品溶液经过HPLC-MS测定，获得10批样品的MRM图，将其中异牡荆素峰设为参照峰，计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积，以此获得以18个共有峰峰形成的指纹图谱；所述18个共有峰的峰面积之和占所有峰面积之和大于90％；(6)以(1)-(4)所述方法作为待测小叶榕干浸膏的指纹图谱的测试手段，制备待测样品的指纹图谱；(7)将待测小叶榕干浸膏的指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，相似度大于0.9。虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。当前第1页1 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