一种检测阿片酊中伪吗啡含量的方法与流程

本发明涉及药物分析领域中的一种检测阿片酊中伪吗啡含量的方法。

背景技术：

阿片酊，英文名为opiumtincture，该产品为棕色液体，与水振摇能起多量泡沫。适用于各种急性剧痛，偶用于腹泻，镇咳。其主要功效成分为吗啡，而吗啡在光照、氧化、重金属离子及碱性条件下均可产生毒性较大的伪吗啡，因此，研制开发一种阿片酊中伪吗啡含量的检测方法一直是亟待解决的新课题。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种阿片酊中伪吗啡含量的检测方法，该方法采用hplc法(浓度、梯度淋洗法)进行检测，该方法具有试剂易得、仪器使用广泛、操作简便、检测成本低等优点。

本发明的目的是这样实现的：一种检测阿片酊中伪吗啡含量的方法，该检测方法包括如下步骤：

(1)色谱条件：

色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱，规格150×4.6mm，5μm

柱温：30℃～40℃

流速：1.3ml/min～1.7ml/min

紫外检测器波长：230nm

进样量：10μl～25μl

流动相：庚烷磺酸钠溶液和甲醇

(2)庚烷磺酸钠的制备：

取庚烷磺酸钠1.1g，加水1000ml溶解，用50％磷酸溶液调ph至2.6±0.1；

(3)供试品溶液的制备：

精密量取阿片酊25ml，置100ml量瓶中，用1％醋酸溶液稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；

(4)对照溶液的制备：

精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，加1％醋酸溶液稀释至刻度，摇匀；精密量取2ml，置10ml量瓶中，用1％醋酸溶液稀释至刻度，摇匀作为对照溶液；

(5)系统适用性溶液制备

取盐酸吗啡对照品适量，加水溶解，制成每1ml中含0.2mg的溶液，量取5ml，加0.4％的三氯化铁溶液1ml，置沸水浴中加热10分钟，放冷，作为系统适用性溶液；

(6)测定方法：

精密量取系统适用性溶液10μl～25μl注入液相色谱仪，记录色谱图，吗啡的保留时间为12-17分钟，伪吗啡的相对保留时间为1.7～2.0，各色谱峰之间的分离度均应大于1.5；分别精密量取对照溶液和供试品溶液10μl～25μl注入液相色谱仪，记录色谱图，计算伪吗啡的含量；

(7)计算公式

式中：

a对：对照溶液主峰面积；

a伪吗啡：供试品溶液中伪吗啡峰面积；

f伪吗啡：伪吗啡校正因子，0.25。

所述测定方法中流动相庚烷磺酸钠溶液和甲醇采用浓度、梯度淋洗法：所述浓度、梯度淋洗法为如下步骤，洗脱开始后0-2分钟，庚烷磺酸钠溶液85％，甲醇15％；洗脱开始后2-38分钟，庚烷磺酸钠溶液由85％至50％，甲醇由15％至50％；洗脱开始后38-39分钟，庚烷磺酸钠溶液由50％至20％，甲醇由20％至80％；洗脱开始后39-53分钟，庚烷磺酸钠溶液20％，甲醇80％；洗脱开始后53-54分钟，庚烷磺酸钠溶液由20％至85％，甲醇由80％至15％；洗脱开始后54-66分钟，庚烷磺酸钠溶液85％，甲醇15％。

所述十八烷基硅烷键合硅胶柱选自安捷伦eclipsexdb-c18柱。

本发明的要点在于它的检测方法，采用hplc(浓度、梯度淋洗法)进行检测。

一种阿片酊中伪吗啡含量的检测方法与现有技术相比，具有试剂易得、仪器使用广泛、操作简便、检测成本低等优点，将广泛地应用于药物分析领域中。

附图说明

下面结合附图及实施例对本发明进行详细说明。

图1是本发明的系统适用性溶液hplc图谱。

图2是本发明的供试品溶液hplc图谱。

图3是本发明的对照溶液hplc图谱。

具体实施方式

以下实例将有助于对本发明的了解，但这些实例仅为了对本发明加以说明，本发明并不限于这些内容。

实施例一

1.色谱条件

色谱柱：agilent(安捷伦)eclipsexdb-c18150×4.6mm5μm，柱温：30℃～40℃，流速：1.3ml/min～1.7ml/min，检测波长：230nm，进样量：10μl～25μl。

2.溶液制备

2.1流动相：庚烷磺酸钠溶液和甲醇

2.2庚烷磺酸钠溶液：取庚烷磺酸钠1.1g，加水1000ml溶解，用50％磷酸溶液调ph至2.6±0.1。

2.3供试品溶液：精密量取阿片酊25ml，置100ml量瓶中，用1％醋酸溶液稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

2.4对照溶液：精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，加1％醋酸溶液稀释至刻度，摇匀；精密量取2ml，置10ml量瓶中，用1％醋酸溶液稀释至刻度，摇匀作为对照溶液。

2.5系统适用性溶液：称取盐酸吗啡对照品20.69mg，置100ml量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，摇匀；量取5ml，加0.4％的三氯化铁溶液1ml，置沸水浴中加热10分钟，放冷，作为系统适用性溶液。

3.测定方法

采用流动相庚烷磺酸钠溶液和甲醇浓度、梯度淋洗法；

洗脱开始后0-2分钟，庚烷磺酸钠溶液85％，甲醇15％；洗脱开始后2-38分钟，庚烷磺酸钠溶液85％→50％，甲醇15％→50％；洗脱开始后38-39分钟，庚烷磺酸钠溶液50％→20％，甲醇20％→80％；洗脱开始后39-53分钟，庚烷磺酸钠溶液20％，甲醇80％；洗脱开始后53-54分钟，庚烷磺酸钠溶液20％→85％，甲醇80％→15％；洗脱开始后54-66分钟，庚烷磺酸钠溶液85％，甲醇15％。

3.1系统适用性试验

取系统适用性溶液，注入液相色谱仪；

吗啡的保留时间为15.058分钟，伪吗啡的相对保留时间为1.8，各色谱峰之间的分离度应大于2.0。

3.2供试品测定

取供试品溶液注入液相色谱仪，记录图谱。

3.3对照测定

取对照溶液注入液相色谱仪，记录图谱。

4.计算结果

式中：

a对：对照溶液主峰面积；

a伪吗啡：供试品溶液中伪吗啡峰面积；

f伪吗啡：伪吗啡校正因子，0.25。

供试品1：

供试品2：

供试品3：

实施例二流动相ph值的选择

其他条件同实施例一，采用庚烷磺酸钠溶液和甲醇腈作为流动相。庚烷磺酸钠溶液：取庚烷磺酸钠1.1g，加水1000ml溶解，用50％磷酸溶液调ph至2.4。

供试品溶液中伪吗啡的色谱峰受相邻杂质峰干扰，无法进行检测。

实施例三流动相的选择

其他条件同实施例一，采用流动相庚烷磺酸钠溶液和乙腈浓度、梯度淋洗法；

洗脱开始后0-2分钟，庚烷磺酸钠溶液85％，乙腈15％；洗脱开始后2-38分钟，庚烷磺酸钠溶液85％→50％，乙腈15％→50％；洗脱开始后38-39分钟，庚烷磺酸钠溶液50％→20％，乙腈20％→80％；洗脱开始后39-53分钟，庚烷磺酸钠溶液20％，乙腈80％；洗脱开始后53-54分钟，庚烷磺酸钠溶液20％→85％，乙腈80％→15％；洗脱开始后54-66分钟，庚烷磺酸钠溶液85％，乙腈15％。

供试品溶液中伪吗啡的色谱峰受相邻杂质峰干扰，无法进行检测。