一种检测复方维生素C和L‑左卡尼汀咀嚼片中左卡尼汀含量的方法与流程

本发明涉及药物分析领域中的一种检测复方维生素c和l-左卡尼汀咀嚼片中左卡尼汀含量的方法。

背景技术：

左卡尼汀(英文名为：carnitine)，又名左旋肉碱。早在1905年，俄国的gulewitsch和krimberg就从牛肉渍计中发现了肉毒碱。1927年，tomita和sendju确定了化学结构。左卡尼汀是食物的组成成份，广泛存在于自然界中，山羊肉中含量最高，约为2.1g/kg，而植物性食物中含量极少甚至没有，被认为是类维生素的营养素。左卡尼汀主要功能是促进脂类代谢,对于肌肉细胞组织的缺血、缺氧，左卡尼汀是其主要能量来源，左尼卡汀适用于慢性肾衰长期血透病人因继发性肉碱缺乏产生的一系列并发症状，临床表现为心肌病、骨骼肌病、心律失常、高脂血症，以及低血压和透析中肌痉挛等。国内外报道的左卡尼汀检测有多种方法，目前常用的有酶测定法、放射性同位素法、光学法、和高效液相色谱法。酶测定法所需试剂大多比较昂贵，操作步骤复杂，耗时较长。同位素法不仅操作烦琐、测定精密度较差，而且存在放射性同位素污染环境和操作者损伤的问题。光学法虽然成本低，但特异性差，灵敏度低，难以满足分析方法学要求。而复方制剂中，药物制剂组成复杂，主成分含量较低，辅料组分干扰主成分色谱峰的检测，导致含量分析困难。目前，未见关于复方制剂中左卡尼汀含量检测的相关文献和专利，因此，研制开发一种复方制剂中左卡尼汀含量的方法是亟待解决的新课题。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种复方维生素c和l-左卡尼汀咀嚼片中左卡尼汀含量的检测方法，该方法采用高效液相色谱法(浓度、梯度淋洗法)进行检测，通过色谱条件的优化，浓度、梯度淋洗时流动相中成分配比的选择和流动相的选择，建立了一种检测复方制剂中左卡尼汀含量的方法，通过该方法检测的左卡尼汀，检测周期短，重现性、准确度、稳定性均能符合要求，且降低了检测成本。

本发明的目的是这样实现的：一种检测复方维生素c和l-左卡尼汀咀嚼片中左卡尼汀含量的方法，该检测方法包括如下步骤：

(1)色谱条件：

色谱柱：c18柱，规格250×4.6mm，5μm

柱温：30-40℃

流速：0.8-1.2ml/min

紫外检测器波长：225nm

进样量：10-50μl

流动相：磷酸盐缓冲液和甲醇

(2)磷酸盐缓冲液的制备：

取磷酸11.5ml，加水稀释至1900ml，用氢氧化钠溶液(1mol/l)约100ml调ph至2.4，加庚烷磺酸钠1.1g，振摇使溶解；

(3)供试品溶液的制备：

取本品适量，精密称定，研细，精密称取细粉适量，相当于左卡尼汀20mg，于100ml量瓶中，加水适量，振摇使溶解，用水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；

(4)对照品溶液的制备：

精密称取左卡尼汀对照品20mg，置100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液；

(5)测定方法：

精密量取对照品溶液10-50μl注入液相色谱仪，重复5次，记录色谱图，左卡尼汀的理论板数不得低于1200，左卡尼汀峰面积的相对标准偏差应≤2.0％；精密量取供试品溶液10-50μl注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，即得；

(6)计算公式

式中：

a对：对照品溶液主峰面积；

a样：供试品溶液主峰面积；

w对：对照品的重量，mg；

w供：供试品的重量，mg；

w平均片重：供试品的平均片重，mg；

w标示量：供试品的标示含量，mg；

p：对照品的纯度，％。

所述测定方法中流动相磷酸盐缓冲液和甲醇采用浓度、梯度淋洗方法，具体为：洗脱开始后0-10分钟，磷酸盐缓冲液98％，甲醇2％；洗脱开始后10-11分钟，磷酸盐缓冲液由98％至80％，甲醇由2％至20％；洗脱开始后11-31分钟，磷酸盐缓冲液80％，甲醇20％；洗脱开始后31-32分钟，磷酸盐缓冲液由80％至98％，甲醇由20％至2％；洗脱开始后32-62分钟，磷酸盐缓冲液98％，甲醇2％；所述c18柱选自安捷伦tc-c18柱。

本发明的要点在于它的检测方法，该方法采用hplc(浓度、梯度淋洗法)进行检测，通过色谱条件的优化，浓度、梯度淋洗时流动相中成分配比的选择和流动相的选择，建立了一种检测复方制剂中左卡尼汀含量的方法。

一种复方维生素c和l-左卡尼汀咀嚼片中左卡尼汀含量的检测方法与现有技术相比，通过该方法检测左卡尼汀的含量，每针样品的检测周期由2小时缩短为1小时，方法学验证结果表明，重现性结果rsd为0.42％、准确度检测结果回收率为100.0％、rsd为0.15％、溶液稳定性结果rsd为0.43％，均能符合要求，且降低了检测成本，将广泛地应用于药物分析领域中。

附图说明

下面结合附图及实施例对本发明进行详细说明。

图1是本发明的空白溶液hplc图谱。

图2是本发明的供试品溶液hplc图谱。

图3是本发明的对照品溶液hplc图谱。

图4原方法的供试品溶液hplc图谱。

具体实施方式

以下实例将有助于对本发明的了解，但这些实例仅为了对本发明加以说明，本发明并不限于这些内容。

实施例一

1.色谱条件

色谱柱：agilent(安捷伦)tc-c18250×4.6mm5μm，柱温：30-40℃，流速：0.8-1.2ml/min，检测波长：225nm，进样量：10-50μl。

2.溶液制备

2.1流动相：磷酸盐缓冲液和甲醇

2.2磷酸盐缓冲液：取磷酸11.5ml，加水稀释至1900ml，用氢氧化钠溶液(1mol/l)约100ml调ph至2.4，加庚烷磺酸钠1.1g，振摇使溶解。

2.3供试品溶液：取本品适量，精密称定，研细，精密称取细粉84.96mg、83.38mg、83.64mg，分别置100ml量瓶中，加水适量，振摇使溶解，用水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液1、2和3。

2.4对照品溶液：称取左卡尼汀对照品20.58mg、21.48mg，分别置100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液1和2。

3.测定方法

采用流动相磷酸盐缓冲液和甲醇浓度、梯度淋洗法；

洗脱开始后0-10分钟，磷酸盐缓冲液98％，甲醇2％；洗脱开始后10-11分钟，磷酸盐缓冲液98％→80％，甲醇2％→20％；洗脱开始后11-31分钟，磷酸盐缓冲液80％，甲醇20％；洗脱开始后31-32分钟，磷酸盐缓冲液80％→98％，甲醇20％→2％；洗脱开始后32-62分钟，磷酸盐缓冲液98％，甲醇2％。

取空白辅料适量配制空白溶液，注入液相色谱仪；

取对照品溶液1注入液相色谱仪，平行进样5针，进样量10-20μl。记录谱图，计算左卡尼汀峰面积的相对标准偏差rsd≤2.0％；取供试品溶液注入液相色谱仪，进样量10-50μl，

记录图谱。

对照品溶液1连续5针的峰面积为：

a1＝33519a2＝33551a3＝33429a4＝33609

a5＝33609a对1平均＝33514rsd＝0.21％

对照品溶液2的峰面积为：

a1＝35162a2＝35151a对2平均＝35156

4.样品测定

取供试液注入液相色谱仪，记录图谱，各重复一次。

供试品1的主峰面积：a1＝23575a2＝23492a样1平均＝23534

供试品2的主峰面积：a1＝23316a2＝23236a样2平均＝23276

供试品3的主峰面积：a1＝23087a2＝23174a样3平均＝23130

5.计算结果

式中：

a对：对照品溶液主峰面积；

a样：供试品溶液主峰面积；

w对：对照品的重量，mg；

w供：供试品的重量，mg；

w平均片重：供试品的平均片重，mg；

w标示量：供试品的标示含量，mg；

p：对照品的纯度，％。

供试品1：

供试品2：

供试品3：

实施例二浓度、梯度淋洗时流动相中成分配比的选择

其他条件同实施例一，采用流动相磷酸盐缓冲液和甲醇浓度、梯度淋洗法；

洗脱开始后0-10分钟，磷酸盐缓冲液85％，甲醇15％；洗脱开始后10-11分钟，磷酸盐缓冲液85％→70％，甲醇15％→30％；洗脱开始后11-31分钟，磷酸盐缓冲液70％，甲醇30％；洗脱开始后31-32分钟，磷酸盐缓冲液70％→85％，甲醇30％→15％；洗脱开始后32-62分钟，磷酸盐缓冲液85％，甲醇15％。

供试品的色谱峰受辅料干扰，无法进行检测。

实施例三流动相的选择

其他条件同实施例一，采用磷酸盐缓冲液和乙腈作为流动相。磷酸盐缓冲液：取磷酸11.5ml，加水稀释至1900ml，用氢氧化钠溶液(1mol/l)约100ml调ph至2.4，加庚烷磺酸钠1.1g，振摇使溶解。

供试品的色谱峰受辅料干扰，无法进行检测。